叢枝菌根真菌研究中土壤滅菌方法綜述

謝 越，楊高文，周翰舒，張英俊

(中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)草地研究所，北京 100193)

植物與叢枝菌根真菌(AMF)共生現(xiàn)象在自然界中分布十分普遍。從1885年第1篇關(guān)于菌根的研究到現(xiàn)在，人們對(duì)這種共生關(guān)系的探索還在不斷進(jìn)行中[1]。在植物生長(zhǎng)過(guò)程中，AMF會(huì)影響幼苗建植[2-3]、植物生長(zhǎng)[4-5]和繁殖[6]。很多研究指出，AMF可以提高植物對(duì)養(yǎng)分的吸收[7-10]，影響水分的代謝[11]，提高植物的產(chǎn)量[12-15]，改善作物品質(zhì)[16-17]，增加植物抗性[18-22]。從生態(tài)學(xué)角度上來(lái)看，不同植物對(duì)不同AMF的依賴性不同，導(dǎo)致植物間競(jìng)爭(zhēng)力發(fā)生改變，從而影響到植物群落的多樣性[23-24]。與此同時(shí)，植物也會(huì)作用于AMF并影響AMF的生物量和多樣性[25-26]，而植物根系分泌物可以促進(jìn)根系周圍的AMF菌絲分支[27]。如今，美國(guó)、澳大利亞以及歐洲不僅在植物個(gè)體水平上對(duì)AMF進(jìn)行研究，也擴(kuò)展到了植物群體水平上，而我國(guó)在植物群體水平上的研究還相對(duì)匱乏[28]。

在AMF研究中，無(wú)AMF對(duì)照是研究AMF作用的關(guān)鍵，因?yàn)橹挥型ㄟ^(guò)與無(wú)AMF條件下植物的生長(zhǎng)反應(yīng)相比較，才能反映AMF對(duì)植物的作用。在對(duì)土壤進(jìn)行滅菌的過(guò)程中，最理想的狀態(tài)是獲得在滅菌過(guò)程中沒有引起任何土壤理化性質(zhì)變化，并且殺滅了所有AMF的滅菌土壤[29]。只有在這樣的滅菌土壤中進(jìn)行試驗(yàn)，才能不引入對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生干擾的其他因素。歐美國(guó)家對(duì)已有的建立無(wú)AMF的方法進(jìn)行了探究[30-31]，而我國(guó)缺乏對(duì)其方法的研究。現(xiàn)有方法或多或少都會(huì)對(duì)土壤理化性質(zhì)以及土壤微生物群落產(chǎn)生影響。本研究將對(duì)現(xiàn)在常用的幾種設(shè)置無(wú)AMF對(duì)照的方法進(jìn)行綜述，旨為研究者根據(jù)目的選擇適宜的方法提供依據(jù)。

1 常用方法

目前，在AMF研究中，常根據(jù)試驗(yàn)條件將滅菌方法分為室內(nèi)滅菌法和室外滅菌法。室內(nèi)滅菌法包括高溫滅菌法、γ射線滅菌法和化學(xué)熏蒸法。高溫滅菌法是通過(guò)高溫來(lái)殺滅土壤中的微生物，從而達(dá)到無(wú)菌狀態(tài)；γ射線滅菌法是依據(jù)γ射線能量高、穿透力強(qiáng)的特點(diǎn)，采用Co60放射出γ射線，使細(xì)胞內(nèi)各種活性物質(zhì)例如DNA之間的C-C鍵發(fā)生斷裂，從而達(dá)到殺死土壤微生物的目的；化學(xué)熏蒸法常采用化學(xué)試劑(如氯仿、甲醛或甲基溴)對(duì)土壤進(jìn)行熏蒸，從而殺滅土壤生物。室外滅菌法包括殺真菌劑苯菌靈抑制法和物理割斷法。苯菌靈是一種廣譜、高效的內(nèi)吸性殺真菌劑，它通過(guò)抑制真菌的細(xì)胞分裂來(lái)達(dá)到滅菌效果；物理割斷法是將丙烯腈-苯乙烯-丁二烯(ABS)管的管外四周開4個(gè)孔，然后用孔徑為35 μm的篩子封住管孔及管底，使植物根部無(wú)法通過(guò)網(wǎng)篩而細(xì)菌等可以通過(guò)。然后將管埋入野外試驗(yàn)地中，每周旋轉(zhuǎn)管45°以切斷進(jìn)入管內(nèi)的外源菌絲。

各種方法都有自己的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)以及不同的適用條件，表1為常用幾種方法的比較。在實(shí)際應(yīng)用中，應(yīng)根據(jù)具體情況選擇對(duì)土壤和環(huán)境影響較小的方法。

表1 常用建立無(wú)AMF對(duì)照方法比較

2 室內(nèi)滅菌法

2.1高溫滅菌法 高溫滅菌通常在120 ℃下滅菌30 min到4 h不等。有研究指出[30]，采用高溫滅菌對(duì)土壤進(jìn)行滅菌的最短時(shí)間為20～30 min，時(shí)間越長(zhǎng)給土壤帶來(lái)的傷害越大。Darbar和Lakzian[31]報(bào)道了高溫滅菌、化學(xué)熏蒸、微波滅菌以及紫外線滅菌幾種滅菌方式對(duì)土壤微生物和化學(xué)性質(zhì)的影響，發(fā)現(xiàn)上述方法中高溫滅菌法對(duì)減少微生物量作用最好。

高溫滅菌法會(huì)影響土壤的理化性質(zhì)(pH值、陽(yáng)離子含量、團(tuán)聚體等)[30,32-33]和生物特性(呼吸作用)。由于高溫滅菌法改變了土壤的理化、生物性質(zhì)，那么勢(shì)必產(chǎn)生對(duì)植物的毒副作用，因此一般經(jīng)過(guò)高溫滅菌的土壤需要放置一段時(shí)間，以使土壤里可揮發(fā)的毒素釋放出來(lái)。對(duì)于毒副作用產(chǎn)生原因的說(shuō)法各不相同。有學(xué)者對(duì)高溫滅菌土壤的營(yíng)養(yǎng)元素進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，滅菌后土壤中可溶性錳含量會(huì)增加[33-35]，并認(rèn)為這是植物毒副作用形成的原因。Wolf等[36]在對(duì)不同土壤類型的試驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)錳含量增加了5倍而鐵的含量卻下降了。Rovira 和Bowen[37]在其試驗(yàn)中采用土壤洗出液培養(yǎng)植物，發(fā)現(xiàn)毒副作用主要來(lái)源于可溶性的物質(zhì)，并認(rèn)為土壤對(duì)植物的毒副作用可能是來(lái)自于有毒的有機(jī)物的形成；Darbar和Lakzian[31]也認(rèn)為對(duì)土壤理化性質(zhì)的改變來(lái)源于可溶性有機(jī)酸的釋放。然而Smith和Smith[35]通過(guò)將高溫滅菌和沒有處理過(guò)的土壤混合之后與沒有處理的土壤進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)高溫滅菌土壤不存在對(duì)植物生長(zhǎng)以及菌根真菌侵染的影響。

許多研究提出接種微生物(真菌和細(xì)菌)可以減輕高溫滅菌所引起的土壤對(duì)植物的毒副作用[37]。Al-Khaliel[38]采用花生(Arachishypogaea)為材料報(bào)道了施用土壤微生物提取液可以促進(jìn)AMF的孢子形成和對(duì)花生的侵染率，從而促進(jìn)了花生的生長(zhǎng)。然而，Manian等[39]對(duì)番茄(Lycopersiconescwlentum)生長(zhǎng)與AMF的關(guān)系中卻得出了相反的結(jié)論。盡管目前關(guān)于土壤其他微生物對(duì)AMF的作用機(jī)理以及相互作用還未研究清楚，但是其他微生物會(huì)干擾AMF的表現(xiàn)和生態(tài)生產(chǎn)力是肯定的[40]。因此，在對(duì)AMF與植物的關(guān)系研究中，設(shè)計(jì)無(wú)菌根真菌對(duì)照試驗(yàn)時(shí)，滅菌土壤應(yīng)該加入篩除了AMF的土壤浸提液，以消除缺少其他微生物對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。

由于高溫滅菌法殺滅了土壤中所有微生物，因此可用于原生土壤中AMF群落對(duì)植物影響的研究，也可以通過(guò)滅菌之后再接種特定菌種來(lái)研究特定AMF菌種或菌群與植物的關(guān)系。在許多研究中還可以看到高溫滅菌法對(duì)AMF的滅菌作用是很有效的。但高溫帶來(lái)的毒副作用是無(wú)法避免的，因此，減少毒副作用對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的干擾是試驗(yàn)設(shè)計(jì)中不可忽視的一個(gè)環(huán)節(jié)。很多研究者在研究中采取滅菌土與接種結(jié)合的對(duì)照來(lái)減小毒副作用的干擾，同時(shí)滅菌后土壤應(yīng)敞開放置一段時(shí)間來(lái)釋放其中的有毒物質(zhì)。總的來(lái)說(shuō)，高溫滅菌法存在一些不足，但由于其操作簡(jiǎn)單、成本低，仍然在菌根研究中被廣泛應(yīng)用。由于其操作條件的限制，該方法較為適用于室內(nèi)試驗(yàn)，對(duì)野外試驗(yàn)來(lái)說(shuō)并不可取。

2.2γ射線滅菌法 有些AMF試驗(yàn)也會(huì)采用γ射線滅菌法[41-42]。采用不同劑量的輻射，將會(huì)產(chǎn)生不同的滅菌效果[43-45]。例如，大多數(shù)土壤在放射量為10 kGy時(shí)會(huì)減少放線菌、真菌和無(wú)脊椎動(dòng)物的量；在20 kGy時(shí)，主要的細(xì)菌就會(huì)死去；當(dāng)放射量增加到70 kGy時(shí)，具有抗輻射能力的細(xì)菌也會(huì)死去。γ射線滅菌法的優(yōu)點(diǎn)在于，它采用的是低溫滅菌方式，所以排除了高溫給土壤帶來(lái)的傷害，因此許多學(xué)者認(rèn)為它是最有效的滅菌方式。

γ射線滅菌法會(huì)引起土壤一些化學(xué)性質(zhì)的改變。但許多研究指出，它對(duì)土壤的理化性質(zhì)和生物活性影響小于高溫滅菌方式[46-48]。McLaren等[49]指出γ射線滅菌后的土壤仍然存在著酶活性并且該土壤對(duì)番茄是沒有毒性的。Salonius等[32]對(duì)高溫滅菌和γ射線滅菌兩種方式對(duì)土壤理化性質(zhì)進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示γ射線滅菌法對(duì)可溶性有機(jī)物和電解質(zhì)的影響小于高溫滅菌法，且經(jīng)γ射線滅菌后的土壤其微生物要比高溫滅菌土壤中生長(zhǎng)得更好。γ射線滅菌法會(huì)影響土壤的化學(xué)性質(zhì)，例如硝態(tài)氮與銨態(tài)氮的比例[46]。McNamara等[44]通過(guò)對(duì)ISI(Institute for Scientyfic Infomation)數(shù)據(jù)庫(kù)過(guò)去50年的相關(guān)文獻(xiàn)考證發(fā)現(xiàn)，γ射線滅菌法是相比于高溫滅菌法、化學(xué)滅菌法的一種高效的、沒有化學(xué)污染的滅菌方法，并提出風(fēng)干土壤后進(jìn)行滅菌處理可穩(wěn)定土壤的化學(xué)性質(zhì)。同時(shí)，對(duì)比γ射線滅菌后接種AMF的土壤與沒有處理過(guò)的土壤，發(fā)現(xiàn)前者的效果比后者低5%，這可能是由于滅菌導(dǎo)致的土壤營(yíng)養(yǎng)元素改變?cè)斐傻摹５牵蒙渚€滅菌法由于成本高，需要專業(yè)人員操作以及其操作的安全性，在以往的研究中此法的采用不及高溫滅菌法普遍。

γ射線滅菌除了對(duì)土壤中原生AMF群落與植物關(guān)系的研究外，同樣也可以通過(guò)滅菌后再接種來(lái)研究特定AMF菌種或群落和植物關(guān)系。現(xiàn)在，γ射線滅菌方法對(duì)土壤性質(zhì)產(chǎn)生的影響是否會(huì)引起對(duì)植物的毒副作用還尚無(wú)定論。同時(shí)，由于γ射線滅菌法滅菌時(shí)對(duì)其他微生物群落也有所影響，因此在對(duì)土壤原生AMF研究的試驗(yàn)設(shè)計(jì)中，設(shè)計(jì)滅菌土與接種的對(duì)照以及施以不含AMF的土壤浸提液是很有必要的。γ射線滅菌法雖然對(duì)土壤的影響小于高溫滅菌法，但由于操作條件的安全性以及高成本，它也不適用于野外試驗(yàn)。

2.3化學(xué)熏蒸法 Brookes等[50]指出，氯仿熏蒸增加了土壤中銨和有機(jī)碳的含量。但Darbar和Lakzian[31]在研究中指出，化學(xué)熏蒸法對(duì)土壤的傷害介于高溫滅菌法和γ射線法之間。很多科學(xué)家對(duì)化學(xué)熏蒸法都提出了具體的操作指導(dǎo)[51]。但由于各種化學(xué)試劑本身的理化性質(zhì)和毒性，熏蒸法都需要對(duì)熏蒸后土壤進(jìn)行通氣，以減少化學(xué)試劑在土壤中的殘留以及對(duì)土壤的傷害。化學(xué)熏蒸法操作比以上兩種方法簡(jiǎn)單，且滅菌效果也不錯(cuò)，許多研究者都采取此方法來(lái)獲得無(wú)AMF的對(duì)照組[52-53]。但是，由于化學(xué)試劑的毒性以及對(duì)環(huán)境的污染作用，例如甲基溴會(huì)分解出溴，這對(duì)臭氧層有破壞作用，導(dǎo)致現(xiàn)在很多人對(duì)化學(xué)熏蒸法并不提倡，并且許多方法在國(guó)外已經(jīng)被禁止使用。因此，本研究將不對(duì)該方法進(jìn)行詳細(xì)描述。

3 室外滅菌法

由于上述方法在操作上的局限性，所以它們?cè)谑覂?nèi)盆栽試驗(yàn)時(shí)更為適用。但盆栽試驗(yàn)在試驗(yàn)環(huán)境上與真實(shí)的環(huán)境相差很大，其試驗(yàn)結(jié)果并不能真實(shí)代表AMF在環(huán)境中的作用。在進(jìn)行野外試驗(yàn)時(shí)，需要操作更為簡(jiǎn)單、工作量小的方法。因此，將介紹以下兩種在野外試驗(yàn)中常用的方法。

3.1苯菌靈抑制法 苯菌靈是目前AMF原位試驗(yàn)中最常用的滅菌方法。在我國(guó)AMF的研究中，也有學(xué)者將該法用于室內(nèi)盆栽試驗(yàn)以獲得低AMF處理[54]。苯菌靈的施用量以及施用頻率將決定其滅菌效果，而Pedersen和Sylvia[55]認(rèn)為苯菌靈的滅菌效果也與施用時(shí)間有關(guān)。基于上述決定因素，Kahiluoto等[45]對(duì)土壤取樣時(shí)間和苯菌靈施用量進(jìn)行了研究，他指出苯菌靈的施用量為20 mg·kg-1土壤時(shí)足以創(chuàng)建一個(gè)無(wú)AMF的對(duì)照，而最有效的苯菌靈施用時(shí)間是在播種前。同時(shí)，苯菌靈的降解速度也會(huì)影響其對(duì)AMF的抑制作用，降解速度會(huì)受到微生物活動(dòng)以及水分含量的影響，在無(wú)植物栽培的土壤中苯菌靈一些分解物的半衰期從2周到7周不等[56]。現(xiàn)在，大多數(shù)試驗(yàn)多采取每2～3周施用一次苯菌靈來(lái)降低苯菌靈的失效[57-58]。O’Connor等[58]發(fā)現(xiàn)，苯菌靈對(duì)AMF的抑制作用也會(huì)隨著苯菌靈施用的深度而降低。Karanika等[23]提到，苯菌靈對(duì)于AMF的侵染的抑制作用可能會(huì)因?yàn)橹参锶郝涞牟煌l(fā)生變化。Pedersen和Sylvia[55]也指出，苯菌靈對(duì)AMF的抑制作用也會(huì)因?yàn)榫N的不同而有所差異。

Hartnett和Wilson[59]、Smith等[60]都認(rèn)為施用苯菌靈對(duì)于野外試驗(yàn)來(lái)說(shuō)非常有用，并且Hartnett和Wilson[59]認(rèn)為在野外試驗(yàn)中施用苯菌靈優(yōu)于其他方法。苯菌靈被認(rèn)為是最好的殺菌劑，因?yàn)樗苡行p少AMF的侵染[61-63]，并對(duì)植物和其他非目標(biāo)生物的副作用最小[64]。O’Connor等[58]報(bào)道，反復(fù)施用苯菌靈只會(huì)稍微增加土壤毒性；Kahiluoto和Vestberg[65]也通過(guò)試驗(yàn)證明，施用苯菌靈不會(huì)產(chǎn)生植物毒素。Hartnett和Wilson[59]指出苯菌靈對(duì)土壤的營(yíng)養(yǎng)元素N的影響小于γ射線滅菌法且不會(huì)升高土壤P的含量[66]。但是，苯菌靈并不是在所有試驗(yàn)中都有良好的抑制表現(xiàn)[67]。近年來(lái)，出現(xiàn)了苯菌靈的一些替代殺菌劑，例如托布津和多菌靈。有研究報(bào)道，托布津?qū)MF侵染有抑制作用，但并沒有提出它可以成為有效的苯菌靈的替代物[68]。因此，苯菌靈依然是使用最為廣泛的殺真菌劑。

據(jù)報(bào)道，施用苯菌靈可能會(huì)對(duì)土壤性質(zhì)和其他生物造成影響。Welsh等[69]通過(guò)對(duì)施用苯菌靈的土壤進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)施用苯菌靈的土壤比無(wú)處理的土壤的pH值低而氧化還原能力強(qiáng)，這樣可以抑制AMF的呼吸作用，從而達(dá)到抑制AMF活性的作用。由于苯菌靈的生物毒性，苯菌靈可能對(duì)寄生真菌[70]和線蟲有抑制作用，如果苯菌靈對(duì)病原微生物和線蟲有影響，那么施用苯菌靈可能會(huì)促進(jìn)植物的生長(zhǎng)，從而干擾試驗(yàn)結(jié)果。與此相反，有人提出苯菌靈對(duì)其他非目標(biāo)生物，如藻類或細(xì)菌的抑制作用很小[71]。Fitter和Nichols[64]以及Hartnett和 Wilson[59]也提出苯菌靈主要作用于AMF。雖然苯菌靈在對(duì)AMF的抑制作用上表現(xiàn)不錯(cuò)，但它和化學(xué)熏蒸法一樣對(duì)環(huán)境有一定的破壞作用[72]。

盡管存在以上還未經(jīng)證實(shí)的問(wèn)題，但是由于其操作方便且對(duì)AMF抑制作用效果較好，苯菌靈抑制法仍然被大多數(shù)人所認(rèn)可并廣泛應(yīng)用于野外試驗(yàn)中[62,73-74]。但是，如何施用苯菌靈才能穩(wěn)定并提高苯菌靈對(duì)AMF的抑制作用，減少其對(duì)環(huán)境的影響，目前還沒有一個(gè)具體的指導(dǎo)。在今后的研究中，如何減少AMF對(duì)其他微生物潛在的抑制作用是試驗(yàn)設(shè)計(jì)中需要考慮的因素。由于苯菌靈屬于內(nèi)吸性殺真菌劑，是否可以在試驗(yàn)前幼苗建植時(shí)就對(duì)植物施以苯菌靈，從而達(dá)到減輕對(duì)其他生物的影響可以在以后的研究中進(jìn)行探討。此外，尋找一種新的、對(duì)AMF專一性更好的苯菌靈替代物也是解決問(wèn)題的一個(gè)方法。

3.2物理割斷法 如何實(shí)施野外試驗(yàn)且對(duì)環(huán)境無(wú)害是許多學(xué)者迫切想解決的問(wèn)題。根據(jù)多年對(duì)AMF的研究，Johnson等[75]設(shè)計(jì)了一種利用物理原理來(lái)設(shè)置無(wú)AMF環(huán)境的方法：采用內(nèi)徑為18 mm、外徑為2 mm的ABS管，在管外四周開4個(gè)窗戶，總面積大約為管外表面積的50%，然后將孔徑為35 μm的篩子粘到管內(nèi)以及管底，使得植物根部無(wú)法通過(guò)網(wǎng)篩而細(xì)菌等可以通過(guò)，在試驗(yàn)中將滅好菌的土壤填入管中，然后將管埋入野外試驗(yàn)地中，并每周將管旋轉(zhuǎn)45°以切斷外源菌絲進(jìn)入管內(nèi)。這個(gè)裝置需要注入事先滅好菌的土，因此仍然會(huì)存在其他滅菌方法帶來(lái)的危害。

這個(gè)方法優(yōu)于其他方法的地方在于，在原位試驗(yàn)中，它可以保證植物在無(wú)菌土壤中生長(zhǎng)的同時(shí)還可以與外界環(huán)境進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)元素和水分的交換，使試驗(yàn)可以在更接近真實(shí)的自然條件下進(jìn)行。同時(shí)，試驗(yàn)證實(shí)該方法將AMF侵染率從55%降低到了10%[75]。在隨后的研究中，許多學(xué)者對(duì)該方法進(jìn)行了一些細(xì)微的改變，使得該方法可以用于AMF的其他研究方向中。例如，Johnson等[76]將這個(gè)方法運(yùn)用于AMF對(duì)營(yíng)養(yǎng)元素的轉(zhuǎn)運(yùn)研究中；Cheng和Baumgartner[77-78]通過(guò)此法切斷葡萄(Vitisvinifera)藤和金花菜(Medicagohispida)之間的菌絲，進(jìn)而研究了兩種植物間的氮素轉(zhuǎn)換；Nottingham等[79]和Moyano等[80]都根據(jù)物理隔斷方法研究了菌根呼吸作用；Duan等[81]采用此法研究了土壤擾動(dòng)和植物殘留物對(duì)AMF侵染和菌絲生長(zhǎng)的影響。

但是，Johnson[75]同時(shí)提出這個(gè)方法也會(huì)導(dǎo)致破壞土壤與網(wǎng)篩界面上的團(tuán)聚體以及降低這個(gè)區(qū)域土壤的孔隙度，會(huì)對(duì)PVC管與周圍環(huán)境的水分和營(yíng)養(yǎng)元素交換造成一定的影響。然而，采用這個(gè)方法展開原位試驗(yàn)不用擔(dān)心像化學(xué)方法一樣帶來(lái)的環(huán)境問(wèn)題，且可以有效控制AMF的侵染。

4 總結(jié)與展望

從以上綜述可以看出，在今后的研究中應(yīng)根據(jù)不同的研究對(duì)象采用不同的滅菌方法。高溫滅菌法和γ射線滅菌法由于殺滅了土壤中所有的生物，因此可通過(guò)外緣接種AMF來(lái)研究特定真菌或菌群與植物關(guān)系；而化學(xué)熏蒸法、苯菌靈抑制法和物理割斷法一般用于土壤原生AMF的研究。

同樣，不同的試驗(yàn)條件也應(yīng)采取不同的滅菌方法。在室內(nèi)試驗(yàn)中，γ射線滅菌法比高溫滅菌法對(duì)土壤理化性質(zhì)影響較小。因此，在條件允許的情況下，γ射線滅菌法比高溫滅菌法所帶來(lái)的對(duì)土壤的影響更小，從而對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的干擾更小更好，但兩種方法由于操作限制不太適用于野外試驗(yàn)；化學(xué)熏蒸法的滅菌效果不錯(cuò)，但是其污染性使其備受爭(zhēng)議。在室外試驗(yàn)中，苯菌靈抑制法可能會(huì)影響到土壤中其他生物，但對(duì)土壤理化性質(zhì)影響較小，且其抑制效果不穩(wěn)定。物理割斷法對(duì)其他微生物和環(huán)境沒有影響，但其可能會(huì)在網(wǎng)篩界面和土壤之間形成孔隙，從而影響水分和營(yíng)養(yǎng)元素的交換。

由于人們對(duì)AMF研究興趣的日益濃厚，相信不久的將來(lái)上述方法將得到改進(jìn)。在以后的試驗(yàn)設(shè)計(jì)中，減少或避免這些因素對(duì)試驗(yàn)的干擾是必須考慮的。高溫滅菌法和γ射線滅菌法可以通過(guò)加入土壤浸提液來(lái)減輕對(duì)土壤微生物的影響，但不能避免其對(duì)土壤理化性質(zhì)的影響；在苯菌靈抑制法中，若要使滅菌效果有效且不對(duì)環(huán)境造成傷害，必須在試驗(yàn)前進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，嚴(yán)格確定苯菌靈的施用量和頻率。另外，提高苯菌靈的內(nèi)吸性或在幼苗期使用苯菌靈，或許可以減少苯菌靈的用量，但這需要進(jìn)一步驗(yàn)證。同時(shí)，尋找對(duì)環(huán)境無(wú)影響的苯菌靈替代品，或研發(fā)可通過(guò)植物葉片吸收的、對(duì)植物和環(huán)境無(wú)害的化學(xué)試劑則可避免對(duì)土壤生物和環(huán)境的負(fù)面影響。物理割斷法在旋轉(zhuǎn)時(shí)會(huì)產(chǎn)生空隙從而影響物質(zhì)的交換，可對(duì)試驗(yàn)裝置進(jìn)行改進(jìn)以減少旋轉(zhuǎn)所產(chǎn)生的空隙。總的來(lái)說(shuō)，尋找能抑制AMF的活性、新型環(huán)保的化學(xué)試劑是改進(jìn)滅菌方法發(fā)展新趨向，這將對(duì)室內(nèi)室外試驗(yàn)都有很大的促進(jìn)作用，這將進(jìn)一步推動(dòng)叢枝菌根真菌的研究。

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