樹莓組織培養中外植體污染防止的研究

王 禹

（黑龍江省農業科學院園藝分院，哈爾濱 150069）

樹莓屬于薔薇科（Rosaceae）懸鉤子屬（RubusL.），是近幾年世界發展迅速的第三代新興水果。其鮮果含有多種人體必需的營養成分，并有較高的藥用價值；果實除鮮食外，還可制成果汁、果酒和清涼飲料，深受消費者的喜愛。樹莓推廣種植與產業化開發前景廣闊，但傳統的根蘗分株繁殖方法，難以滿足生產對大量優質苗木的需求。應用組織培養繁育樹莓苗木可提高繁殖系數和苗木質量。在植物組織培養過程中，控制外植體污染是組培發生的關鍵。本實驗探索了抑制樹莓外植體污染的有效途徑，為快繁技術研究奠定了基礎。

1 實驗材料及方法

1.1 實驗材料

試驗樹莓品種為“費爾杜德”和“哈瑞太茲”，采用的外植體為腋芽。將采集的樹莓當年生枝條去除葉片及葉柄部分，將枝條剪成帶1～2個腋芽的莖段，在流水狀態下沖洗10min。消毒程序：70%的酒精中浸30s→無菌水沖洗2～3次→0.1%HgCl2中浸泡→無菌水沖洗2～3次，接種到初生培養基上。試驗研究外植體在0.1%HgCl2溶液中的適宜消毒時間和培養基附加抗生素對外植體污染的影響。

1.2試驗方法

初生培養基采用MS＋1mg／L 6－BA＋0.3mg／L IAA＋20g／L蔗糖，抗生素（頭孢曲松鈉）附加到培養基中，每一處理20瓶，每瓶2個外植體，實驗重復3次，取平均值。所有培養基都經高壓蒸汽滅菌20min（120～125℃，1.0～1.2大氣壓下），頭孢曲松鈉經過濾滅菌。

調查：

2 結果與分析

2.1 外植體在0.1%HgCl2溶液中的適宜消毒時間

表1 0.1%HgCl2溶液消毒時間對外植體污染的影響

試驗為了觀察外植體污染率初生培養基上未添加抗生素。從表1可以看出8、10、12min處理外植體污染率低；12min處理的萌芽率低，10min處理的萌芽率雖沒有降低，但是萌芽速度開始減慢。綜合比較，外植體在0.1%HgCl2溶液中消毒時間應選8min為宜。

2.2 培養基附加抗生素對外植體污染的影響

表2 抗生素對外植體污染的影響

從表2中看出初生培養基附加抗生素后有效地抑制了外植體污染。費爾杜德和哈瑞太茲分別加入60mg／L、80mg／L抗生素，萌芽率最高，污染率較低，芽生長良好。

結合表1和表2得出雖然高濃度的抗生素可有效地控制外植體污染，但是它會對芽萌發起到抑制作用，致使芽生長不健壯；相反低濃度的抗生素不能有效的抑制污染；適宜的抗生素濃度會對芽萌發起到促進作用，且不會對芽的生長造成不良影響。

3 討論

和加衛等［1］認為未萌發的腋芽是樹莓快速繁殖的最佳外植體。樸日子等［2］認為腋芽是無刺紅樹莓快繁的理想外植體，芽生長快，且遺傳性穩定，莖尖易褐變死亡。本試驗選擇了帶腋芽的嫩枝莖段為外植體。帶腋芽的嫩枝莖段在田間易于取材，數量多，外層包裹的芽鱗片易于剝離，在生長培養基上啟動率高。

目前對內生菌防治的最有效辦法是使用抗生素［3］。研究表明：直接在培養基中加入抗生素能有效控制這類污染，然而這對培養材料也具有致毒作用并延緩其生長［4］。Leifert報道在培養基中加入抗生素結果使飛燕草的增殖和生根都受到阻緩［5］。本實驗在培養基中附加了抗生素，有效地抑制了外植體污染，但是高濃度的抗生素會抑制芽的萌發，造成芽生長發育不良；抗生素對不同的品種影響不同，因此抗生素的選用也要因品種而異。

4 結論

外植體在0.1%HgCl2溶液中消毒時間為8min。初生培養中費爾杜德和哈瑞太茲分別附加60mg／L、80mg／L抗生素，萌芽率最高，污染率較低，芽體萌發效果好。

［1］ 和加衛，徐中志，畢海林，等.樹莓組織培養與快速繁殖技術研究［J］.西南農業學報，2006，19（4）：754－756.

［2］ 樸日子，曹后男，陳艷秋，等.無刺紅樹莓組織培養快速繁殖技術研究［J］.吉林農業大學學報，2006，28（4）：411－414.

［3］ 李海航，潘瑞熾.青霉素在高等植物中的應用［J］.植物生理學通訊，1987（5）：1.

［4］ Dodds J R，Roberts L W.Some Inhibitory Effects of Gentamycin on Plant Tissue Culture［J］.In Vitro，1981，17：467－470.

［5］ Leifert C，Morris C，Waites WM.Ecology of Microbial Saprophytes and Pathogens in Tissue Culture and Field－grown Plant：Reasons Forcontamination Problems in Vitro［J］.CRC Crit Rev，Plant Science，1994，13：139－183.

［6］ 曹孜義，劉國民.實用植物組織培養技術教程［M］.蘭州：甘肅科學技術出版社，1996：1－8.

［7］ 董玉芝，王曉煒，蔣萍.樹莓組織培養及植株再生［J］.新疆農業大學學報，2003，26（1）：28－30.

［8］ 胡建剛，黃巧興，沈秋云.1994.黑樹莓的試管繁育［J］.植物生理學通訊，30（5）：356.

［9］ 王文芝.樹莓果實營養成分初報［J］.西北園藝，2001（2）：15－16.

［10］ 徐桂娟，羅曉芳.黑樹莓的組織培養與快速繁殖［J］.北京林業大學學報，2002，24（1）：99－100.