不同產地決明子的有效成分含量差異與品質評價

紀亞明

(北京小湯山醫院，北京 102211)

決明子是豆科決明屬植物決明(Cassia obtusifolia L．)或小決明(Cassia tora L．)的成熟種子，具有清肝、明目、利水、通便的功效，臨床上常用于治療高血脂、高血壓、便秘、口腔潰瘍等病癥，具有較好的臨床療效［1－2］。決明子主要產于安徽、江蘇、浙江、廣東、廣西、四川等省區，通過檢測不同產地決明子的蒽醌、大黃酚、橙黃決明素、總蒽醌的含量差異，表明不同產地的決明子質量存在一定的差異［3－4］，但是較少有綜合多個指標的評判，因此評判方法存在一定的局限性。因此，筆者建立基于橙黃決明素、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚、總蒽醌含量的決明子品質綜合評判方法，結果表明，該方法方法簡便、快速、靈敏、準確，能夠全面系統地評價決明子化學品質，現將結果分析如下。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀(惠普HP－1110四元泵，HP－1110 DAD檢測器，HP Chemstation化學工作站);KQ3200超聲波清洗器(120W，40kHz，昆山市超聲儀器有限公司);電子天平(德國賽多利斯)。

試劑:甲醇為色譜純;其它試劑均為分析純;水為娃哈哈純凈水;所有試劑均經0．45um的濾膜濾過。

對照品:橙黃決明素、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚對照品，均購自中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用。

藥材:分別從陜西、山東、河南、安徽、湖北、云南、四川采購，每個地方各采購3個批次，分別標記為，A11、A12、A13、A21、A22、A23、A31、A32、A33、A41、A42、A43、A51、A52、A53、A61、A62、A63、A71、A72、A73，通過我院經驗豐富的教授鑒定為決明子為豆科植物決明(Cassia obtusifolia L．)或小決明(Cassia tora L．)的成熟種子。

2 方法與結果

2．1 色譜條件

Kromasil C18(250mm ×4．6mm，4μm);C2H3N:1%CH3COOH為流動相;室溫;1ml/min;檢測波長為254nm，洗脫時間為45min，梯度洗脫條件見表1。

表1 梯度洗脫條件

2．2 對照品溶液制備

精密稱取適量的干燥橙黃決明素、大黃素、大黃酚

作者簡介:紀亞明(1965－)，男，主管中藥師，主要研究方向:中藥調劑。

收稿日期:2012－06－11

修回日期:2012－07－08

和大黃素甲醚對照品，加入甲醇定容成100ml，超聲溶解，獲得濃度分別為橙黃決明素 20ug/ml、大黃素15.5ug/ml、大黃酚 51ug/ml、大黃素甲醚 12ug/ml的混合溶液。

2．3 供試品溶液制備

精密稱取不同產地的過三號篩的決明子藥材粉末各0．5g，置于50ml容量瓶中，移液管精密加入50ml甲醇，精密稱重，超聲30min后放冷，再稱定重量，滴管補足減失的甲醇，搖勻，濾膜濾過。精密量取25ml續濾液，蒸干，加入30ml 10%鹽酸溶液并置于水浴中加熱水解1h，放置室溫冷卻后，用30ml氯仿振搖提取并濾過，共提取3次，合并濾過液，回收溶劑至干，殘渣用無水乙醇溶解，轉移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，0．45um的濾膜濾過，取續濾液備用。

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．4 線性關系考察

分別精密吸取混合對照品溶液 2、4、8、10、15μl進樣，以各對照品的峰面積為縱坐標，橙黃決明素、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的質量(μg)為橫坐標，繪制標準曲線，求算回歸方程，結果表明，橙黃決明素在0.04ug～0．3ug范圍內線性關系良好，回歸方程為，Y=103872214X+62 273，r=0．999 9;大黃素在 0．031－0.232 5ug范圍內線性關系良好，回歸方程為Y=108721X －2 102，r=0．999 9;大黃酚在 0．102ug～0.765ug范圍內線性關系良好，回歸方程為 Y=78799X+9 037，r=0．999 9;大黃素甲醚在 0．024ug ～0.18ug范圍內線性關系良好，回歸方程為Y=93221X－1 322，r=0．999 8。

2．5 精密度試驗

精密吸取混合對照品溶液10μl，重復進樣5次，測定各指標成分峰面積，計算各指標成分精密度，結果表明，橙黃決明素 RSD=0.73%，大黃素 RSD=0.41%、大黃酚 RSD=0.94%，大黃素甲醚 RSD=0.48%，RSD均＜2%，各指標成分精密度均良好。

2．6 重復性試驗

按供試品測定方法測定，對同一批樣品重復測定5份，計算樣品中橙黃決明素、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量。結果表明，橙黃決明素RSD=1．13%，大黃素RSD=1．53%、大黃酚RSD=1．04%，大黃素甲醚RSD=0．96%，RSD均＜2%。

2．7 穩定性試驗

取任一供試品溶液，按供試品測定方法測定，分別于配制后0，2，4，8，24小時進樣，計算樣品中橙黃決明素、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量。結果橙黃決明素RSD=1．09%，大黃素 RSD=1．47%、大黃酚RSD=1．11%，大黃素甲醚 RSD=0．88%，RSD 均 ＜2%，表明供試品溶液在24h內基本穩定。

2．8 加樣回收率試驗

精密稱取20份已知含量的任一批號的供試品，精密加入等量橙黃決明素、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對照品，揮干溶劑后，按供試品溶液的制備方法制備，測定，計算回收率，結果表明，橙黃決明素平均回收率100．19%。RSD=0．48%，大黃素平均回收率99.69%。RSD=0．62%，大黃酚平均回收率99．71%。RSD=0．34%，大黃素甲醚平均回收率 99．55%。RSD=0．62%，表明該方法可行。

2．9 樣品測定及結果

精密吸取混合對照品溶液與不同產地供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀進行測定，每個批次測定3次，計算平均值，測定結果見圖1，表2。

表2 不同產地決明子藥材蒽醌成分測定結果

2．1 0 不同產地決明子樣品聚類分析

圖1 決明子的HPLC色譜圖

圖2 不同產地決明子樣品聚類分析

由圖2結果可知，不同產地批次的決明子可歸為3 類，分別為 A31、A32、A33、A41、A42、A43、A71、A72、A73為一類，即分別為河南、安徽、四川;A21、A22、A23為一類即為山東;其余 A11、A12、A13、A51、A52、A53、A61、A62、A63為一類，即為陜西、湖北、云南，再由表2各成分含量可知，河南、安徽、四川區域決明子中蒽醌含量較高，其次是陜西、湖北、云南，最差的為山東。

3 討論

通過測定樣品的全波長掃描圖，顯示幾個蒽醌類成分最大吸收波長相似，均在254nm處呈現強吸收，因此本文以254nm作為檢測波長，這與文獻的報道相符［5］。洗脫條件考察了甲醇:水(60∶40 及 57∶43)、乙腈:水(25∶75)、乙腈:水(30∶70 及 25∶75)和甲醇:1%醋酸(60∶40 及 57∶43)、乙腈:1%HAC(25∶75)恒速洗脫的圖譜的分離效果、出峰時間及樣品的其余成分的干擾性，結果表明，雖然乙腈:1%HAC(21∶79)的分離效果好、出峰時間適宜且不受其余成分干擾，但是時間太長，因此采用本文梯度洗脫條件，既保證了不同成分的分離效果，又能縮短洗脫時間。

決明子中的橙黃決明素能顯著降低高脂血癥大鼠的 TC、LDL －C 和 TG［6］，大黃素具有抗炎、抑菌、保肝、抗癌、保護腎臟、瀉下、保護胰腺、利尿、利膽、降低內毒素等作用［7］，大黃酚具有提高記憶力及抗衰老作用，大黃素甲醚能夠保護急性肝損傷，對缺血再灌注損傷也具有保護作用［8－9］。本文的研究結果表明，不同產地決明子中蒽醌成分含量存在顯著差異，其中河南、安徽、四川區域決明子中蒽醌含量較高，其次是陜西、湖北、云南，最差的為山東。綜上所述，綜合橙黃決明素、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚和總蒽醌含量的分析方法，可更靈敏地表征決明子的品質差異，為決明子的質量控制提供參考及商品規格劃分提供依據，采購優質的決明子可從河南、安徽、四川采購。

［1］侯長軍，張平平，霍丹群．決明子的應用研究進展［J］．海峽藥學，2007，19(7):7 －9．

［2］曹群．炮制方法對決明子中蒽醌類成分含量的影響［J］．西部中醫藥，2012，25(6):21 －22．

［3］張毅，黃小平，翁代群，等．HPLC測定不同產地決明子中蒽醌類成分［J］．中國中藥雜志，2008，33(23):2797 －2799．

［4］胡軼娟，萬麗，張加雄，等．高效液相色譜法測定不同產地決明子中橙黃決明素含量［J］．時珍國醫國藥，2006，17(7):1138 －1139．

［5］蔣波，高珣，畢開順，等．HPLC法同時測定六味安消膠囊中蒽醌類成分含量［J］．中藥材，2009，32(6):975 －977．

［6］李明元，羅孟軍，葉娉，等．橙黃決明素的降血脂作用研究［J］．中藥藥理與臨床，2008，6(9):24 －26．

［7］張斯時．大黃素的藥理作用研究概況［J］．中國醫藥導報，2006，23(11):12－14．

［8］張麗雁，宿文輝，熊瑛，等．大黃素甲醚對大鼠急性肝損傷的保護作用［J］．中國基層醫藥，2007，14(12):2014 －2015．

［9］陳立英，廖仁昊，蘇立凱，等．腦缺血預處理聯合大黃素甲醚對大鼠腦缺血再灌注后炎性反應影響的臨床觀察［J］．北京醫學，2007，29(9):566－567．