桑葉多糖對糖尿病大鼠Resistin蛋白表達的影響

任巖海，劉洪鳳，宋鐵軍，韓智學(xué)

(1．牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院，黑龍江 牡丹江 157011;2．牡丹江醫(yī)學(xué)院，黑龍江 牡丹江 157011;3．牡丹江醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院，黑龍江 牡丹江 157011)

隨著人們生活水平的提高，糖尿病的發(fā)病率呈逐年上升趨勢。大量研究表明，胰島素抵抗是2型糖尿病的主要病理生理機制，因此，針對胰島素抵抗的治療和預(yù)防研究對于治療T2DM至關(guān)重要。近年來的研究證實，脂肪組織在胰島素抵抗及胰島素抵抗相關(guān)疾病的發(fā)生發(fā)展過程起著關(guān)鍵性的作用。抵抗素是Steppan等人發(fā)現(xiàn)的源于脂肪組織中的分泌型多肽，抵抗素在白色脂肪組織中特定表達且與T2DM關(guān)系密切。以Resistin為靶標(biāo)已經(jīng)成為T2DM的熱點研究課題［1］。

桑葉是桑科桑屬植物桑的葉子。桑葉有降血糖作用。研究表明，桑葉多糖(mulberry leaves polysaccharide，MLP)是其降血糖作用的主要功效成分［2－6］。本實驗通過觀察MLP對T2DM大鼠的Resistin蛋白表達的影響，探討MLP對T2DM大鼠的降糖機理，為桑葉資源的綜合開發(fā)利用提供科學(xué)的實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 材料

清潔級Wistar大鼠(牡丹江醫(yī)院動物實驗室提供，動物許可證號:SCXK黑2006－010);鏈脲佐菌素(Sigma公司);MLP(南京澤朗醫(yī)藥技術(shù)有限公司)。

1．2 方法

1．2．1 大鼠模型的制備及分組

Wistar大鼠80只，隨機選取70只造模，高脂高糖飲食喂養(yǎng);另取大鼠10只，給以基礎(chǔ)飼料飲食。8周后，尾靜脈一次性注射鏈脲佐菌素25mg/kg;A:空白組大鼠，注射相同體積的檸檬酸鈉－檸檬酸緩沖液。72h取尾靜脈血測定，以11.1mmol/L≤FBG＜33.3mmol/L且伴有糖耐量減退和IR為T2DM模型制備成功，余者棄掉。將造模成功的40只大鼠隨機分為4組:B:模型對照組及 C、D、E 組:1．0、0．5、0．25g/kg/d MLP 高、中、低劑量治療組。A、B組腹腔注射相同體積生理鹽水，C、D、E組腹腔注射桑葉多糖，用藥12周后，空腹取材后處死大鼠。

1．2．2 總蛋白質(zhì)的提取

腎周白色脂肪組織提取0．1g，加入細胞裂解液勻漿后移入EP管中，冰浴10min備用。細胞超聲破裂儀碎裂細胞，分光法測蛋白濃度后等濃度分裝，－70℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

1．2．3 Resistin 蛋白質(zhì)的分離

首先配制分離膠(12%)、濃縮膠(5%)。凝膠制成后取6只Ep管，分別加入SDS－PAGE低分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)上樣液 10μl;A、B、C、D、E 組蛋白上樣液各40μl。開始電泳，當(dāng)條帶距離凝膠邊緣2cm處，切斷電源停止電泳，進行染色和脫色，用凝膠成像系統(tǒng)掃描分析電泳結(jié)果。

1．3 統(tǒng)計方法

實驗數(shù)據(jù)用SPSS13．0軟件處理。

2 結(jié)果

SDS－PAGE電泳結(jié)果圖像如圖1所示:Marker為蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)，分子量12．5KD為 Resistin蛋白。Resistin/Marker灰度比值見表1所示:模型組Resistin蛋白表達為比正常組顯著增高(P＜0．01);與模型組比較，桑葉多糖高、中、低劑量治療組Resistin蛋白表達顯著降低(P＜0．01)。

圖1 大鼠脂肪細胞Resistin蛋白質(zhì)表達產(chǎn)物分析

表1 桑葉多糖對大鼠脂肪細胞Resistin蛋白質(zhì)表達的變化(±s)

表1 桑葉多糖對大鼠脂肪細胞Resistin蛋白質(zhì)表達的變化(±s)

注:與 A 組比較，*P ＜0．01;與 B 組比較，#P ＜0．01。

組別n Resistin/Marker A 10 0．18 ±0．07 B 10 0．32 ±0．08*C 10 0．25 ±0．05*#D 10 0．22 ±0．07*#E 10 0．28 ±0．06*#

3 討論

2型糖尿病是一種代謝紊亂性疾病。IR貫穿于2－DM的整個發(fā)生發(fā)展過程中［7－10］。本實驗結(jié)果表明，MLP能有效降低2－DM大鼠白色脂肪組織Resistin蛋白表達，說明MLP可能是通過抑制脂肪組織抵抗素的表達，降低IR水平，從而降低2－DM大鼠的胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)，從而達到治療糖尿病的目的。但MLP降糖的其他機制有待于進一步深入研究探討。實驗研究表明，桑葉多糖具有較好的降血糖作用，且作用機制是多方面的，值得對其進行深入研究。

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