江蘇省東臺地區豬圓環病毒病的流行病學調查

徐 鑫 徐羅康 季愛芳 趙海坤

（1.江蘇省東臺市農產品質量檢測中心，東臺 224200；2.江蘇省常州市生態技術應用研究所，常州 213131）

豬圓環病毒2型是近幾年來發現的一種單鏈環狀DNA病毒，該病與豬的多種疾病綜合征有關，該病毒主要引起斷奶豬多系統衰竭綜合征，導致豬體免疫抑制，從而繼發或并發其他疾病。豬圓環病毒最早于1991年在加拿大發現，而后迅速蔓延到世界各地。國外資料顯示，絕大多數豬群呈血清學陽性[1]。目前，由圓環病毒引發豬的多種綜合征已成為導致養豬場經濟損失的主要原因之一，是養豬業面臨的殺手。東臺地區自2006年以來，一直連續發生“生豬高熱病”，給東臺養豬業造成了巨大的經濟損失，疫情嚴重的鄉鎮豬的存欄量減少了60%以上，不少中小型豬場因此而倒閉[2]。本次流行病學調查旨在通過對東臺地區豬血清樣本進行檢測，系統分析PCV2在豬群中的感染及流行規律，為PCV2的防治提供科學依據，為制定科學防控措施提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑

6.4 μg/ml重組蛋白抗原；標準小牛血清為杭州四季青生物制品公司產品；羊抗豬IgG酶標抗體（HRP）為Rockland公司產品（使用前1∶5000稀釋）；低分子量蛋白標樣為Fermentas公司產品；牛血清白蛋白（BSA）購自華美生物工程公司

分析純級國產化學試劑：包被緩沖液（0.05M，Na2CO3/ NaH CO3，pH9.6）、PBS（每1 000 ml去離子水中NaCl 8 g，KCl 0.2 g，Na2HPO41.44 g，KH2PO40.24 g，pH7.4）、PBST（0.01 mol/L，pH7.4，PBS+0.5% Tween-20）、底物溶液（24.3 ml 0.1mol/L檸檬酸、25.7 ml 0.2mol/L 、Na2HPO4、50 mlDDW）、2 mol/L H2SO4；

實驗室保存的PCV2陽性血清、PCV2陰性血清。

1.1.2 待檢樣品的來源與處理

被檢血清樣本采自東臺市東蹲片、東南片、安梁富片、堤西片、市區（屠宰場）5個不同地區，采集范圍覆蓋全市24個鎮、區計50個豬場、1個屠宰場。除經產母豬采用耳靜脈采血外，其余豬全部采用前腔靜脈采血法無菌采血，3～5 ml/頭，以4 000 r/min的速度離心5 min后共獲得血清249份，－20℃保存備用。采樣豬包括經產母豬、屠宰豬、中等大育肥豬、斷奶仔豬及哺乳仔豬，所有采樣豬均為未免疫豬。

1.2 方法

1.2.1 試驗方法

采用已建立的間接 ELISA檢測法。

1.2.2 試驗步驟

在聚苯乙稀微孔酶標板上，先用純化好的重組蛋白在最適包被條件下包被酶標板，封板膜封板4 ℃過夜；再在96孔U形底聚丙微量板上用PBS分別將待檢血清作1∶40稀釋；將包被好的酶標板傾去孔內液體，用PBST（0.01 mol/L，pH7.3，PBS+0.5% Tween-20）洗滌3次，5 min/次，在吸水紙上拍干，加入5%牛血清封閉液，200 μL/孔，37 ℃反應3 h；封閉后，與前面一樣進行洗滌，分別加入稀釋好的待檢血清100 μL/孔加入酶聯反應板，同時作PCV2陽性血清和陰性血清對照，37 ℃反應2 h；洗滌后，加入1∶5 000稀釋的HRP-羊抗豬IgG二抗，100 μL/孔，在37 ℃反應2 h；洗滌后每孔加入新鮮配制的底物溶液100 μL，37 ℃顯色15 min，加2 mol/L H2SO4100 μL終止液終止反應，在酶聯檢測儀上讀處OD490值，進行結果判定。

2 結果與分析

2.1 血清樣品數量

共獲得249份豬血清，其中經產母豬血清28份，屠宰豬血清21份，中豬血清100份，斷奶仔豬血清60份，哺乳仔豬血清40份。

2.2 檢測結果

按照研究已建立的間接ELISA檢測方法及其陰陽性臨界值的確定原則，即樣本OD490≥0.4，判定為陽性，樣本OD490＜0.4的判定為陰性。通過對249份豬血清的檢測，共發現PCV2抗體陽性血清175份，其中經產母豬陽性血清26份，屠宰豬陽性血清17份，中豬陽性血清69份，斷奶仔豬陽性血清34份及哺乳仔豬陽性血清29份；不同區域豬血清陽性率不相同，東蹲區80.88%，東南區70%，安梁富區65%，堤西區55%以及市區80.95%；這次試驗所檢測的豬血清樣品采自于東臺地區51個豬場（其中20個規模場、30個散養場、1個屠宰場），分布于東臺5個區（東蹲區、東南區、安梁富區、堤西區、市區），共有陽性豬場51個，陽性豬場率為100%；經產母豬抗體陽性率92.86%，屠宰豬抗體陽性率80.95%，中豬抗體陽性率69%，斷奶仔豬抗體陽性率56.67%及哺乳仔豬抗體陽性率72.5%，總平均陽性率為70.28%；不同養殖方式豬血清陽性率不同，規模場73.91%，散養場62.22%。

結果顯示，不同生長階段豬群和不同規模豬群的PCV2抗體均具有一定的差異性，具體分析可見后面討論章節。

3 討論

用已建立的ELISA方法初步進行了送檢血清樣品的檢測，從檢測的結果來看，目前我國的豬群中廣泛存在PCV2的抗體，249份中175份呈陽性，陽性率達70.28%，這與臨床上PCR檢測PCV2核酸陽性率70.70%具有一定的相關性。

本試驗血清是隨機采樣的，涉及東臺不同類型的豬只包含了母豬、大豬、中豬、斷奶仔豬及哺乳仔豬，因而具有一定的代表性。

以上數據都充分說明：PCV2已在東臺地區豬群中普遍存在，并且感染嚴重。而我們知道東臺地區近年飼養的豬多為自繁自養或本地區種豬場相互引進，這說明東臺豬群至少在幾年前就已經感染了PCV2，只是未引起注意和重視。不同區域豬群陽性率不同，不同養殖方式豬群陽性率不同。說明PCV2感染范圍廣之外還具有差異性，這與各地豬場豬群日齡的長短、飼養管理水平的高低、豬的營養狀況、機體的免疫力有關外，與豬場所處地理位置、區域特性、養殖環境以及交通狀況也有著不容忽視的影響：東南區域養殖場十分密集，一家緊靠一家，并且這種情況到處可見，同時東南區域又與南通地區的養殖大縣海安接壤，其養殖環境、疫病狀況就可想而知；東蹲線片區是著名乳豬生產之鄉，母豬則成為地方特色產業的根本保證和重要資源，而母豬的免疫向來一直是防疫的漏洞，也是一直比較令人頭疼的事情，PCV2感染當然在所難免，再加上母源抗體的垂直傳播使得哺乳仔豬陽性率居高不下；安梁富片區位于204國道沿線，運輸活畜及畜產品車輛眾多且進出頻繁，使得各種動物傳染病廣泛交叉傳播成為可能，所以這3個片區的豬群PCV2感染陽性率相對偏高也就不難理解了。母豬抗體陽性率92.86%，屠宰豬80.95%，中豬69%，斷奶仔豬56.67%中還可以看出PCV2抗體陽性率與豬的年齡有一定關系，是隨著豬年齡增長而升高的，原因是飼養日齡的增長而感染的機率大增。唯一不同的是本試驗中哺乳仔豬的抗體陽性率卻遠高于斷奶仔豬，究其原因最大可能是哺乳仔豬樣品血清采自于東蹲片區以及哺乳仔豬體內留有高母源抗體。

本試驗中母豬和屠宰豬的陽性率最高。提示在生豬飼養、收購、運輸、屠宰等環節均要重視該病防治。任何環節都可能成豬場內外圓環病毒的持續感染，大大增加疫情控制的難度。而且在今后很長時間內會影響東臺地區的養豬生產，成為養豬發展的潛在威脅，應引起相關部門領導和養豬業者的高度重視。

我們要警惕“生豬高熱病”，據了解有些地區的疫情形勢仍十分嚴峻，即使在疫情初發地區，還有很多豬場不斷暴發，發病豬表現出體溫升高、皮膚發紅，并有呼吸道癥狀以及消化道癥狀，發病率和死亡率均很高。要充分認識PCV2與“高熱病”的關聯性，對PCV2進行了科學防控。實踐證明，可以降低生豬死亡率50%～60%。一旦發生PCV2尚無有效治療方案。抗生素注射和良好的管理，有助于解決繼發感染或并發感染。而本病的疫苗正處于試驗階段，控制本病只能采取綜合性防制措施：

（1）加強飼養管理，降低飼養密度，減少應激因素。（2）實行嚴格的進出制度，減少和其他病原的感染。（3）搞好環境衛生消毒。（4）保證豬群的營養水平。（5）做好豬瘟、豬偽狂犬病、豬細小病毒病、豬繁殖與呼吸綜合征和豬喘氣病的疫苗接種工作。（6）做好豬群平時的藥物預防，控制細菌性繼發感染。（7）各職能管理部門加強生豬收購、運輸、屠宰管理。