自身免疫性疾病檢查抗核抗體與可提取的核抗原譜的臨床意義

代方英

（山東省諸城市疾控中心，山東 諸城 262200）

抗核抗體（ANA）和可提取的核抗原（ENA）譜檢測至今仍然是臨床自身免疫性疾病檢測中應用最多的項目，其在自身免疫疾病的診斷、檢測中具有重要應用價值。我們對2007年12月至2010年5月在諸城市中醫院門診及住院2876例就診患者臨床標本的ANA和ENA譜檢測，并對其結果進行分析。

1 標本來源與檢驗方法

1.1 一般資料

全部病例均為2007年12月至2010年5月在諸城市中醫院門診及住院疑似自身免疫性疾病的患者，共2876例，其中男798例，年齡9～85歲，平均43.4歲。女2078例，年齡9～89歲，平均44.1歲。

檢驗試劑由歐蒙（德國）醫學實驗診斷有限公司提供，其生產的ANA譜試劑可檢測血清中或血漿中的ANA，ENA，dsDNA。ENA檢測nRNP/Sm 、Sm、SS-A、SS-B、Scl-70、Jo-1等6種不同抗原的IgG類抗體。

檢驗樣本全部病例取清晨空腹靜脈血3ml，離心分離血清（3000r/min，10min），如果不能及時檢測，將血清置-20℃冰柜保存待檢。

1.2 檢驗方法

抗核抗體檢測采用間接免疫熒光法，受檢血清1∶100、1∶320和1∶1000稀釋后分別與固定在載片上的細胞和組織基質進行反應，血清中ANA可與基質片中抗原結合形成抗原-抗體復合物，此時加入FITC標記的抗人IgG后，形成標記抗體-抗原-抗體復合物，在熒光顯微鏡下可觀察到ANA著染熒光及其免疫熒光核型。

可提取的核抗原檢測采用斑點法，標本用緩沖液1∶101倍稀釋，在第一次溫育時，已稀釋的患者樣本與膜條上的抗原反應。如果樣本陽性，特異性的IgG抗體（也包括IgA和IgM）將與相應抗原結合。為檢測已結合的抗體，加入酶標抗人IgG（酶結合物）進行第二次溫育，然后加入原底物液以產生顏色反應。

抗雙鏈DNA抗體檢測采用間接免疫熒光法，待檢血清樣本用PBS吐溫緩沖液1∶10稀釋，包被有綠蠅短膜蟲的生物薄片和稀釋的血清樣本溫育。如果樣本是陽性，特異性IgG、IgA和IgM抗體與鞭毛抗原結合。在第二次溫育時，熒光素標記的抗人抗體與結合在生物基質上的抗體反應，形成熒光顯微鏡下所觀察到的特異性熒光模式。

1.3 統計學分析

全部數據采用SPSS11.0進行統計分析，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 檢驗結果分析

在對2876例自身免疫性疾病患者進行ANA檢測中，抗核抗體（ANA）陽性943例，陽性率32.78%，其中男性ANA陽性145例，陽性率為18.91%（176/765）；女性ANA陽性798例，陽性率為37.81%（946/2111），兩組差異有統計學意義（P＜0.01）。

自身免疫性疾病患者不同年齡組ANA陽性率分析：在943例ANA陽性患者中18～50歲組的陽性率最高36.7%（632/1821），與≤17歲組28.3%（73/258）和≥51歲組29.86%（238/797）比較，陽性率差異有統計學意義（P＜0.01）。

在2876例自身免疫性患者檢驗標本中 抗核抗體（ANA）滴度≥1∶100，≥1∶320，≥1∶1000三個水平。≥1∶100占36.9%（348/943），≥1∶320占28%（264/943），≥1∶1000占35.1%（331/943）。≥1∶100男性占19.8%（69/348），女性占%80.2（279/348）；≥1∶320男性占13.64%（36/264），女性占86.36%（228/264）；≥1∶1000男性占9.67%（32/331），女性占90.33%（299/331）；男女患病率有顯著性差異（P＜0.01）。

對2876例患者進行抗ENA抗體的檢測，陽性標本數為356例，陽性率為12.38%（356/2876），只有2例陽性出現在ANA陰性的標本中。在943例ANA陽性的標本中，抗ENA抗體的陽性率為35.1%（331/943）。在356例抗ENA抗體陽性患者中，抗nRNP/Sm陽性68例，抗-Sm陽性16例，抗SS-A陽性136例，抗SS-B陽性41例，抗Scl-70陽性13例，抗Jo-1陽性4例，抗ds-DNA陽性78例。

3 檢驗結果討論

間接免疫熒光法檢測抗核抗體（ANA）具有操作簡單、敏感度高、特異性好，且結果易于判斷等優點，能適合臨床實驗室常規抗核抗體（ANA）的檢測，更好的診斷自身免疫性疾病患者。更重要的是HEp-2細胞包含大約100～150種自身抗原，適合初篩方法，美國風濕學會（ACR）已在2009年的立場聲明中建議將間接免疫熒光法仍然作為抗核抗體（ANA）檢測的金標準。

在2876例自身免疫性疾病患者中ANA陽性率為32.78%，其中男性與女性的陽性率比例為1∶2（18.91%/37.81%）。ANA陽性率低于文獻報道，這可能與被檢測人群有關，患者來自門診和住院的多個科室，病種多樣。滴度和陽性的判斷存在主觀因素，對于陽性結果的熒光滴度界限，目前仍存在較大的分歧，國內缺乏統一的滴度稀釋系統和標準化報告程序 。從年齡統計看，ANA陽性率各年齡組間存在差異，且在18～50歲組陽性率最高。ANA陽性中的熒光模式分布廣泛，在單一熒光模式中，以核顆粒型、核均質型和胞質顆粒型為常見。在混合熒光模式中以核顆粒/核均質型為主。核型分析對于相關疾病檢測具有提示意義。樣本中滴度統計并未呈現陽性率隨滴度增高而依次降低的趨勢，可能選擇患者為疑似自身免疫系統疾病有關。

抗ENA抗體的陽性率為12.38%，并且有2例患者ENA 抗體陽性，而ANA陰性。ANA陽性的標本中，抗ENA抗體陽性率為35.1%。在抗ENA抗體陽性中，出現較多的有抗SSA陽性38.2%、抗ds-DNA陽性21.9%和抗nRNP/Sm陽性19.1%。在ANA陽性標本中有64.9%的抗ENA抗體為陰性，說明抗ENA抗體的陽性率低，檢測項目還有待于進一步擴展。

在對自身免疫性疾病患者ANA和ENA譜聯合檢測中的陽性率，均高于單個自身抗體檢測的陽性率，通過檢驗結果分析可知，對自身免疫性疾病患者的聯合檢測，具有檢驗結果互相彌補，提高患者檢出率的優點。同時，根據ANA的不同核型和ENA的不同譜型，更加有利于的自身免疫性疾病的診斷和鑒別診斷，提高了自身免疫性疾病診斷率和診斷準確率。在進行自身免疫性疾病的臨床診斷時，臨床醫師應當考慮進行多項指標聯合檢測，防止對患者漏診和誤診的發生。