宮頸液基細胞學檢查聯合DNA定量分析用于宮頸癌的篩查

許芙蓉

（江北區中醫院，重慶 400020）

宮頸癌是婦科高發的惡性腫瘤之一，因此早期篩查對防治宮頸癌尤為重要。目前推行最廣、最有成效，又簡便、可靠的防癌篩查方法就是宮頸細胞學檢查。近年來，我們采用宮頸刷取材，液基薄層制片，與全自動DNA圖像分析系統相聯合，盡量使宮頸癌及癌前病變的漏診率減少到最低。本文主要探討用宮頸液基細胞學檢查結合全自動DNA圖像分析系統診斷宮頸癌及癌前病變。

1 材料與方法

1.1 研究對象

選取2007年5月至2011年10月在我院婦科體檢的3365名婦女進行宮頸癌篩查，年齡在28～50歲，平均年齡34歲。標本采集由婦科執業醫師完成。其中258例在陰道鏡指導下進行活檢。

1.2 材料與設備

麥克奧迪（廈門）醫療有限公司提供宮頸癌篩查相關試劑及儀器，其中包括宮頸刷、細胞固定液、標簽、申請單及Motic BA600全自動DNA倍體定量分析系統。

1.3 標本采集

婦科醫師在陰道窺器暴露宮頸后，將刷頭中央區較長的刷絲經子宮頸外口插入子宮頸管內，周邊區刷絲抵觸在宮頸黏膜面，順時或逆時針旋轉3～5圈。取出宮頸刷，取下刷頭并將其浸泡在細胞固定液內，旋轉管蓋后震蕩搖晃，貼標簽，送至細胞實驗室制片。

1.4 液基薄層制片及染色

將裝有固定液和刷頭的標本收集管，加入0.1%DDT消化液，放在振蕩器上震蕩2h。將標本轉入試管離心（800轉/分，5min），棄上清液，加50%酒精分別清洗，離心兩次（800轉/分，5min）后，用固定液重懸細胞，將細胞懸液制成2張薄層細胞學標本片，其中1片進行巴氏染色做常規細胞學診斷，另外1片進行Feulgen染色做DNA體定量測定。

1.5 常規細胞學診斷

TBS根據Bethesda系統分為五級：①正常。②意義不明確的非典型鱗狀上皮細胞。③低級別鱗狀上皮內病變。④高級別鱗狀上皮內病變或原位癌。⑤鱗癌。

1.6 細胞DNA體定量分析

所有DNA染色片用全自動DNA倍體定量分析系統進行掃描。每張玻片上對5000個以上細胞核進行掃描測定，系統根據不同細胞所具有的不同特征參數完成自動細胞分類和計數。出現3個以上細胞DNA指數（DI）＞2.5，或10%細胞數目處于2.5＞DI＞1.25為陽性。

1.7 診斷標準及活檢

常規細胞學以LSIL及以上病變或細胞DNA體定量分析結果為陽性的病例，建議宮頸陰道鏡檢查及活檢。每例標本均由有經驗的病例醫師檢診。所有病例均采用雙盲法，最后綜合兩種檢測結果。病理診斷報告分別為：宮頸炎，CINⅠ、 CINⅡ、CINⅢ或原位癌及鱗癌。

2 結 果

2.1 常規細胞學與DNA倍體分析結果

3365例婦女中，常規細胞學檢查見正常或良性3158例占93.85% ，ASCUS135例占4.01% ，LSIL 49例占1.46% ， HSIL 21例占0.62%，宮頸鱗癌（SCC）2例占0.06%；DNA倍體分析中3121例未見DNA倍體異常細胞，3個以上細胞DNA指數（DI）＞2.5者103例，占3.06%；10%細胞數目處于2.5＞DI＞1.25者141例占4.19%。

2.2 組織活檢結果

常規細胞學檢測陽性72例、細胞DNA定量分析陽性244例，若做聯合診斷，有258例被建議在陰道鏡下做了組織活檢。病理診斷報告宮頸炎151例，CINI56例，CINII 32例，CINⅢ 17例，宮頸鱗狀細胞癌2例。

2.3 常規細胞學、DNA倍體分析與病理診斷結果的比較

在得到證實的51例陽性病例中，DNA檢測可以準確建議42例（82.35%）活檢，8例因建議復查而延長活檢時間，1例漏診（1.96%）。常規細胞學檢測建議51例陽性中35例活檢，8例建議復查，會漏診8例。值得大家特別重視的是56例CINI患者中有20例常規細胞學檢測未見異常，32例CINII患者中有6例常規細胞學檢測未見異常，CINⅢ 17例中有2例常規細胞學檢測未見異常。而52例陽性病例中均可見DNA 倍體異常細胞。

3 討 論

3.1 本篩查中對11例ASCUS并伴少量DNA倍體異常患者進行活檢，發現了7例CINI、2例CINII，說明臨床醫師應該重視細胞學診斷為ASCUS并伴有異倍體細胞者，需及時進行病理活檢，以避免漏診，當然詢問病史，包括家庭史、遺傳史等，也是避免漏診的重要環節。凡遇到把握不準時，借助陰道鏡檢查來進一步判斷是否進行活檢是十分必要的。

3.2 國內有報道顯示大多浸潤性宮頸癌均有染色體異常改變，DNA異倍體的出現是染色體異常的表現，同時也是一種細胞癌變的特征指標[1]。細胞DNA定量分析圖不僅能識別宮頸細胞涂片中的大量DNA異倍體，還能識別少量DNA異倍體細胞。本文中52例CIN II及CIN II以上的病例均可見細胞DNA倍體異常。病變級別越高，DNA倍體異常細胞出現的頻率越大。這與國外相關報道一致，即在大多數宮頸癌和HSIL病例中可出現DNA倍體異常細胞[2]。

3.3 總所周知正常體細胞其染色體為23對，只有在細胞增殖時，才會有染色體的復制與加倍，但這部分細胞的比例非常小。若出現DNA含量異常增高或是處于增殖的細胞數目異常增多，都可能是機體組織有惡性病變的重要生物學指征。而且DNA的變化先于形態學改變出現，因此細胞DNA倍體定量分析可實現癌前病變的早期診斷。且全自動DNA體定量分析系統操作簡單、硬件性能穩定、對操作人員技術要求不高，可充分緩解基層醫院有經驗的細胞學醫生缺乏的矛盾，適合基層大規模宮頸癌的篩查。從本文的資料可見DNA倍體分析與宮頸液基細胞學檢查相結合可提高宮頸癌及癌前病變的檢出率。

[1] 孫小蓉，汪鍵.DNA定量細胞學[M]//孫小蓉，汪鍵，車東媛，等.宮頸癌.武漢：湖北科學技術出版社，2006：26-84.

[2] Fahmy M，Skacel M，Brainard J，et a1.Chromosomal alterations in low-and high-grade squamous intraepithelial lesions(LSIL and HSIL)of the uterine cervix detected by muhicolor fl uorescence in situ hybridization(FISH)[J].Acta Cytol，2002，46(3)：928.