中藥在治療真菌感染性疾病中的研究與應(yīng)用

符純美

漢中職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)與醫(yī)學(xué)技術(shù)系，陜西漢中 723000

中藥在治療真菌感染性疾病中的研究與應(yīng)用

符純美

漢中職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)與醫(yī)學(xué)技術(shù)系，陜西漢中 723000

許多中藥具有抗真菌作用并被廣泛用于臨床感染性疾病的治療，中藥抗真菌活性篩選的方法較多但都各具利弊，穩(wěn)定可靠、簡便高效的方法仍有待建立。

中藥；抗真菌；體外抗真菌藥敏試驗(yàn)；研究

中藥是中華民族的瑰寶，研究證實(shí)許多中藥具有抗真菌作用并廣泛用于感染性疾病的治療。本文就中藥在治療真菌感染性疾病中的應(yīng)用作一綜述。

1 中藥在醫(yī)學(xué)中的地位和治療感染性疾病的優(yōu)勢

中藥用于治療疾病己有悠久歷史，秦、漢時(shí)期產(chǎn)生的我國現(xiàn)存最早的藥物專著《神農(nóng)本草經(jīng)》就總結(jié)了我國漢代以前的中藥應(yīng)用知識。唐代蘇敬等人編撰、由官府頒行的《新修本草》是我國也是世界上最早的一部由國家頒布的藥典，明代李時(shí)珍歷經(jīng)30年編寫的巨著《本草綱目》更是對我國16世紀(jì)以前醫(yī)藥成就的大總結(jié)。總之，在化學(xué)合成知識和技術(shù)還未得到較大發(fā)展的18世紀(jì)以前，人類的藥學(xué)知識就是對具有治療疾病作用的天然藥物（植物、動物和礦物）的逐步認(rèn)識和經(jīng)驗(yàn)積累[1]。自20世紀(jì)50年代化學(xué)合成藥物上市，醫(yī)藥工作者和患者開始青睞起效快、使用方便的合成藥物。但隨著時(shí)間推移人們發(fā)現(xiàn)，化學(xué)合成藥毒副作用大，某些藥物成癮性強(qiáng)，抗微生物藥物易產(chǎn)生耐藥性等種種弊端，人們又開始尋找其他的可替代療法，自然將目光又投向了中草藥這一大自然饋贈人類的寶貴資源。中藥作用緩和，毒副作用小，標(biāo)本兼顧，適于慢性病或體質(zhì)虛弱患者長期服用的優(yōu)點(diǎn)得到了廣泛應(yīng)用，極大地加快了天然藥物的現(xiàn)代化發(fā)展速度。

微生物感染性疾病的發(fā)展與治療過程主要由微生物、機(jī)體功能狀況和藥物3個(gè)因素決定。理想的抗感染治療方案應(yīng)能兼顧微生物、機(jī)體功能狀態(tài)及藥物三者間的平衡，全面解決這三方面的矛盾。西藥的治療主要針對于藥物與微生物的作用，即不能全面提高機(jī)體的功能狀態(tài)，且長期用藥還極易使微生物發(fā)生突變，對藥物的敏感性降低，產(chǎn)生耐藥性。而中藥對抗生素有不同程度的增效作用，能提高耐藥菌對抗生素的敏感性，使抗生素最大限度地殺滅細(xì)菌。同時(shí)，研究證明，微生物對中藥不易產(chǎn)生耐藥性，尤其是中藥復(fù)方制劑。因此在中醫(yī)理論指導(dǎo)下進(jìn)行辨證論治，可大大降低或延緩微生物耐藥性的發(fā)生[2]。中醫(yī)藥在治療過程中講究標(biāo)本兼治的辨證施治理論，與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)提倡的綜合治療措施相通，中藥復(fù)方制劑既能抑制微生物的生長，同時(shí)還可以增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，可很好地彌補(bǔ)西藥治療感染性疾病的不足，特別適宜于深部真菌感染性疾病的治療。

2 體外抗真菌藥物敏感性試驗(yàn)方法的發(fā)展

體外測定真菌對藥物敏感性的試驗(yàn)方法主要有瓊脂擴(kuò)散滲透法和系列濃度稀釋法。瓊脂擴(kuò)散法（常用的為濾紙片法和管碟法）是將一定量的待測試菌混入瓊脂培養(yǎng)基后傾注到平板，或?qū)⒃囼?yàn)菌均勻涂布在瓊脂培養(yǎng)基的表面，然后在培養(yǎng)基上放置不同的載體或貯器（如紙片、鋼管等），或采用在瓊脂培養(yǎng)基上挖溝或打洞的辦法，再將定量的藥物儲放其中，使藥物慢慢滲透到瓊脂培養(yǎng)基，經(jīng)適宜條件培養(yǎng)后觀察藥物對真菌生長的抑制情況；系列濃度稀釋法（常用常量液體稀釋法和微量液體稀釋法）是將藥物配制成系列梯度的濃度，定量加入到培養(yǎng)基內(nèi)，再接種入一定量的待測試菌，經(jīng)適宜條件培養(yǎng)后觀察菌的生長情況以判定藥物對受試菌生長情況的影響[3]。

抗真菌藥物敏感試驗(yàn)方法建立在抗細(xì)菌藥物敏感試驗(yàn)方法基礎(chǔ)之上，但由于真菌是一種較高等的真核生物，其繁殖方式、生長周期和生長條件等均與細(xì)菌不同，因此抗真菌藥物敏感性試驗(yàn)長期以來都未建立一個(gè)規(guī)范的可被廣泛接受的標(biāo)準(zhǔn)測試方法。 美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會NCCLS（現(xiàn)已改為臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會，即CLSI）從1992年開始陸續(xù)制定了一系列針對抗真菌藥敏試驗(yàn)的指導(dǎo)性文件，并經(jīng)過數(shù)年的臨床實(shí)踐，于2002年公布了致病性酵母抗真菌藥敏試驗(yàn)方案M27-A2（包括念珠菌屬和新型隱球菌）及產(chǎn)孢絲狀真菌抗真菌藥敏試驗(yàn)方案M38-A1作為抗真菌藥物敏感性試驗(yàn)參考的標(biāo)準(zhǔn)方案，其對培養(yǎng)基的成分、pH值、接種濃度、孵育溫度、孵育時(shí)間、終點(diǎn)判讀標(biāo)準(zhǔn)以及MIC折點(diǎn)的意義等做了明確的規(guī)定[4-9]。目前，臨床抗真菌藥物敏感性試驗(yàn)大多參照此方案進(jìn)行。

3 中藥體外抗真菌活性篩選方法的研究

中藥抗真菌活性研究以真菌體外藥敏試驗(yàn)方法為基礎(chǔ)，20世紀(jì)20年代我國醫(yī)藥工作者即開始利用常用的體外藥物敏感性實(shí)驗(yàn)方法如紙片法、平板稀釋法、試管稀釋法等進(jìn)行中藥抑菌作用與抑菌成分研究，并取得了顯著成效，發(fā)現(xiàn)了多種具有抗菌作用的中藥。宮毓靜等[10]用固體藥基劃線接種法進(jìn)行了苦參、地膚子、艾葉等164種中藥乙醇提取物體外抗真菌作用的研究；周汛等[11]將劃線接種法與微量液體稀釋法相結(jié)合進(jìn)行了黃柏、黃連、黃芩等23味中藥的體外抗菌活性測試；桂蜀華等[12]用培養(yǎng)基藥物濃度稀釋法測定了苦參堿對13株皮膚癬菌的最小抑菌濃度。在中藥體外抗真菌活性研究過程中，大多是將瓊脂擴(kuò)散法用于中藥抗菌活性的初步篩選，對于經(jīng)初步測試具有抑菌活性的樣品常采用系列濃度稀釋法測試其最小殺菌濃度 （minimum fungal concentration，MFC）或最低抑菌濃度（minimal inhibitory concentration，MIC）值以檢測其作用強(qiáng)度并評價(jià)預(yù)測其開發(fā)應(yīng)用前景。

然而這些方法也存在著各自的缺陷和局限性。如常量試管稀釋法雖是一個(gè)比較好的方法，但具有實(shí)驗(yàn)工作量大，操作繁瑣，一個(gè)系列稀釋度含藥培養(yǎng)基只能測一種試驗(yàn)菌，營養(yǎng)要求高的細(xì)菌無法培養(yǎng)等弊端；打洞法同紙片擴(kuò)散法，存在藥物擴(kuò)散問題，又沒有中藥標(biāo)準(zhǔn)紙片，實(shí)驗(yàn)結(jié)果難以控制；平板稀釋法在同時(shí)進(jìn)行多藥物對多菌株的抗菌活性測定時(shí)工作量大而且容易造成不同菌株之間交叉感染。因上述方法各有利弊，中藥體外抗真菌活性試驗(yàn)至今仍沒有比較統(tǒng)一的試驗(yàn)方法和判斷標(biāo)準(zhǔn)，科研工作者多依據(jù)自身科研條件和研究目的選擇相對簡便易行的測定方式。

4 小結(jié)

中藥是大自然饋贈給中華人民乃至全人類的天然藥庫，在歷代人民的實(shí)踐應(yīng)用、研究探索過程中，逐步獲得了對中藥藥理、毒理、臨床應(yīng)用等方面日漸清晰的認(rèn)識，尤其在中藥有效成分的提取分離純化方面更是取得了長足進(jìn)步。但是，對于中藥的抗菌作用和作用機(jī)制方面仍然存在很多未知之處，在中藥抗真菌作用研究方法上也亟待建立一套穩(wěn)定可靠、簡便高效的標(biāo)準(zhǔn)方案，這需要每位醫(yī)藥工作者為之不懈努力，使中藥能夠更加合理高效地服務(wù)于人類。

[1]劉華鋼，申慶榮，劉麗敏.中藥抗菌研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2010，21（2）：211-213.

[2]伍迪，李杰.中藥抗真菌研究進(jìn)展[J].云南中醫(yī)藥雜志，2009，30（9）：155-168.

[3]徐威.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2004：100-102.

[4]National Committee for Clinieal Laboratory Standards.Reference method for broth dilution antifungal susceptibility testing of filamentous fungi[S].Villanova.2002.

[5]Clinical and Laboratory Standards Institute.Reference method for broth dilution antifungal susceptibility testing of filamentous fungi-second edition：Approved standard M38-A2[S].Wayne.2008.

[6]National Committee for Clinical Laboratory Standards.Reference method for broth dilution antifungal susceptibility testing of yeasts[S].Villanova.2002.

[7]Clinical and Laboratory Standards Institute.Reference method for broth dilution antifungal susceptibility testing of yeasts-third edition：Approved standard M27-A3[S].Wayne.2008.

[8]Emilia canton，Javier peman.Trends in antifungal susceptibility test using CLSI reference and commercial methods[J].Expert Rev Anti Infect，2009，7（1）：117-109.

[9]張丁，張宏.改良CLSI M38-A方案應(yīng)用于紅色毛癬菌的研究進(jìn)展[J].中國真菌學(xué)雜志，2008，3（5）：317-320.

[10]宮毓靜，安汝國，虞慧，等.164種中藥乙醇提取物抗真菌作用研究[J].中草藥，2002，10（33）：42-47.

[11]周汛，李桂明.23味中藥對皮膚淺部真菌的感染的體外抗菌活性研究[J].重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，11（33）：1390-1393.

[12]桂蜀華，付濤，梁遠(yuǎn)園，等.苦參堿體外抗真菌活性研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2011，22（4）：382-385.

The analysis about the situation of traditional Chinese medicine with antifungal activity

FU Chunmei
Department of Pharmaceutical and Medical Technoogy,Hanzhong Vocational and Technical College,Hanzhong 723000,China

Traditional Chinese medicine with antifungal activity can be used for infection disease curing.There are various methods to screen antifungal activity of traditional Chinese medicine,but all with defect.So the screening method with more convenient,efficient and high-throughput is eager to be built.

Traditional Chinese medicine;Antifungal activity;In vitro antifungal susceptibility test;Research

R28

A

1674-4721（2012）06（a）-0013-02

符純美，女，理學(xué)碩士，漢中市職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)學(xué)與藥學(xué)技術(shù)系助教，研究方向：天然藥物開發(fā)和生物制藥。

2012-02-06 本文編輯：陳 俊）