Skp2和Cyclin D1在胃癌中的表達及其臨床意義

鄭元正，謝建亮，孫鸝，王佩飛

（1.溫州醫學院附屬樂清醫院 外科，浙江 溫州 325600；2.杭州師范大學醫學院 中心實驗室，浙江 杭州 310036）

有研究表明，細胞周期調控異常與細胞癌變密切相關，細胞周期的關鍵是G1期的啟動，因此對腫瘤的研究多集中在G1～S期[1]。S期激酶相關蛋白2（S-phasekinaseassociated protein 2，Skp2）屬于F-box蛋白家族中重要的一員，是細胞周期G1/S期的重要調控因子，通過泛素化參與細胞周期調控，與腫瘤發生、發展和預后密切相關[2-3]。但Skp2與Cyclin D1的表達在胃癌中的關系目前尚不清楚，本研究采用RT-qPCR檢測胃癌組織和正常胃組織中的Skp2、Cyclin D1，探討兩者在胃癌組織和正常胃組織中的表達及其臨床意義。

1 資料和方法

1.1 一般資料 標本來源于溫州醫學院附屬樂清醫院2008年9月至2010年10月間內鏡室胃鏡活檢的正常胃黏膜組織及經外科手術切除的胃癌組織標本，均經病理證實。正常胃黏膜組織20例，其中男13例，女7例，年齡31～69歲，平均（50.3±4.6）歲。胃癌組織35例，其中男24例，女11例，年齡30～76歲，平均（56.5±6.2）歲；其中早期胃癌15例，進展期胃癌20例；高中分化20例，低分化15例；腫瘤未穿透漿膜（T1～T2）22例，穿透漿膜（T3～T4）13例；有淋巴結轉移16例，無淋巴結轉移19例。

1.2 方法 用RT-qPCR法檢測Skp2與Cyclin D1在正常胃組織、胃癌組織中的表達情況。RNA抽提：每50 mg組織加入1 mL Trizol（購自Gibco公司），按Trizol試劑說明書提取總RNA，測定OD280/260。RT-qPCR所用引物由上海英駿生物技術有限公司合成，Oligo dT（購自Takara公司）進行逆轉錄。RT-qPCR檢測反應體系包括：1μ L RT產物，1×SYBR Green I Mastermix（購自Takara公司），0.5μmol/L引物。GAPDH為內參。反應條件為：95 ℃ 10 min后，95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，40個循環。所有樣品做3個復孔。記錄每個反應管中的熒光信號到達所設定的域值時所經歷的循環數（Ct值）。公式為：△Ct=標本Ct均值-內參Ct均值，取2-△Ct代表標本初始cDNA相對量。

1.3 統計學處理方法 采用SPSS10.00軟件進行統計分析。Skp2與Cyclin D1表達以其相對組織的百分比表示，不同標本表達水平的比較采用one-way ANOVA；Spk2與Cyclin D1表達之間的關系經Pearson相關分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Skp2和Cyclin D1在胃癌中的表達 胃癌組織和正常胃組織中均檢測到Skp2和Cyclin D1 mRNA，兩者在胃癌組織中的表達水平明顯高于正常胃組織（分別為F=3.674，P=0.016；F=7.455，P=0.001）（見表1)。低分化胃癌組織的Spk2和Cyclin D1 mRNA表達明顯高于高中分化程度，差異有統計學意義（P=0.034，P=0.008）（見表2）；而其表達水平在浸潤程度及有無淋巴結轉移中的差異無統計學意義（P>0.05）。

表1 Skp2和Cyclin D1 mRNA在胃癌中的表達（±s）

表1 Skp2和Cyclin D1 mRNA在胃癌中的表達（±s）

與正常胃組織比：aP<0.05

Skp2 mRNA 0.679±0.381 1.958±0.876a 2.239±0.989a組別正常胃組織早期胃癌進展性胃癌例數20 15 20 cyclin D1 mRNA 0.419±0.324 0.924±0.613a 1.524±1.001a

表2 胃癌組織中Skp2及Cyclin D1 mRNA表達與臨床病理學特征的關系（±s）

表2 胃癌組織中Skp2及Cyclin D1 mRNA表達與臨床病理學特征的關系（±s）

病理學特征分化程度低分化高中分化浸潤程度T1～T2 T3～T4淋巴結轉移例數Skp2 mRNA t P Cyclin D1 mRNA t P 15 20 2.238±0.978 1.291±0.789 1.6870.0341.909±1.361 0.786±0.611 2.9770.008 22 13 1.791±0.789 2.018±0.818 1.5730.0651.267±0.834 1.275±0.757 1.5680.071有 無16 19 2.191±0.956 1.918±0.834 1.4650.0791.709±1.028 1.441±0.794 1.4720.078

2.2 Spk2與Cyclin D1表達之間的關系 經Pearson相關分析發現，Skp2與Cyclin D1之間存在明顯正相關：r=0.987，P<0.01。

3 討論

Cyclin D1基因位于人染色體12p13區，其產物Cyclin D1蛋白與CDK4/6形成活性復合物，參與G1期和S期的pRb磷酸化作用，是細胞周期正性調節蛋白，其異常表達與多種惡性腫瘤的發生發展有關[4]。本研究結果顯示，Cyclin D1 mRNA在胃癌組織中的表達明顯高于正常胃組織（P<0.05），并且低分化胃癌組織的Cyclin D1 mRNA表達明顯高于高中分化程度，提示Cyclin D1蛋白的過表達可能參與胃癌的發生、發展。但是，Cyclin D1過表達與胃癌臨床病理特征關系的分析結果顯示，Cyclin D1過表達與腫瘤浸潤深度及淋巴結轉移均無相關性。

Skp2蛋白是細胞周期G1期到S期轉換密切相關的關鍵性調控因子，在G1末期出現，S期前達到高峰，與腫瘤的發生、發展關系密切[5]。已有研究表明，在多種人類腫瘤中發現Skp2蛋白呈高表達，如結腸直腸癌、宮頸癌、口腔鱗癌、胃癌、肺癌等，并發現Skp2表達水平高低與腫瘤的惡性程度及預后相關[6-8]。本實驗結果顯示，Skp2在胃癌組織中的表達量明顯高于正常胃組織中的表達量，并且低分化胃癌組織的Skp2 mRNA表達明顯高于高中分化程度，表明細胞的增殖、癌變可能與Skp2的表達上調有關。相關性分析發現Skp2與Cyclin D1的表達存在正相關，Skp2的高表達，可能導致了Skp2底物降解的紊亂，促進細胞通過G1/S轉換“關卡”的作用，使本來應該停止增殖的細胞進入細胞周期，促進DNA的復制、細胞的增殖，最終導致腫瘤的發生[9]。Skp2和Cyclin D1在胃癌中表達上調，提示Skp2和Cyclin D1可能協同參與了胃癌的發生、發展，此發現為胃癌的診治提供了新的思路和依據。

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