蜂蜜、蜂膠對深Ⅱ度燙傷大鼠創面愈合的影響*

王元元，黃云英，杜 娟，沈 麗，張德芹，王雪妮

蜂蜜、蜂膠對深Ⅱ度燙傷大鼠創面愈合的影響*

王元元，黃云英，杜 娟，沈 麗，張德芹，王雪妮

[目的]研究蜂蜜、蜂膠外用對深Ⅱ度燙傷模型大鼠創面愈合的影響。[方法]采用YLS-5Q臺式超級控溫燙傷儀制備大鼠深Ⅱ度燙傷模型。觀察蜂蜜、蜂膠外用對燙傷創面愈合的影響，觀察創面皮膚組織學變化，檢測大鼠血清中羥脯氨酸（HYP）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量。[結果]蜂蜜、蜂膠外用能顯著提高燙傷大鼠創面愈合率（P<0.01）；能顯著提高大鼠血清中SOD、HYP含量（P<0.01或P<0.05）。[結論]蜂蜜、蜂膠外用具有明顯的促進燙傷創面愈合的作用。

蜂蜜；蜂膠；外用；燙傷；創面愈合

蜂蜜為蜜蜂科昆蟲中華蜜蜂或意大利蜂所釀的蜜。春至秋季采收。蜂蜜味甘，性平，歸肺、脾、大腸經。蜂膠為蜜蜂科昆蟲意大利蜂（Apis mellifera Linnaeus.）的干燥分泌物。多于夏季從蜂箱中收集，除去雜質。蜂膠味苦、辛，性寒，歸脾、胃經。蜂蜜、蜂膠均為既可內服、又可外用的常用中藥。歷版《中華人民共和國藥典》（簡稱《中國藥典》）對蜂蜜內服功能及主治均有詳細的記載，但多缺少其在外用功能及主治方面的記載。蜂膠功能主治的國家標準首次收載于2005年版《中國藥典》，但未明確指出蜂膠的外用功能主治標準。2010年版《中國藥典》對蜂蜜“外用生肌斂瘡”、“外治瘡瘍不斂，水火燙傷”和蜂膠“外用解毒消腫，收斂生肌”、“外治皮膚皸裂，燒燙傷”的記載，填補了蜂蜜、蜂膠長期以來外用功能的闕如[1]。

蜂蜜、蜂膠臨床運用具有良好促皮膚燙傷愈合的作用，但對其藥理作用研究國內外尚少見系統報道，其作用靶點及機制有待于進一步研究。為進一步闡明其促愈機制，本實驗采用大鼠深Ⅱ度燙傷模型觀察蜂蜜、蜂膠外用對皮膚燙傷創面愈合的影響，為《中國藥典》完善蜂蜜、蜂膠外用“解毒消腫、生肌斂瘡”功效提供藥效學參考依據。

1 實驗材料

1.1 藥物 蜂蜜藥材購于安徽新興中藥材飲片有限公司（批號：20100127），由天津中醫藥大學生藥教研室李天祥老師鑒定。蜂膠藥材購于安徽新興中藥材飲片有限公司（批號：20100127），由天津中醫藥大學生藥教研室李天祥老師鑒定。由于蜂膠很難溶于水，所以研究多采用蜂膠乳化劑進行實驗研究，本實驗給藥前用吐溫80將蜂膠配制成70 g/kg的藥液。京萬紅軟膏為達仁堂藥業有限公司產品（批號：211738）。

1.2 動物 健康Wistar大鼠80只，雄性，體質量（200±10）g。由天津市山川紅實驗動物科技有限公司提供。飼養于18～22℃清潔級動物實驗室內，動物許可證號為SCXK（津）2009-0001。

1.3 試劑 吐溫80[天津市北方天醫化學試劑廠（批號：20080902）]；水合氯醛[成都市科龍化工試劑廠（批號：20100125）]；羥脯氨酸（HYP）測定試劑盒[美國R&D公司產品,天津博奧信德科技有限公司提供（分裝批號：201010）]；超氧化物歧化酶（SOD）測定試劑盒[美國R&D公司產品,天津博奧信德科技有限公司提供（分裝批號：201010）]。

1.4 儀器 TD-10001電子天平（天津市天馬儀器廠）；YLS-5Q臺式超級控溫燙傷儀（濟南益延科技發展有限公司）；Infinite M200微量多功能讀板機（瑞士TECAN公司）；BMJ-1生物組織包埋機（天津航空機電公司）；RM2135切片機（德國Leica公司；WH-71電子恒溫干燥箱，天津泰斯特儀器有限公司）；BX41研究級正置顯微鏡及成像系統（日本Olympus公司）。

2 方法

2.1 模型制備 Wistar大鼠80只，雄性，按隨機數字表法隨機分為8組，每組10只。分別為模型對照組，京萬紅燙傷膏組，蜂蜜高、中、低劑量治療組和蜂膠高、中、低劑量治療組。造模前剃除大鼠背毛，面積約為25 cm2。造模當天以3.5%水合氯醛（10 mL/kg）腹腔注射麻醉，在大鼠背部脫毛處用YLS-5Q臺式超級控溫燙傷儀進行燙傷，設置燙傷溫度為90℃，時間為15秒，壓力為1 000 g。所有大鼠均采取同樣的燙傷條件，制作深Ⅱ度燙傷模型[2]。

2.2 給藥 造模后第2天除模型對照組外，京萬紅燙傷膏組外涂京萬紅燙傷膏1 g/只，蜂蜜高、中、低劑量組外涂蜂蜜生藥10.8、5.4、2.7 g/kg；蜂膠高、中、低劑量組外涂蜂膠生藥0.20、0.10、0.05 g/kg。每日給藥1次，連續給藥21 d。給藥治療期間大鼠分籠飼養，每日均飼以普通飼料，自由進食、飲水。

2.3 檢測指標 每組于給藥第3、7、14、21 d拍照，所拍照片用photoshop軟件處理，計算創面愈合率[3]，計算公式為：創面愈合率=（原始創面面積-未愈合創面面積）/原始創面面積×100%。給藥21 d后，大鼠麻醉，腹主動脈取血，離心（3 000 r/min，20 min），分離血清，用酶聯免疫法測定大鼠血清中HYP、SOD的含量；取大鼠背部創面皮膚，用10%甲醛溶液固定，常規石蠟包埋，切片，蘇木-伊紅（HE）染色，光鏡下觀察標本組織學的變化。

2.4 統計學方法 采用SPSS18.5統計軟件進行處理。計量資料以均數±標準差（±s）表示，正態分布的計量資料組間比較采用單因素方差分析，偏態分布的計量資料組間比較采用秩和檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 對創面愈合率的影響 與模型對照組相比，給藥第7天后，蜂蜜中、低劑量組和蜂膠高劑量組大鼠創面愈合率明顯提高，差異有統計學意義（P<0.01）。給藥第14天后，蜂蜜低劑量組大鼠創面愈合率明顯提高，差異有統計學意義（P<0.01）。給藥第21天后，京萬紅燙傷膏組、蜂蜜高、中、低劑量組和蜂膠低劑量組大鼠創面愈合率明顯提高，差異有統計學意義（P<0.05或P<0.01）。見表1。

表1 蜂蜜、蜂膠對深Ⅱ度燙傷大鼠創面愈合率的影響（±s，n=8）

表1 蜂蜜、蜂膠對深Ⅱ度燙傷大鼠創面愈合率的影響（±s，n=8）

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

創面愈合率（%）3 d 7 d 14 d 21 d模型對照組 - 3.53±4.38 03.17±4.84 23.46± 8.73 68.59±10.57京萬紅燙傷膏組 1 g/只 0.57±0.92 01.55±4.88 18.64± 8.14 78.72± 9.56*蜂蜜高劑量組 10.80 2.87±4.22 08.48±6.11 27.09±13.32 82.69± 7.65**蜂蜜中劑量組 5.40 1.02±1.69 11.34±6.50**33.67±14.47 82.53±11.78**蜂蜜低劑量組 2.70 1.11±1.44 13.42±5.82**40.59±19.42**88.56± 8.12**蜂膠高劑量組 0.20 0.75±2.34 11.65±6.82**22.89±12.25 74.09±11.50蜂膠中劑量組 0.10 0.07±0.22 05.14±5.02 13.96± 6.99 73.99± 9.63蜂膠低劑量組 0.05 0.48±1.45 07.27±7.29 23.33±14.06 81.77±11.08*組別 劑量（g/kg）

3.2 對血清中HYP、SOD含量的影響 與模型對照組相比，蜂蜜中、低劑量組和蜂膠高、中、低劑量組HYP含量明顯升高，差異有統計學意義（P<0.05或P<0.01）；蜂蜜低劑量組和蜂膠中、低劑量組SOD含量明顯升高，差異有統計學意義（P<0.01），見表2。

表2 蜂蜜、蜂膠對深Ⅱ度燙傷大鼠血清中HYP、SOD 含量的影響（±s，n=8）

表2 蜂蜜、蜂膠對深Ⅱ度燙傷大鼠血清中HYP、SOD 含量的影響（±s，n=8）

注：與模型組相比，*P<0.05，**P<0.01。

組別 劑量（g/kg） HYP（μg/L） SOD（U/L）模型對照組 - 2.59±0.33 121.34±18.07京萬紅燙傷膏組 1 g/只 2.64±0.31 126.83±21.74蜂蜜高劑量組 10.80 2.77±0.30 129.70± 7.76蜂蜜中劑量組 5.40 3.06±0.35* 122.54±20.11蜂蜜低劑量組 2.70 3.14±0.46** 161.19±19.16**蜂膠高劑量組 0.20 3.21±0.52** 135.95±10.38蜂膠中劑量組 0.10 3.20±0.42** 156.82±25.59**蜂膠低劑量組 0.05 3.21±0.17** 175.50±25.37**

3.3 對創面組織學變化的影響 鏡檢可見,模型對照組皮膚表皮壞死，真皮膠原纖維束排列紊亂且有斷裂現象，腺體消失，內有大量炎癥細胞浸潤，偶見毛細血管。各給藥組與模型對照組比較可見，表皮和真皮結構均有明顯改善，表皮損傷得到修復，膠原纖維束排列整齊，真皮毛囊增多，腺體分布漸趨正常，炎癥細胞對皮膚的浸潤程度減弱，血管較明顯。

4 討論

在創傷愈合過程中，膠原蛋白的合成和分泌是傷口愈合的決定性因素。而HYP在膠原蛋白中含量最多，是膠原蛋白特有的氨基酸之一，是人體皮膚形成的關鍵物質。SOD廣泛存在于需氧代謝的細胞中，其活力與皮膚形成有密切關系。SOD能特異性清除超氧陰離子，保護組織免受氧自由基的損害[4]。

本實驗通過采用對深Ⅱ度燙傷模型大鼠外涂蜂蜜、蜂膠的方法，觀察其外用對大鼠燙傷創面愈合作用的影響。通過檢測大鼠血清中HYP、SOD的含量，發現蜂蜜、蜂膠可通過增加燙傷大鼠血清中HYP的含量促進血清中膠原的合成，從而加速燙傷創面的愈合；通過增加燙傷大鼠血清中SOD的含量增強機體對自由基的清除能力，從而避免自由基對機體組織細胞的損傷。

隨著國內外對蜂蜜、蜂膠研究的不斷深入，其外用價值也將會越來越受到重視。目前蜂蜜、蜂膠作為外用解毒消腫、收斂生肌良藥已廣泛應用于臨床各科疾病。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：337.

[2] 王雪妮,張德芹,黃云英,等.大鼠燙傷模型制備的實驗研究[J].天津中醫藥大學學報，2011，30（4）：218-219．

[3]黃國鈞,黃勤挽.醫藥實驗動物模型——制作與應用[M].北京:化學工業出版社,2010:722-723.

[4] Wlaschek M,Scharffetter-Kochanek K.Oxidative stress in chronic venou leg gulcers[J].Wound Repair Regen,2005,13(5):452-461.

Effects of honey and propolis on wound healing in rats with second-degree scald

WANG Yuan-yuan,HUANG Yun-ying,DU Juan,SHEN Li,ZHANG De-qin,WANG Xue-ni
（The TCM Research Institute,Tianjin University of TCM,Tianjin 300193,China）

[Objective]To investigate the effects of honey and propolis on wound healing in rats with seconddegree scald.[Methods]Second-degree scald on the back of rat was induced by scald-reproducing instrument with super-temperature control(YLS-5Q).The rates of wound healing and histological changes were observed.The level of hydroxyproline(HYP)and superoxide dismutase(SOD)in serum were determined by ELISA.[Results]The rates of wound healing in treatment group were increased compared with the control group(P<0.01).The levels of HYP and SOD in treatment group were higher than that in the control group (P<0.01 or P<0.05).[Conclusion]Honey and propolis has a promoting effect on burn wound healing by its external application.

honey;propolis;external application;scald;wound healing

R285.5

A

1673－9043（2012）03－0154-03

國家科技支撐計劃基金項目（2008BA153B09）。

300193 天津中醫藥大學中醫藥研究院

王元元（1986-），女，碩士研究生，主要研究方向為中藥基本理論及臨床應用。

*通訊作者：張德芹。

2012-06-24）

論著·專家論壇