離子色譜法測(cè)定磺丁基醚-β-環(huán)糊精中4-羥基丁磺酸

王 偉， 項(xiàng)素云， 孫文芳， 嚴(yán)拯宇， 相秉仁

(1.中國(guó)藥科大學(xué)分析化學(xué)教研室，江蘇南京211198;2.南京師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，江蘇南京210046;3.中國(guó)藥科大學(xué)分析測(cè)試中心，江蘇南京210009)

磺丁基醚-β-環(huán)糊精(SBE-β-CD，1)是陰離子型高水溶性環(huán)糊精衍生物，能很好地與藥物分子包合形成非共價(jià)復(fù)合物，從而提高藥物的穩(wěn)定性、水溶性和安全性，同時(shí)具有降低腎毒性、緩和藥物溶血性、控制藥物釋放速率及掩蓋不良?xì)馕兜忍匦裕湓跉W美已被批準(zhǔn)用作注射劑的輔料［1-3］。

SBE-β-CD的合成原料之一為1，4-丁基磺酸內(nèi)酯，其水解產(chǎn)物4-羥基丁磺酸(2)有可能作為雜質(zhì)存在于SBE-β-CD產(chǎn)品中。為保證SBE-β-CD的產(chǎn)品質(zhì)量，需建立SBE-β-CD中4-羥基丁磺酸含量的有效檢測(cè)方法，對(duì)其進(jìn)行限量(初步定為0.1%)檢查。

現(xiàn)國(guó)內(nèi)外對(duì)SBE-β-CD中4-羥基丁磺酸的檢測(cè)尚未見(jiàn)報(bào)道。由于4-羥基丁磺酸為離子型化合物，在反相色譜柱中沒(méi)有保留，因此本文參考相關(guān)文獻(xiàn)［4-7］，采用離子色譜法對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。

1 儀器與試劑

DIONEX ICS-90型離子色譜儀(美國(guó)戴安公司);Chromeleon6.60色譜工作站。

4-羥基丁磺酸對(duì)照品(南京巨環(huán)醫(yī)藥科技有限公司，批號(hào):20100405);SBE-β-CD樣品(南京巨環(huán)醫(yī)藥科技有限公司，批號(hào):090508、090513、090520)。NaHCO3為分析純;實(shí)驗(yàn)用水為電阻率是18.3 MΩ· cm的去離子水(Millipore純水機(jī)制備)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:IonPac AS23陰離子分析柱(250 mm×4 mm)，IonPac AG23陰離子保護(hù)柱(50 mm×4 mm);柱溫:25℃;ASRS300(4 mm)陰離子抑制器，其再生模式為外加水電抑制，抑制電流:30 mA;淋洗液:7 mmol·L－1NaHCO3水溶液;流速:1.0 mL· min－1;檢測(cè)器:電導(dǎo)檢測(cè)器;進(jìn)樣量:10μL。

2.2 溶液的配制

對(duì)照品溶液的配制:取4-羥基丁磺酸對(duì)照品100 mg，精密稱定，置100 mL容量瓶中，用去離子水定容，得到1 g·L－1對(duì)照品溶液;再精密移取此對(duì)照品溶液0.5 mL至50 mL容量瓶中，用去離子水定容，即得10 mg·L－1對(duì)照品溶液。

樣品溶液的配制:取SBE-β-CD樣品500 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，用去離子水定容，即得10 g·L－1樣品溶液。

2.3 線性范圍和檢測(cè)限、定量限

取“2.2”項(xiàng)下配制的1 g·L－1對(duì)照品溶液，以去離子水逐級(jí)稀釋，得到質(zhì)量濃度分別為2、5、10、15、20 mg·L－1的4-羥基丁磺酸標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，并按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖，每個(gè)濃度平行2次。以峰面積(A)對(duì)濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程:A=0.010 2 C+0.000 7，r= 0.999 8。結(jié)果表明，4-羥基丁磺酸的質(zhì)量濃度在2～20 mg·L－1范圍內(nèi)線性良好。

取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液用去離子水稀釋，進(jìn)樣測(cè)得:信噪比為10∶1時(shí)，定量限為5 ng;信噪比為3∶1時(shí)，檢測(cè)限為2 ng。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下配制的10 mg·L－1對(duì)照品溶液，分別于0、2、4、6、8 h進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果測(cè)得4-羥基丁磺酸峰面積的RSD為1.8%(n=5)，表明對(duì)照品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 加樣回收率

按“2.2”項(xiàng)下方法配制已知4-羥基丁磺酸含量的樣品溶液，取適量，分別加入限量值的80%、100%和120%的4-羥基丁磺酸對(duì)照品，混勻，制得含不同質(zhì)量濃度對(duì)照品的樣品溶液，每個(gè)濃度平行3份，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果，測(cè)得4-羥基丁磺酸的平均回收率為100.2%(RSD=1.3%，n=9)。

2.6 樣品測(cè)定

分別精密稱取3批次樣品，按“2.2”項(xiàng)下方法配制樣品溶液，每批次樣品平行3份，進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 樣品測(cè)定結(jié)果Table1 Results of sample determination

3 討論

4-羥基丁磺酸是一價(jià)有機(jī)酸，在離子色譜淋洗液中呈陰離子形態(tài)。因此，本文選用了對(duì)陰離子有一定保留能力的IonPac AS23陰離子柱和適用于陰離子測(cè)定的ASRS300陰離子抑制器以及對(duì)陰離子有選擇洗脫能力的NaHCO3淋洗液。

筆者曾考察了在離子色譜分析中，采用具不同混合比例和不同濃度的Na2CO3-NaHCO3混合溶液作淋洗液時(shí)，SBE-β-CD樣品中4-羥基丁磺酸與相鄰雜質(zhì)的分離效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著淋洗液濃度或其中Na2CO3比例的降低，4-羥基丁磺酸根離子的保留值有所增大，且與相鄰雜質(zhì)的分離度也增大:當(dāng)以0.5 mmol·L－1Na2CO3-6.0 mmol·L－1NaHCO3混合溶液為淋洗液時(shí)，兩者分離度達(dá)1.55，但分離效果仍不理想;由于CO對(duì)酸根離子的洗脫能力遠(yuǎn)大于HCO，且4-羥基丁磺酸作為有機(jī)酸，其柱保留較弱，故其更易被CO洗脫，而采用7 mmol·L－1NaHCO3水溶液作為淋洗液時(shí)，其與相鄰雜質(zhì)分離良好，分離度可達(dá)2.05，雜質(zhì)離子不干擾4-羥基丁磺酸的測(cè)定，4-羥基丁磺酸根離子保留時(shí)間也較為合適(約 10.9 min)(見(jiàn)圖1)。所以，最終選擇7 mmol·L－1NaHCO3水溶液為淋洗液。

本文建立的離子色譜法操作簡(jiǎn)便，分析結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，可以保證SBE-β-CD樣品中4-羥基丁磺酸與其他離子型雜質(zhì)的基線分離，適用于SBE-β-CD中4-羥基丁磺酸的限量檢查。

圖1 4-羥基丁磺酸對(duì)照品及SBE-β-CD樣品的離子色譜圖Table1 ion chromatograms of 4-hydroxy-1-butanesulfonic acid and SBE-β-CD sample

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