毛細管氣相色譜法測定甘氨雙唑鈉中有機溶劑殘留量

羅淑青， 卓開華， 周 征， 曹 琳

(寧波市食品藥品檢驗所，浙江寧波315048)

甘氨雙唑鈉為一種放射增敏藥，體內外研究表明:其對S180腫瘤、食道癌、鼻咽癌、B16黑色素瘤和EMT6乳腺癌等均有較好的放射增敏效果［1-3］。該藥于1983年由第二軍醫大學放射醫學研究所立項研究，1993年9月由國家專利局授予發明專利權，并于2002年獲得原SDA頒發的一類新藥證書和生產批文，由廣州萊泰制藥有限公司獨家生產上市，商品名為希美納，后于2007年轉讓給山東綠葉制藥有限公司。該藥生產過程(包括合成、結晶)中需使用N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、乙醇等有機溶劑，而根據國家食品藥品監督管理局(SFDA)頒布的《化學藥物研究技術指導原則》中的要求，合成工藝中用到的二類溶劑需進行殘留溶劑檢測。國家現行標準［WS1-(X-020)-2007Z］規定采用直接進樣法檢測其乙醇殘留量，尚未規定對DMF進行檢測，考慮到后者對人體的危害［4］，本文建立了氣相色譜法以檢查殘留溶劑DMF和乙醇含量，并進行了方法學驗證。

1 儀器與試劑

Agilent 7890N型氣相色譜儀(美國Agilent公司)，配Agilent7683型自動進樣器和Chemstation工作站。

甘氨雙唑鈉(山東綠葉制藥有限公司提供，批號:091212;091216;100307);二甲基亞砜(DMSO，色譜純，美國天地試劑公司，批號:905033);DMF (色譜純，美國天地試劑公司，批號:912321);乙酸乙酯(色譜純，國藥集團化學試劑有限公司，批號: 10010320);無水乙醇(分析純，國藥集團化學試劑有限公司，批號:20110221)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱:HP-FFAP毛細管柱(30 m×0.32 mm×0.25μm);柱溫:程序升溫，初始溫度40℃保持5 min，以每分鐘8℃的升溫速率升至110℃，保持2 min，然后以每分鐘30℃的升溫速率升至230℃，保持2 min。載氣:高純N2，流速:3.0 mL·min－1，分流比:10∶1，進樣口溫度:230℃;檢測器溫度: 250℃;進樣量:1μL。

2.2 溶液的制備

內標貯備液的制備:取乙酸乙酯約1.0 g，精密稱定，置事先加入適量DMSO的200 mL量瓶中，加DMSO溶解并稀釋至刻度，搖勻，得每1 mL含乙酸乙酯5 mg的內標貯備液。

乙醇貯備液的制備:取乙醇約250.0 mg，精密稱定，置事先加入適量DMSO的50 mL量瓶中，加DMSO溶解并稀釋至刻度，搖勻，得每1 mL含乙醇5 mg的對照品貯備液。

DMF貯備液的制備:取DMF約44.0 mg，精密稱定，置事先加入適量DMSO的50 mL量瓶中，加DMSO溶解并稀釋至刻度，搖勻，得每1 mL含DMF 880μg的對照品貯備液。

2.3 專屬性試驗

取DMSO 1μL進樣，結果表明空白對測定無干擾［見圖1(A)］。

2.4 系統適用性試驗

精密量取乙醇貯備液和DMF貯備液各5.0 mL，置事先加入適量DMSO的50 mL量瓶中，加內標貯備液5.0 mL，再加DMSO稀釋至刻度，搖勻，進樣測定，記錄色譜圖。結果，各組分的分離度均大于1.5，理論塔板數均大于5 000［見圖1(B)］。

2.5 線性關系考察

精密量取乙醇貯備液0.05、0.1、0.5、1.0、5.0和10.0 mL，DMF貯備液0.5、1.0、2.0、3.0、5.0和10.0mL，分別置事先加入適量DMSO的50 mL量瓶中，并分別加內標貯備液5.0 mL，再加DMSO稀釋至刻度，搖勻，分別得每1 mL含乙醇 5.0、10.0、50.0、100.0、500.0、1 000.0μg和每1 mL含DMF 8.8、17.6、35.2、52.8、88.0、176.0μg的對照品溶液。分別進樣，記錄色譜圖，分別以對照液峰面積與內標液峰面積比值(Y)為縱坐標，以質量濃度(X)為橫坐標，繪制標準曲線，得乙醇回歸方程為: Y=0.002 2 X－0.008 1(r=0.999 8);DMF回歸方程為:Y=0.001 5 X－0.001(r=1.000 0)。結果表明:乙醇和DMF在上述質量濃度范圍內，峰面積之比與質量濃度呈良好的線性關系。

2.6 精密度與穩定性試驗

分別取對照品溶液乙醇(500 mg·L－1)和DMF (88.00 mg·L－1)，連續進樣5次。結果，其峰面積RSD分別為0.15%和0.73%(n=5)，表明精密度符合藥典要求;同時，在2、8、14、20、26 h進樣，記錄色譜圖，得乙醇和DMF峰面積RSD分別為1.55%和1.15%，表明溶液在24 h內穩定。

2.7 加樣回收率試驗

取甘氨雙唑鈉9份，每份1.0 g，精密稱定，置10 mL量瓶中，加適量DMSO使溶解，分別精密加入乙醇和DMF貯備液各0.8、1.0和1.2 mL，加入內標貯備液1.0 mL，并稀釋至刻度，進樣，根據峰面積比計算回收率。乙醇及DMF平均回收率分別為98.00%和97.32%(n=9);RSD分別為0.64%和0.12%(n=9)。

2.8 最低檢出濃度

由混合對照品溶液逐級稀釋，直到峰高的信噪比(S/N)為3，得乙醇和DMF最低檢出質量濃度分別為2.5和4.4 mg·L－1。

2.9 樣品測定

取3個批號(批號:091212;091216;100307)的甘氨雙唑鈉樣品各約1.0 g，精密稱定，置10 mL量瓶中，加適量DMSO使溶解，加內標貯備液1.0 mL，并稀釋至刻度，搖勻，按“2.1”項下色譜條件進樣分析，結果DMF未檢出，乙醇有殘留［見圖1(C)］。按內標法以峰面積比計算得3批樣品中乙醇殘留量分別為0.44%、0.46%和0.46%。

圖1 空白溶液(A)、混合對照品溶液(B)和供試品溶液(C)的色譜圖Figure 1 Chromatograms of blank solution(A)，mixed standard solution(B)and sample solution(C)of glycididazole sodium

3 討論

DMF的沸點高，不宜采用頂空進樣法測定，根據中國藥典中關于殘留溶劑測定的指導建議，本實驗采用直接進樣法測定此類沸點較高的溶劑。甘氨雙唑鈉在水中易溶，但為保護色譜柱應盡量避免以水為溶劑，通過實驗，發現以DMSO作為溶劑，也可將甘氨雙唑鈉完全溶解，且無基質效應，回收率好，故選擇DMSO作為溶劑。

待測的有機殘留溶劑為樣品中微量的揮發性物質，且乙醇殘留量將在甘氨雙唑鈉含量計算時予以扣除，采用內標法定量可減少由儀器系統或操作過程帶來的誤差。

在摸索色譜條件時，分別試用了HP-1、DB-624、HP-FFAP這3種型號的毛細管柱，結果發現在HP-1型毛細管柱上，2種溶劑和內標物乙酸乙酯均能較好分離，但柱效均不高;在DB-624型毛細管柱上，程序升溫造成基線抬高，從而導致分離效果欠佳。在HP-FFAP型毛細管柱上，本實驗曾試圖通過增加程序升溫速率來縮短DMF的保留時間，結果其在抬高的基線上出峰，致柱效下降，且對樣品測定造成影響，無法判斷有無溶劑殘留以及空白溶劑是否有干擾;提高初始溫度則導致乙醇與乙酸乙酯的分離度降低，不符合檢測要求，最終通過改變程序升溫的條件延長了 DMF的出峰時間，很好地解決了上述問題。

該法適用于甘氨雙唑鈉原料藥中乙醇和DMF殘留量的內標法測定。

［1］ 劉昌孝，魏廣力，肖淑華.甘氨雙唑鈉在大鼠和小鼠體內藥代動力學［J］.藥學學報，2000，35(10):770-773.

［2］ 劉孟忠，盧泰祥，胡永紅.甘氨雙唑鈉對鼻咽癌放療增敏作用的臨床研究［J］.中國腫瘤臨床與康復，2003，10(3):199-202.

［3］ 王鳳英，孫菁，鮑云華，等.甘氨雙唑鈉對食道癌放射治療增敏作用的研究［J］.中國臨床醫學，2001，8(4): 369-370，372.

［4］ 夏元洵.化學物質毒性全書［M］.上海:上海科技出版社，1991:456.