刁 堯,劉新寧,官文征,趙文瑾,劉 潔,趙 恂,于成國
1.中國醫科大學 實驗技術中心,遼寧 沈陽 110001;2.阜新市第二人民醫院,遼寧 阜新 123000;3.中國醫科大學 第94期臨床醫學七年制英文班,遼寧 沈陽 110001
錳5,10,15,20-(4-苯甲酸)卟啉[ Mn(Ⅲ)tetrakis(4-benzoic acid)porphyrin chloride(MnTBAP)],分子式 C48H28ClMnN4O8,相對分子質量879.2,分子結構式示于圖1。常溫下MnTBAP為黑色晶體。MnTBAP是以卟啉環為配體的大環類SOD模擬物和廣譜的游離基清除劑,它同時具有SOD和過氧化氫酶(catalase,CAT)的特性[1]。文獻報道MnTBAP具有抗炎、抗氧化、抗自由基損傷、保護肝臟、神經損傷等作用[2-6]。雖然MnTBAP的藥效涉及很多方面,但其在生物體內的具體代謝和分布行為的報道較少,這妨礙了對MnTBAP相關藥效的更深入研究。本研究擬采用靈敏的放射性示蹤法分析MnTBAP在小鼠體內的分布特點,以揭示其主要的代謝方式。

圖1 MnTBAP的分子結構式
MnTBAP,Calbiochem公司,純度大于95%;Na131I,中國原子能科學研究院;Iodogen,Sigma公司;KM小鼠(SYXK(遼)2008-0005),中國醫科大學實驗動物中心;FJ-2008PS型γ計數儀,西安核儀器廠;PMI 170-9400磷屏成像儀,美國Bio-Rad公司;聚酰胺薄膜,國藥集團化學試劑有限公司;其它試劑為國產分析純。
采用Iodogen法對MnTBAP進行131I標記。標記管中預先涂以 Iodogen 50 μg,向標記管中依次加入50 μL MnTBAP樣品(1 g/L,二甲基亞砜(DMSO)溶解)、10 μL 18.5 MBq Na131I,振蕩反應10 min,以生理鹽水溶解,放置備用。以聚酰胺薄膜為支持介質,生理鹽水為展開劑,測定其標記率和放化純度。
采用薄層層析法,吸取碘化反應液2 μL,在距聚酰胺薄膜薄層層析板底端1 cm處點樣,游離131I-作為對照點樣,點樣直徑0.2 cm,冷風吹干。生理鹽水為展開劑,上行展開,131I-MnTBAP的Rf=0~0.1,游離的131I-的Rf=0.9。……