急性冠狀動脈綜合征患者調節性T細胞亞群Th3細胞的改變及臨床意義

[摘要] 目的 探討調節性T細胞亞群Th3細胞在急性冠脈綜合征（ACS）發病中的作用。 方法 32例急性心肌梗死（AMI）、37例不穩定型心絞痛（UAP）和31例穩定型心絞痛（SAP）患者為研究對象，采用流式細胞學檢測外周血單個核細胞，并計算Th3細胞比例（CD4+ TGF-β1+/CD4+ T細胞），ELISA檢測血漿中Th3相關細胞因子TGF-β1的表達水平。 結果 SAP組Th3細胞比例和TGF-β1表達水平顯著高于AMI組和UAP組，相比較差異有統計學意義（P ＜ 0.05）；而AMI組和UAP組Th3細胞比例和TGF-β1表達水平比較差異無統計學意義（P ＞ 0.05）。Th3細胞的比例與TGF-β1的表達水平呈正相關（r=0.547，P ＜ 0.01）。 結論 Th3細胞下調可能與ACS的發生和發展有關，Th3細胞可能成為預防和治療ACS新靶點。

[關鍵詞] 急性冠脈綜合征；Th3細胞；調節性T細胞亞群；TGF-β1

[中圖分類號] R541.4 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2012）04-0050-02

The alteration and its clinical significance of regulatory T cell subsets Th3 cells in patients with acute coronary syndrome

XIN Jun

Department of Cardiology， the First People's Hospital of Jiande City， Zhejiang Province， Jiande 311600， China

[Abstract] Objective To investigate the alteration of regulatory T cell subsets Th3 cells in patients with acute coronary syndrome (ACS). Methods All of 32 cases of patients with acute myocardial infarction (AMI)， 37 cases of patients with unstable angina pectoris (UAP)， 31 cases of patients with stable angina pectoris (SAP) were studied. The peripheral blood mononuclear cells of plasma were tested by flow cytometry， and calculated the proportion of Th3 cells (CD4+ TGF-β1+/CD4+ T cells). The expression of plasma Th3 cytokine TGF-β1 was detected by ELISA. Results The proportion of Th3 cells and TGF-β1 expression of the SAP group were higher than that of the AMI group and UAP group， and the differences were significant (P ＜ 0.05); The proportion of Th3 cells and TGF-β1 expression had no significant difference between AMI group and UAP group (P ＞ 0.05). There was positive correlation between the proportions of Th3 cells and TGF-β1 expression (r = 0.547， P ＜ 0.01). Conclusion The down-regulation of the Th3 cells may involve in the occurrence and disease progression of ACS. Th3 cells may become a new target for prevention and treatment of ACS.

[Key words] Acute coronary syndrome; Th3 cells; Regulatory T cell subsets; TGF-β1

冠脈綜合征已成為當前最嚴重的流行病之一，也是造成全球范圍內死亡的最主要原因。在我國，急性冠脈綜合征（acute coronary syndrome，ACS）的發病率和死亡率呈快速增長趨勢。ACS是由急性心肌缺血引起的急性冠脈事件的總稱，包括不穩定型心絞痛（UAP）、ST段抬高型心肌梗死（STEMI）、非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI）和心源性猝死（SCD）[1]。ACS發病急、變化快，是臨床常見的心血管急重癥[2]。冠狀動脈粥樣斑塊破裂及急性血栓形成是ACS的主要發病機制[3]，同時炎癥在粥樣斑塊的形成和發展以及斑塊的穩定性方面起重要作用。ACS患者存在著Th1細胞活性升高、Th2細胞活性降低，Th1/Th2的失衡是ACS的主要表現[4]。而有關Th3是否與冠狀動脈粥樣斑塊的不穩定性以及和ACS發生、發展有關還不清楚。本研究通過檢測ACS患者血清外周血Th3細胞/CD4+ T細胞比例和Th3相關細胞因子TGF-β1表達水平，探討Th3與ACS的發生、發展之間的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2008年10月～2011年10月我院住院診治的100例冠心病患者為研究對象，均符合診斷標準[5]。排除以下病例：心臟瓣膜病、心臟衰竭以及周圍血管疾病者，伴有腦卒中、嚴重的肝腎、惡性腫瘤者，有敗血癥和其他炎癥性疾病者，排除安裝有心臟起搏器和有過類固醇藥物史者。100例患者分為三組：急性心肌梗死（AMI）組：32例，其中男19例，女13例，年齡32～85歲，平均（58.12±11.79）歲，入選的AMI患者證實心肌梗死，肌鈣蛋白I水平和肌酸激酶同工酶水平顯著升高；不穩定型心絞痛（UAP）：37例，其中男22例，女15例，年齡31～84歲，平均（57.79±12.16）歲，入選的UAP患者明顯胸痛，心電圖提示ST段變化和/或T波倒置、有明顯的缺血性心電圖變化；穩定型心絞痛（SAP）組：31例，其中男18例，女13例，年齡33～86歲，平均（58.18±12.80）歲，入選的SAP患者出現典型的勞力性胸部不適并伴有ST段壓低＞1 mm。三組患者的年齡及性別構成比較差異無統計學意義（P ＞ 0.05）。

1.2 檢測方法

所有患者均于入院次日空腹12 h后平臥位取肘靜脈血5 mL置入肝素鈉抗凝管內（所采血時間均在發病24 h以內）。（1）外周血單個核細胞的分離按文獻方法進行[6]，流式細胞學檢測外周血單個核細胞，計算Th3細胞比例（CD4+TGF-β1+/CD4+T細胞）。（2）血樣以3 000 r/min，離心，分取血漿，保存于-80℃冰箱待測，Th3相關細胞因子TGF-β1的表達水平采用ELISA試劑盒分別檢測，人TGF-β1 ELISA試劑盒為Bender MedSystems公司產品。

1.3 統計學處理

數據用SPSS 13.0軟件進行分析，檢測結果以均數±標準差（x±s）表示，均數之間的比較用秩和檢驗，多組均數間采用單因素方差分析，采用Pearson作相關性檢驗，P ＜ 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組外周血Th3細胞比例和TGF-β1表達水平的比較

流式細胞學檢測結果顯示，SAP組Th3細胞比例顯著高于AMI組和UAP組，相比較有顯著性差異（F = 8.162，P = 0.001）；而AMI組和UAP組Th3細胞比例比較差異無統計學意義（Z = 0.392，P = 0.285）。ELISA檢測結果顯示，SAP組TGF-β1表達水平顯著高于AMI組和UAP組，相比較有顯著性差異（F = 9.667，P = 0.000）；而AMI組和UAP組TGF-β1表達水平比較差異無統計學意義（Z = 0.287，P = 0.298）。見表1。

2.2 Th3細胞比例和TGF-β1表達水平之間的相關性分析

經Pearson作相關性分析結果顯示，Th3細胞的比例與TGF-β1的表達水平呈正相關（r = 0.547，P ＜ 0.01）。

3 討論

目前有關冠心病的發病機制研究較多，免疫細胞和炎癥因子在冠狀動脈粥樣硬化的各個環節中發揮著重要的作用，炎性反應和免疫異常是導致冠狀動脈粥樣斑塊不穩定的最主要的因素之一[7]。T淋巴細胞是介導免疫應答的主要免疫細胞，按照T淋巴細胞的功能可以分為調節性T細胞、細胞毒性T細胞和輔助性T細胞等。調節性T細胞是通過分泌具有免疫抑制作用的細胞因子來發揮其抑制作用。有研究報道[8]，調節性T細胞主要有兩大類亞群，一類是CD4+CD25+調節性T細胞，它是固有的調節性T細胞；另一類是Th1、Th3、CD8+調節性T細胞，它們是誘導產生的調節性T細胞。其中Th3細胞是具有免疫抑制調節功能的調節性T細胞亞群，Th3與Th1、Th2的調節性T細胞亞群不同，它具有抑制與調節免疫效應細胞的增殖與分化，可以抑制細胞因子的產生等作用。

國內的研究報道認為[9]，Th1、Th2調節性T細胞的過度活化可以通過Th3抑制來調節，使Th1/Th2保持平衡，表明Th3細胞可能與冠心病發生有關，是冠心病的保護性因素，進一步推測下調Th3細胞的表達可能與不穩定型心絞痛的發生有關。國內外的研究報道[10]，Th3通過高分泌TGF-β1而維持機體自免，而TGF-β1在動脈硬化的形成過程中有著重要的作用，目前已證實TGF-β1是非法重要的炎癥免疫調節因子和斑塊穩定因子[11]。

本研究結果顯示，SAP組Th3細胞比例和Th3相關細胞因子（TGF-β1）表達水平均顯著高于AMI組和UAP組，而AMI組和UAP組Th3細胞比例和TGF-β1表達水平比較差異無統計學意義（P ＞ 0.05）?？梢钥闯?，SAP組存在Th3的比例和Th3相關細胞因子的高表達水平，提示Th3細胞可能與斑塊的穩定有關，是斑塊穩定的重要調節性T細胞，Th3細胞比例下調可能與斑塊不穩定和ACS的發生有關。分析其可能的機制：隨著ACS外周血Th3細胞比較的下降，對Th1細胞的抑制作用減弱，Th1細胞表現為功能性亢進，此時通過Th1下游一系列的細胞因子的協同作用而導致ACS的發生和發展。本研究結果顯示，Th3細胞的比例與TGF-β1的表達水平呈正相關。進一步證實Th3細胞及其分泌的細胞因子TGF-β1水平與ACS患者的發生和發展有關。

綜上所述，Th3細胞可能是ACS的保護性因素，Th3細胞下調可能與ACS的發生和發展有關，Th3細胞可能成為預防或者治療ACS新靶點。然而，目前有關Th3細胞參與ACS發生和發展的機制還不清楚，需要我們進一步深入研究。

[參考文獻]

[1] Singh SK，Suresh MV，Voleti B，et al. The connection between C-reactive protein and atherosclerosis[J]. Ann Med，2008，40（2）：110-120.

[2] Lloyd-Jones DM，Liu K，Tian L，et al. Narrative review：assessment of C-reactive protein in risk prediction for cardiovascular disease[J]. Ann Intern Med，2006，145（1）：35-42.

[3] 劉力斗，石漢文. 冠心病粥樣斑塊破裂與急性血栓形成的危險因素及機制[J]. 河北醫科大學學報，2003，24（5）：318-320.

[4] 薩京，曾秋棠，王祥，等. Th1/Th2細胞失衡在不穩定型心絞痛發病機制中的作用[J]． 臨床心血管病雜志，2005，21（10）：588-590.

[5] 楊新春，李延輝，王樂豐，等. 急性冠狀動脈綜合征[M]. 北京：人民衛生出版社，2009：20-21.

[6] Taleb S，Tedgui A，Mallat Z. Regulatory T-cell immunity and its relevance to atherosclerosis[J]. J Intern Med，2008，263（5）：489-499.

[7] 張志輝，周勝華，祁述善，等. 氧化應激、炎癥與冠心病患者冠狀動脈斑塊的關系[J]. 中南大學學報（醫學版），2006，31（4）：556-559.

[8] 涂梅峰，邵宗鴻，劉鴻，等. 重型再生障礙性貧血患者Th3細胞、調節T細胞數量和轉化生長因子β1的水平[J]. 中華血液學雜志，2006，27（11）：753-756.

[9] 羅祖軍，李艷華. 自身免疫性溶血性貧血患者外周血Th1/Th2、Th3/Tr1細胞的檢測及意義[J]. 熱帶醫學雜志，2009，9（5）：556-558.

[10] Bayry J，Siberil S，Triebel F，et al. Rescuing CD4+ CD25+ regulatory T-cell functions in rheumatoid arthritis by cytokine-targeted monoclonal antibody therapy[J]. Drug Discov Today，2007，12（13-14）：548-552.

[11] Lutgens E，Gijbels M，Smook M，et al. Transforming growth factor-beta mediates balance between inflammation and fibrosis during plaque progression[J]. Arterioscler Thromb Vasc Biol，2002，22（6）：975-982.

（收稿日期：2011-11-18）