血管內(nèi)皮生長因子、肝素酶、鈣黏蛋白與胃癌生物學(xué)行為關(guān)系的研究

[摘要] 目的 研究血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、肝素酶、鈣黏蛋白與胃癌生物學(xué)行為的關(guān)系。 方法 應(yīng)用免疫組化ABC法檢測(cè)91例胃癌患者癌組織及癌旁正常組織VEGF、肝素酶、鈣黏蛋白的表達(dá)。 結(jié)果 91例胃癌患者VEGF在癌組織陽性表達(dá)率為72.52%，癌周正常組織陽性表達(dá)率為16.48%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肝素酶在癌組織陽性表達(dá)率為80.21%，在癌周正常胃組織也有18.68%的表達(dá)率，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。鈣黏蛋白在胃癌組織陽性表達(dá)率為64.84%，癌周正常組織陽性率為92.31%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。VEGF、肝素酶和鈣黏蛋白的表達(dá)與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期相關(guān)，VEGF還與腫瘤大小相關(guān)，肝素酶和鈣黏蛋白與腫瘤大小不相關(guān)。肝素酶、VEGF和鈣黏蛋白的表達(dá)兩兩之間沒有相關(guān)性。 結(jié)論 VEGF、肝素酶在胃癌組織中表達(dá)增高，鈣黏蛋白在胃癌組織中表達(dá)降低，均與胃癌的生物學(xué)行為有關(guān)，聯(lián)合檢測(cè)VEGF、肝素酶、鈣黏蛋白對(duì)胃癌的預(yù)后判斷及治療有重大價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] 血管內(nèi)皮生長因子；肝素酶；鈣黏蛋白；胃癌

[中圖分類號(hào)] R735.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2012）03-0051-02

Research of relationship between VEGF， heparinase， E-cadherin and biological behavior of gastric cancer

FU Yuxiang MA Guiliang MAO Weizheng LI Yang

Department of General's Surgery Qingdao Municipal Hospital Affiliated to Medical College of Qingdao University， Qingdao 266071， China

[Abstract] Objective To investigate the relationship between vascular endothelial growth factor (VEGF)， heparinase， E-cadherin and gastric cancer biological behavior. Methods The expressions of VEGF， heparinase， E-cadherin proteins of 91 cases of gastric carcinoma and adjacent normal tissues were detected by immunohistochemistry. Results In gastric carcinoma and adjacent normal tissue， the positive expression rate of VEGF protein was 72.52% and 16.48% respectively， and there was significant difference between the two groups. The positive expression rate of heparinase protein was 80.21% and 18.68% respectively， and there was significant difference between the two groups. The positive expression rate of E-cadherin protein was 64.84% and 92.31% respectively， and there was significant difference between the two groups. The expressions of VEGF， heparinase， E-cadherin proteins were closely correlated with differentiation， depth of invasion， metastasis of lymph nodes and TNM stage. And the expression of VEGF protein was also closely correlated with tumor size， but the expressions of heparinase and E-cadherin proteins were not correlated with tumor size. Conclusion VEGF， heparinase， E-cadherin show high expressions in gastric cancer and are correlated with gastric cancer biological behavior. The united detection of the VEGF， heparinase， E-cadherin will be helpful to judge prognosis and formulate treatment program.

[Key words] VEGF; Heparinase; E-cadherin; Gastric cancer

浸潤轉(zhuǎn)移是胃癌一個(gè)本質(zhì)的生物學(xué)行為，是胃癌患者死亡率高、預(yù)后差的主要原因。癌組織的浸潤轉(zhuǎn)移是復(fù)雜的、多步驟的、多階段的、多基因的病理過程，其分子機(jī)制還不明確，研究與胃癌浸潤轉(zhuǎn)移相關(guān)的免疫分子，對(duì)胃癌的指導(dǎo)治療、預(yù)后判斷有重要價(jià)值。本文就研究血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、肝素酶、鈣黏蛋白（E-cadherin，E-cad）與胃癌生物學(xué)行為的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以了解VEGF、肝素酶、鈣黏蛋白能否作為胃癌浸潤轉(zhuǎn)移的臨床指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本

收集2010年2～6月手術(shù)切除的新鮮標(biāo)本及術(shù)后病理石蠟塊91例，術(shù)前未經(jīng)任何抗癌治療，其中男63例，女28例，年齡45～81歲，中位年齡62歲；根據(jù)2010年新TNM分期標(biāo)準(zhǔn)分為Ⅰ期10例，Ⅱ期21例，Ⅲ期38例，Ⅳ期22例。每例分別取胃癌組織及癌旁正常組織（距癌緣5 cm以上）各一塊，-80℃冰箱保存。術(shù)后病理示中高分化腺癌36例，低分化腺癌55例。

1.2 主要試劑

VEGF兔抗人抗體和E鈣黏蛋白兔抗人抗體購自美國Santa Cruz公司，肝素酶兔抗人抗體購自武漢博士德生物工程公司，SP試劑盒和DAB顯色試劑盒購自北京中山生物技術(shù)有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

VEGF、肝素酶、鈣黏蛋白在胃癌及癌周正常黏膜的表達(dá)通過免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)。組織經(jīng)1%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片。常規(guī)石蠟切片脫蠟。滴加內(nèi)源性過氧化酶阻斷劑，室溫下孵育20 min。熱抗原修復(fù)，切片置于盛有檬酸鹽緩沖液的高壓鍋中2 min。滴加正常羊血清封閉，室溫下孵育30 min。滴加一抗（1:50稀釋），4℃冰箱過夜。滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫下孵育30 min。DAB顯色，鏡下控制反應(yīng)時(shí)間。蘇木素輕度復(fù)染，脫水，透明，封片。陰性對(duì)照試驗(yàn)以PBS替代一抗。

1.4 半定量結(jié)果判定

染色強(qiáng)度分?jǐn)?shù)標(biāo)準(zhǔn)無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。同樣物鏡下陽性細(xì)胞數(shù)1分為陽性細(xì)胞數(shù)≤10%，2分為11%～50%，3分為51%～75%。兩類分?jǐn)?shù)乘積滿3分為（+），滿4分為（++），5分以上為（+++）。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。組間差異采用χ2檢驗(yàn)，VEGF、肝素酶和鈣黏蛋白表達(dá)與胃癌生物學(xué)行為的關(guān)系采用秩和檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析，P ＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肝素酶、VEGF、鈣黏蛋白的表達(dá)

肝素酶蛋白表達(dá)陽性產(chǎn)物位于細(xì)胞質(zhì)（圖1A），癌組織陽性表達(dá)率為80.21%，癌周正常胃組織也有18.68%的表達(dá)率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=68.931，P ＜ 0.05）。VEGF陽性產(chǎn)物位于細(xì)胞質(zhì)（圖1B），91例胃癌患者癌組織陽性表達(dá)率為72.52%，癌周正常組織陽性表達(dá)率為16.48%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=57.864，P ＜ 0.05）。鈣黏蛋白陽性表達(dá)產(chǎn)物位于細(xì)胞膜，細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核不表達(dá)，胃癌組織陽性表達(dá)率為64.84%，癌周正常組織陽性率92.31%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=20.396，P ＜ 0.05）。肝素酶、VEGF、鈣黏蛋白的表達(dá)相互之間無相關(guān)性。

2.2 VEGF、肝素酶、鈣黏蛋白的表達(dá)與胃癌生物學(xué)行為的關(guān)系

VEGF、肝素酶和鈣黏蛋白的表達(dá)與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期相關(guān)，VEGF還與腫瘤大小相關(guān)，肝素酶和鈣黏蛋白與腫瘤大小不相關(guān)。見表1。

3 討論

VEGF、肝素酶在低分化組中的表達(dá)明顯高于中高分化組，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，胃癌Ⅲ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期。E-cad在低分化組、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和胃癌Ⅲ～Ⅳ期組中是低表達(dá)的。表明VEGF、肝素酶和E-cad與胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移潛能密切相關(guān)，可作為胃癌生物學(xué)行為的標(biāo)志物。

VEGF是活性最強(qiáng)的血管生成因子之一，它能與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面受體特異性結(jié)合，誘導(dǎo)血管生成，促使血管通透性增加，導(dǎo)致血管內(nèi)的蛋白物質(zhì)滲透到血管外間隙，形成纖維基質(zhì)，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增生，最后使間質(zhì)血管化，為胃癌的浸潤轉(zhuǎn)移提供基礎(chǔ)[1]。VEGF還能促進(jìn)腫瘤的淋巴管生長，維持血管正常的結(jié)構(gòu)完整性，從而引起腫瘤細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移[2，3]。研究發(fā)現(xiàn)[4]，胃癌組織VEGF表達(dá)陽性的患者與VEGF表達(dá)陰性的患者相比，其腫瘤組織體積更大，病理分期更晚，腫瘤細(xì)胞浸潤程度更深，更容易發(fā)生轉(zhuǎn)移。肝素酶是一類能降解肝素類物質(zhì)的裂解酶，通常被稱作類肝素酶或乙酰肝素酶（heparanase），是通過水解硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的肝素類側(cè)鏈破壞細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的基本結(jié)構(gòu)，釋放并激活連接在肝素類側(cè)鏈上的活性物質(zhì)，與血管生成、腫瘤轉(zhuǎn)移等過程密切相關(guān)[5，6]，促進(jìn)了胃癌的浸潤轉(zhuǎn)移和血管形成[7]，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示肝素酶與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期相關(guān)，與腫瘤大小沒有相關(guān)性，與VEGF亦沒有相關(guān)性。

鈣黏蛋白（E-cad）是一類介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞之間相互黏附的具有鈣依賴性的跨膜糖蛋白，是主要的正常細(xì)胞生長接觸抑制劑，E-cad表達(dá)減少和異質(zhì)性使細(xì)胞間的黏附減弱，因此癌細(xì)胞更易脫落，這是癌轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)[8]。鈣黏蛋白在癌周正常組織的表達(dá)明顯高于癌組織。本研究顯示，VEGF、肝素酶、鈣黏蛋白的表達(dá)與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期等生物學(xué)行為相關(guān)，可作為胃癌浸潤轉(zhuǎn)移的分子指標(biāo)。由此，除了手術(shù)、放化療等治療手段外，可聯(lián)合基因工程或其他方法，抑制VEGF、肝素酶在癌組織中的表達(dá)，增強(qiáng)鈣黏蛋白的表達(dá)，為胃癌治療提供新手段。

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（收稿日期：2011-11-11）