內皮抑素聯合介入治療肝癌中血管生成的研究

[摘要] 目的 探討內皮抑素聯合介入治療肝癌中血管生成的研究。 方法 2009年8月～2011年8月，27例肝癌患者中15例多次行單純肝動脈化療栓塞（TACE），12例內皮抑素聯合TACE，在手術切除后的病理標本中的采用免疫組化方法分析兩組血管內皮生長因子（VEGF）的表達情況和平均微血管密度（MVD）值的差異。 結果 單純組VEGF的表達明顯高于內皮抑素組（P ＜ 0.05）；單純組MVD值顯著高于內皮抑素組（P＜0.05）。 結論 內皮抑素聯合TACE能夠抑制腫瘤血管的生成，減少腫瘤增長及轉移的機會，值得臨床進一步的研究與推廣。

[關鍵詞] 內皮抑素；血管內皮生長因子；經導管動脈化療栓塞；免疫組化；肝癌

[中圖分類號] R735.7 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2012）03-0146-02

Investigate the angiogenesis of liver cancer with interventional treatment combined endostatin

SUN Tao LU Chunfeng

Jiamusi University，Jiamusi 154000，China

[Abstract] Objective To discuss the angiogenesis of liver cancer with interventional treatment combined endostatin. Methods During August 2009 to August 2011， expressions of VEGF and MVD difference in 27 HCC patients， which 15 cases were treated with TACE and 12 cases with endostatin combined with TACE， determined with immunohistochemistry method after operation. Results Expressions of VEGF in simple TACE were higher than those in endostatin combined with TACE (P < 0.05); MVD values in simple TACE were higher than those in endostatin combined with TACE (P < 0.05). Conclusion TACE combined with endostatin can inhibit angiogenesis of tumor， reduce the chance of tumor growth and metastasis，and worthy of further research and extension in clinical.

[Key words] Endostatin; Vascular endothelial growth factor; Transcatheter arterial chemoembolization; Immunohistochemical; Liver cancer

肝癌是較常見的惡性腫瘤之一，預后較差，目前主要以手術切除為主，但大多數肝癌就診時已失去手術機會，經導管動脈化療栓塞（transcatheter arterial chemoembolization，TACE）成為治療的一種手段。TACE采用的是化療性栓塞，可造成腫瘤組織的缺血缺氧，相對地會引起血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的高度表達。VEGF是一種特異地作用于血管內皮細胞已糖化的多功能蛋白，能誘導微血管形成，促進腫瘤的侵襲及轉移，VEGF表達與腫瘤的轉移復發及預后密切相關[1]。血管內皮抑制素（endostatin）能特異性地抑制血管內皮細胞增殖和遷移，從而抑制腫瘤的生長和轉移。本文旨在探討內皮抑素聯合TACE在治療肝癌中血管的相關研究，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2009年8月～2011年8月，27例肝癌患者，其中男18例，女9例，年齡58～79歲，在介入治療前均未進行過任何治療。其中15例多次行單純TACE（1個月、2個月、半年），治療后手術切除肝癌；12例行內皮抑素聯合TACE（1個月、2個月、半年），并在治療后手術切除肝癌。

1.2 藥品及試劑

重組人血管內皮抑制素注射液（recombinant human endostatin，rh-endostatin；商品名：恩度，YH-16），山東麥得津先聲藥業，批號20070401；鼠抗人VEGF單克隆抗體（MAB-0243）、鼠抗人CD34單克隆抗體（MAB-0034）、SP免疫組化試劑盒（KIT-9701），福州邁新。

1.3 介入治療

1.3.1 單純TACE組 采用seldinger法穿刺插管，行腸系膜上動脈、腹腔干及肝固有動脈造影，再選擇性地插入腫瘤供血動脈造影，造影證實后，將多柔比星40 mg、絲裂霉素8 mg、5-Fu 0.5 g與碘化油10 mL充分混合乳化后，經導管注入腫瘤供血動脈，栓塞病灶。

1.3.2 內皮抑素聯合TACE組 方法同上組，不同在于藥物混合乳化時，多加一種藥物恩度30 mg，再經導管注入腫瘤供血動脈。

1.4 免疫組化方法及結果判定

采用S-P試劑盒（福州邁新）分析，按福州邁新提供說明進行免疫組化分析。VEGF蛋白分布于細胞漿中陽性染色呈棕黃色或棕褐色顆粒，整片觀察10個高倍視野，陽性細胞>10%為陽性，≤10%為陰性。微血管密度（microvessel density，MVD）計數方法：參照Weidner等[2]報道改進的計數方法，在低倍視野中，確定血管著色最密集區域，再在高倍視野下進行計數，取3個視野均值，即為MVD值。

1.5 統計學處理

所有結果經統計軟件SPSS13.0進行統計學分析，采用χ2檢驗、兩獨立樣本t檢驗，以α=0.05作為檢驗水準，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

在對肝癌的治療中，從表1中可看出VEGF的表達單純組與內皮抑素組的陽性率分別為66.67%、25.00%，χ2=4.64，具有統計學意義（P<0.05），內皮抑素組可以更好地抑制VEGF的表達，MVD值（表1）也進一步地驗證內皮抑素組較好地抑制血管的生成。

3 討論

原發性肝癌是較常見的一種消化系統腫瘤，發病率和死亡率均極高，臨床癥狀一般情況下出現較晚，當患者發現時多已是中晚期，而手術等治療方法對于中晚期患者療效并不太明顯，其原因是肝癌的血供豐富，并具有較強的生長和轉移的能力。腫瘤的生長和轉移需要血管新生，研究發現促進血管新生的血管內皮生長因子（VEGF）為一主要因子。

VEGF為一種特異地作用于血管內皮細胞己糖化的多功能蛋白，它的高表達與腫瘤微血管密度、惡性程度、患者預后不良等密切相關[3]。在肝癌中腫瘤的生長必然需要血管的生成，而VEGF在肝癌患者中的表達明顯高于其它患有肝臟疾病和正常的人[4]。Brodsky等[5]曾研究過肝癌組織血管內皮生長因子的表達。他們采用免疫組化的方法對肝癌組織、癌旁組織及正常組織中VEGF進行表達，研究發現肝癌組織的VEGF水平明顯高于癌旁組織和周圍正常組織。

1997年O′Reilly等[6]從小鼠血管內皮細胞瘤（EOMA）的培養上清中提取出的一種新的強效血管生成抑制因子，命名為內皮抑制素。它由內生性膠原ⅩⅧ羧基端的183個氨基酸殘基構成，可直接作用于血管內皮細胞，特異性地抑制血管內皮細胞增殖和遷移，從而抑制腫瘤的生長和轉移。

本文中所有患者均采用TACE治療，其作用是通過高濃度的化療劑和血管栓塞劑，阻斷腫瘤組織的供血，使癌細胞壞死凋亡，造成了腫瘤組織缺血、缺氧。Folkman等[7]提出，當腫瘤局部造成乏氧的環境下，則啟動血管生成促進因子如VEGF等的產生，從而促進腫瘤的生長和轉移。內皮抑素聯合TACE可抑制VEGF的表達，減少腫瘤血管的生成，國內曾有人報道[8]內皮抑素聯合TACE介入治療肝癌，取得較好的療效。在本組研究中，VEGF的表達經統計學分析，χ2值為4.64，差異具有統計學意義（P < 0.05），內皮抑素組具有更好的抑制VEGF的表達。微血管密度（MVD）直接反映腫瘤血管的生長情況，以CD34計數的MVD值能反映肝癌新生血管形成[9]。本文中MVD值的差異經t檢驗，差異具有統計學意義（P < 0.05）。內皮抑素聯合TACE組能夠較明顯地抑制腫瘤血管的生成，從而達到抑制腫瘤的生長與轉移。但本研究時間較短，患者采用了手術切除病灶。而采用非手術治療，單純內皮抑素聯合TACE的遠期療效還需進一步觀察。

總之，對VEGF與肝癌的研究已經取得了一定的進展，內皮抑素已更廣泛地應用于臨床，內皮抑素聯合TACE將會在治療肝癌中得到進一步的深入研究及廣泛推廣，成為治療肝癌的一種新手段。

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（收稿日期：2011-11-23）