氣相色譜-質(zhì)譜法分析蜂膠與楊樹膠化學(xué)組分及鑒別研究

摘要：以氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀分別對蜂膠和楊樹膠的化學(xué)組分進行了分離鑒定，共鑒定出７５種物質(zhì)。初步確定兩種樣品中２，６－二羥基－４－甲氧基查耳酮、高良姜素和柚木柯因的含量有明顯差異，而且僅在楊樹膠中發(fā)現(xiàn)了愈創(chuàng)木醇、１－甲基－４－（６－甲基－５－庚烯－２－基）苯、２－苯基苯并咪唑。結(jié)果表明，可將上述物質(zhì)作為蜂膠中的標志性物質(zhì)進行檢測與辨別。

關(guān)鍵詞：蜂膠；樹膠；化學(xué)組分；ＧＣ－ＭＳ

中圖分類號：Ｏ６５７．７＋１ 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０12）02－0382-03

Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ Ｐｒｏｐｏｌｉｓ ａｎｄ Ｙａｎｇ Ｇｕｍ ｂｙ ＧＣ－ＭＳ

ＷＡＮＧ Ｘｉａｎｇ－ｐｉｎｇ，Ｌ?譈 Ｂｉｎ，ＬＩＵ Ｗｅｉ－ｚｈｏｎｇ，ＹＡＮ Ｆｅｎｇ－ｘｉａｎ，ＷＡＮＧ Ｒｏｎｇ

（Ｊｉａｎｇｓｈａｎ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ＆ Ｔｅｓｔ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｑｕａｌｉｔｙ ＆ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ， Ｊｉａｎｇｓｈａｎ ３２４１００， Ｚｈｅｊｉａｎｇ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ７５ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｉｎ ｐｒｏｐｏｌｉｓ ａｎｄ yａｎｇ ｇｕｍ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ＧＣ－ＭＳ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ２， ６－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ－４－ｍｅｔｈｏｘｙ ｃｈａｌｃｏｎｅｓ， ５－ｈｙｄｒｏｘｙ－７－ｍｅｔｈｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ ａｎｄ ｇａｌａｎｇｉｎ ｗｅｒｅ ｏｂｖｉｏｕｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｂｅｔｗｅｅｎ ｉｎ ｐｒｏｐｏｌｉｓ ａｎｄ yａｎｇ ｇｕｍ， ａｎｄ ｇｕａｉｏｌ， １－（１，５－ｄｉｍｅｔｈｙｌ－４－ｈｅｘｅｎｙｌ）－４－ｍｅｔｈｙｌ－ｂｅｎｚｅｎｅ， ａｎｄ ２－ｐｈｅｎｙｌ－１Ｈ－ｂｅｎｚｉｍｉｄａｚｏｌｅ ｗｅｒｅ ｏｎｌｙ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｔｈｅ yａｎｇ ｇｕｍ． Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ， ｔｈｅｓｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｔｈｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｐｒｏｐｏｌｉｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｐｒｏｐｏｌｉｓ； ｙａｎｇ ｇｕｍ； ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ； ＧＣ－ＭＳ

蜂膠為蜜蜂從植物的葉芽中采集的樹脂混入蜂蠟和腺體分泌物形成的膠狀物質(zhì)，多為青褐色、黃褐色［１］。蜂膠中含有大量萜烯類、黃酮類、脂肪酸類物質(zhì)，具有抗菌、降血脂、降血糖、降血壓、抗氧化、增強免疫力等功能，素有“紫黃金”之稱［２］。近年來，隨著蜂膠保健功效逐漸被認識，蜂膠的市場價值也越來越大。目前蜂膠研究主要針對蜂膠的生理活性、有效成分的分析測定及真?zhèn)蔚蔫b定等方面展開［３］，對于其組成的研究相對較少［４］。

楊樹膠是人工采集的楊樹芽經(jīng)過高溫蒸煮后，再經(jīng)過乙醇浸泡提取濃縮出來的黑色膠狀物質(zhì)［５］。該膠與蜂膠外形相似，但其價格低廉，生理活性較差，少數(shù)不法商家為了牟利，在蜂膠及其制品中摻入楊樹膠，欺詐消費者。

本試驗利用氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀分別對蜂膠和楊樹膠中的組分作了定量分析，通過比較兩者中的標志化合物，為鑒別真假蜂膠提供鑒定方法。

１ 材料與方法

１．１ 儀器與材料

安捷倫ＧＣ７８９０／５９７５ｃＭＳＤ，ＨＰ－５ＭＳ（３０ ｍ×０．２５ ｍｍ × ０．２５ μｍ） 彈性石英毛細管柱。

蜂膠由浙江江山健康蜂業(yè)有限公司提供，符合ＳＢ／Ｔ １００９６－１９９２標準中的一等品，乙醇提取物的質(zhì)量百分比含量為６８％；楊樹膠購于市場。

１．２ 方法

１．２．1 樣品的處理 稱取５０ ｇ蜂膠，加２００ ｍＬ體積比為９５％的乙醇－水溶液，在室溫下攪拌提取２４ ｈ，收集提取液，殘渣重復(fù)提取一次，合并提取液，置于－１８ ℃下過夜，抽濾３次，去除上層漂浮的蠟層［6］。濾液在減壓蒸發(fā)下濃縮至稠膏狀，即為蜂膠乙醇提取浸膏。分別稱取蜂膠乙醇浸膏和楊樹膠２．５ ｇ，用無水乙醇溶解并定容到２５ ｍＬ，供ＧＣ－ＭＳ分析。

１．２．2 氣相色譜條件 ＨＰ－５ＭＳ（３０ ｍ×０．２５ ｍｍ×０．２５ μｍ）彈性石英毛細管柱，載氣為高純氦氣（９９．９９９％），流速為０．９ ｍＬ／ｍｉｎ，進樣口溫度２５０ ℃（不分流進樣），進樣量１ μＬ。采用程序升溫，條件為：７０ ℃保持４ ｍｉｎ，以１０ ℃／ｍｉｎ升溫至２２０ ℃，保持２２０ ℃ ５ ｍｉｎ，以２ ℃／ｍｉｎ升溫至２８０ ℃，保持２５ ｍｉｎ，溶劑延時５ ｍｉｎ［7］。

１．２．3 質(zhì)譜條件電離方式 ＥＩ源：離子源溫度為２８０ ℃，四極桿溫度為１５０ ℃，電子倍增器電壓為１２７ ４ Ｖ，電子能量為７０ ｅＶ；發(fā)射電流為３４．６ μＡ，接口溫度為２３０ ℃，荷質(zhì)比掃描范圍在５０ ａｍｕ到５５０ ａｍｕ之間［8］。

２ 結(jié)果與分析

在上述條件下，經(jīng)工作站檢索ＮＩＳＴ９８譜圖庫鑒定出７５個化合物并通過Ｇ１７１０ＢＡ化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)按面積歸一法進行自動積分計算，求得蜂膠和楊樹膠中各種成分的含量。

蜂膠中共鑒定出７５種化合物（圖１），解析率達到８０％以上，其中含有大量的黃酮類、芳香酸、醇及酯類化合物、萜烯類化合物，共鑒定出８個黃酮類化合物，總黃酮含量達到４０．６５％，黃酮種類與早期報道相似［９］，另外，還有２－甲氧基－４－乙烯基苯酚、３，４－二甲氧基肉桂酸、棕櫚酸、棕櫚酸乙酯、順式－十八碳烯酸、油酸乙酯、反式阿魏酸、α－桉葉醇、２′， ６′－二羥基－４′－甲氧基查耳酮、松屬素、柚木柯因、大黃素甲醚、柯因、高良姜素等從蜂膠中鑒定出來；在楊樹膠中共鑒定出７１種化合物（圖２），總黃酮含量略高于蜂膠，有９個黃酮類化合物，總黃酮含量達到４１．４３％，與早期文獻一致［１０］，鑒定的物質(zhì)包括：苯乙醇、對乙烯基愈瘡木酚、１－甲基－４－（６－甲基－５－庚烯－２－基）苯、愈創(chuàng)木醇、５－苯基－２，４－戊二烯酸、２－苯基苯并咪唑、柚木柯因、大黃素甲醚、柯因等。

需要指出的是，蜂膠和楊樹膠中有部分組分一致，只是含量略有差異，另有部分組分差異顯著。如２－甲氧基－４－乙烯基苯酚、３，４－二甲氧基肉桂酸、棕櫚酸、棕櫚酸乙酯、順式－十八碳烯酸、油酸乙酯、反式阿魏酸、乙酸肉桂酯、９－十八碳烯酸甲酯、二十五烷－２－酮、３，４－二氫－６，８－二羥基－３－甲基黃酮、反油酸、油酸乙酯、乙酸金合歡酯、４－乙酰基－３－甲氧基肉桂酸、６－異丙基－８α－甲基－十氫化萘－３－酮、β－ 紫羅蘭酮、環(huán)十二烷、１－二十六烷醇、１－十九烯、二甲基嗎啡烷等組分僅存在蜂膠中，是蜂膠中所特有組分。

而苯乙醇、對乙烯基愈瘡木酚、１－甲基－４－（６－甲基－５－庚烯－２－基）苯、愈創(chuàng)木醇、５－苯基－２，４－戊二烯酸、２－苯基苯并咪唑、２，３－二氫香豆酮、４－羥基－３－甲基苯乙酮、咕巴烯、β－倍半水芹烯、別香橙烯、佛手油烯、反式桂皮酸、α－依蘭油烯、α－柏木烯、γ－依蘭油烯、γ－杜松烯、β－依蘭油烯、β－綠葉烯、δ－杜松醇、α－甜沒藥萜醇、ε－依蘭油烯、莰烯等組分僅存在于楊樹膠中。

α－桉葉醇、２′－，６′－二羥基－４′－甲氧基查耳酮、松屬素、柚木柯因、大黃素甲醚和柯因等幾種物質(zhì)在蜂膠和楊樹膠中均存在，只是含量有所差異，詳見表１。

３ 討論

一般認為，蜂膠組分主要來源于植物自身的分泌物、蜜蜂自身代謝物以及采集蜂膠過程中引入的物質(zhì)等３種途徑。其中植物分泌物是蜂膠化學(xué)組分的最主要來源。因此，目前蜂膠和楊樹膠大多只能通過普通的感官檢驗來確定，假如在蜂膠中摻入少量的楊樹膠就難以鑒定出來。本文采用ＧＣ－ＭＳ法對蜂膠和楊樹膠的化學(xué)組分進行分析，結(jié)果表明蜂膠和楊樹膠中的２，６－二羥基－４－甲氧基查耳酮、高良姜素和柚木柯因的含量有明顯差異。３，４－二甲氧基肉桂酸、棕櫚酸、１－二十六烷醇、１－十九烯只在蜂膠中存在并且含量均高于２％，愈創(chuàng)木醇、１－甲基－４－（６－甲基－５－庚烯－２－基）苯、２－苯基苯并咪唑在楊樹膠中存在而在蜂膠中不存在。因此，可通過檢測愈創(chuàng)木醇、１－甲基－４－（６－甲基－５－庚烯－２－基）苯、２－苯基苯并咪唑是否存在于蜂膠中來鑒別蜂膠中是否摻入了楊樹膠，而通過檢測２，６－二羥基－４－甲氧基查耳酮、柚木柯因和高良姜素的含量來確定蜂膠的真?zhèn)魏蛽郊俪潭取?/p>

本試驗通過采用ＧＣ－ＭＳ法對蜂膠和楊樹膠的化學(xué)組分進行分析，共鑒定出７０多種組分。通過數(shù)據(jù)分析，提出了兩種可能的方法來鑒別真假蜂膠，為制定真假蜂膠的判定方法提供了具有一定參考價值的數(shù)據(jù)。后期將進一步加大樣本量的分析，完善真假蜂膠的鑒別方法。

參考文獻：

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［３］ 欒金水，王南舟，田 路． 蜂膠的藥理作用研究［Ｊ］． 中藥材，２０００，２３（６）：３４６－３４８．

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［７］ 付宇新，徐元君，陳 濱，等． 氣相色譜／質(zhì)譜法分析內(nèi)蒙古蜂膠揮發(fā)性成分［Ｊ］．分析化學(xué)，２００９，３７（５）：７４５－７４８．

［８］ 王小平，陳玉芬，李雅萍， 等．蜂膠化學(xué)成分的提取方法研究［Ｊ］． 現(xiàn)代食品科技，２００７，２３（６）：７３－７６．

［９］ 余蘭平，盛文勝． 氣相色譜／質(zhì)譜法分析蜂膠和楊樹膠的化學(xué)成分［Ｊ］． 蜜蜂雜志，２００６（６）：３－５．

［１０］ 王小平，林 勵，潘建國，等． 甘肅蜂膠中化學(xué)成分的氣相色譜／質(zhì)譜聯(lián)用分析［Ｊ］． 時珍國醫(yī)國藥，２００８，１９（３）：５５９－５６１．