人參皂苷抗雞新城疫病毒的試驗研究

摘要：為探討人參皂苷抗雞新城疫病毒的作用機理，試驗用雞新城疫病毒人工感染雛雞，采取人參皂苷口服，觀察試驗雞只的臨床癥狀及體重變化，測定血清抗體效價的變化情況。結果表明，人參皂苷組可以明顯推遲人工感染雞新城疫病毒（ＮＤＶ）雛雞的發(fā)病日齡，縮短病雞的發(fā)病過程。試驗雞飼喂人參皂苷后可明顯降低發(fā)病率和死亡率并促進抗體的產(chǎn)生。說明人參皂苷可以降低病毒對組織的損害程度，增強雛雞對新城疫病毒的抵抗力。

關鍵詞：雞新城疫；人參皂苷；抗病毒

中圖分類號：Ｓ８５２．６５＋９．５ 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０12）02－0351-03

Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ ａｇａｉｎｓｔ Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｖｉｒｕｓ

ＬＩ Ｊｕｎ－ｘｉａ，ＳＵ Ｊｉａｎ－ｑｉｎｇ，ＣＨＵ Ｘｉｕ－ｌｉｎｇ

（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ， Ｌｉａｏcｈｅｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ ２５２０００，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｔｉ－ｖｉｒｕｓ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ， ｔｈｅ ｃｈｉｃｋｅｎｓ ａｒｔｉｆｉｃｉａｌｌｙ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ｗｅｒｅ ｔａｋｅｎ ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ ｏｒａｌｌｙ， ａｎｄ ｔｈｅｎ ｉｔｓ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｙｍｐｔｏｍｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｈｔ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔｉｔｅｒ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ａｎｄ ｔｅｓｔｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｎｓｅｔ ｄａｙ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｃｈｉｃｋｅｎｓ ｉｎ ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｅｌａｙｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ ｐｒｏｃｅｓｓ ｗａｓ ｓｈｏｒｔｅｎｅｄ． Ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｃｈｉｃｋｅｎ ｆｅｅｄ ｗｉｔｈ ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅｓ， ｉｔ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍｏｒｂｉｄｉｔｙ ａｎｄ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｒｅｄｕｃｅｄ． Ｉｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ ｃｏｕｌｄ ｐｒｏｍｏｔｅ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ． Ｉｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅｓ ｃｏｕｌｄ ｒｅｄｕｃｅ ｔｈｅ ｄａｍａｇｅ ｏｆ ｖｉｒｕｓ ｔｏ ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ， ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ ｃｈｉｃｋｅｎｓ ｔｏ ｔｈｅ ｖｉｒｕｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ； ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ； ａｎｔｉ－ｖｉｒｕｓ

人參皂苷（Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ）是中藥人參所含的主要有效成分之一［１－３］，大量研究結果表明，人參皂苷具有增強機體免疫力、抑制腫瘤細胞生長、調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能、抗疲勞和延緩衰老等多種藥理作用［４－６］。本試驗用新城疫病毒（NDV）人工感染雛雞模型，采取人參皂苷口服，動態(tài)觀察雞的發(fā)病情況，并比較治療組和病毒對照組的病變差異。旨在觀察人參皂苷抗ＮＤＶ的效果，以篩選出作用較好的抗病毒中藥，為研制新型抗病毒藥提供理論依據(jù)。

１ 材料與方法

１．１ 材料

試驗用１日齡海蘭褐小公雞８０只，購于河北北方學院牧場種禽廠。雛雞均健康且營養(yǎng)狀況良好，攻毒前后飼喂條件相同。

新城疫病毒（ＮＤＶ）由聊城大學農(nóng)學院動物科學系實驗室提供。

１．２ 方法

１．２．１ 動物分組 ８０只健康１日齡雛雞，飼養(yǎng)觀察３ ｄ后稱重，隨機分成４組。

人參皂苷組與鹽酸嗎啉胍對照組：４日齡雛雞共２０只，6日齡時開始用藥，在８日齡時接毒，常規(guī)管理。

病毒感染對照組：４日齡雛雞共２０只，在８日齡時接毒，常規(guī)管理。同時設正常對照組。

１．２．２ 給藥途徑和劑量 人參皂苷組每千克飼料添加０．５ ｇ人參皂苷，鹽酸嗎啉胍對照組每千克飼料加２ ｇ藥物，均拌料飼喂。６日齡開始飼喂人參皂苷或鹽酸嗎啉胍，飼喂２ ｄ后攻毒。攻毒后繼續(xù)給藥７ ｄ，試驗期為10 ｄ。病毒感染對照組和正常對照組不用藥。

１．２．３ 雞的ＮＤＶ人工感染途徑和劑量 人參皂苷組、鹽酸嗎啉胍對照組和病毒感染對照組，８日齡時用ＮＤＶ強毒攻擊，每羽注射劑量為含２ ０００ PFU的ＮＤＶ強毒株０．２ ｍＬ，接毒途徑為腹腔注射。

正常對照組：腹腔注射等量的生理鹽水。

各組試驗雞分別嚴格隔離飼養(yǎng)，自由采食和飲水，飼養(yǎng)管理條件力求一致。

１．２．４ 接毒后處理

１）臨床癥狀觀察。每天檢查雛雞被毛、精神狀態(tài)、體態(tài)姿勢、運動情況、食欲、飲欲等變化；并統(tǒng)計試驗雞只的發(fā)病率、死亡率與平均生存天數(shù)等。

２）體重變化觀察。在攻毒前對所有雞進行稱重。然后在試驗結束對所有存活雞稱重，最后對各組雞的體重進行分析。

３）血清抗體效價的測定。采用間接ＥＬＩＳＡ法測定血清抗體的效價。

１．２．５ 數(shù)據(jù)統(tǒng)計和分析 應用生存率分析Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ法分析各組試驗雞的生存率；應用時序檢驗ｌｏｇ－ｒａｎｋ法檢驗對照組和治療組的差異；各組試驗雞的平均幸存時間通過Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ方法估計；組間幸存率的差異通過Ｆｉｓｈｅｒ’ｓ ｅｘａｃｔ 檢驗分析；應用ｔ檢驗分析血清抗體的差異。

２ 結果

２．１ 臨床癥狀觀察

正常對照組：一直到試驗結束，２０只雞全部生長正常，沒有發(fā)病。

病毒對照組：病毒對照組在攻毒后第4天就有2只雞發(fā)生死亡，是所有攻毒組出現(xiàn)臨床癥狀最早的組。病雞表現(xiàn)為精神沉郁，表現(xiàn)呼嚕、咳嗽、張口呼吸、食欲廢絕、嗉囊內(nèi)積水，排黃綠色、草綠色或黃白色稀糞、體溫升高。

鹽酸嗎啉胍組：試驗雞的發(fā)病和出現(xiàn)死亡時間比病毒對照組要晚。第1例死亡發(fā)生在攻毒后第5天，病雞的發(fā)病和死亡也比較集中。

人參皂苷組：人參皂苷組的發(fā)病和死亡出現(xiàn)時間明顯晚于病毒對照組和鹽酸嗎啉胍組，第1例死亡發(fā)生在攻毒后第6天，比病毒對照組晚了2 ｄ。并且人參皂苷組試驗雞的發(fā)病和死亡呈零星和散發(fā)狀態(tài)。

由此可見，人參皂苷組可以明顯推遲人工感染ＮＤＶ雛雞的發(fā)病日齡，縮短ＮＤ病雞的發(fā)病過程。

２．２ 死亡率和平均存活時間

在試驗期間，只要是表現(xiàn)出臨床癥狀的雞（如下痢、消瘦、癱瘓等），都統(tǒng)計為發(fā)病雞。從表１可以看出，病毒對照組試驗雞發(fā)病率、死亡率明顯高于用藥組。正常對照組雞生長發(fā)育正常，無死亡。通過生存率時序檢驗比較治療組和對照組之間的生存率差異。結果顯示人參皂苷組的生存率和鹽酸嗎啉胍組無差異（Ｐ＞０．０５），但顯著大于病毒對照組（Ｐ＜０．０５）；鹽酸嗎啉胍組的生存率和病毒對照組比較差異不顯著，僅有降低趨勢（Ｐ＞０．０５）（見表２）。說明試驗雞飼喂人參皂苷后可明顯降低發(fā)病率和死亡率。

各組的死亡率不同，死亡時間也不一致。以病毒對照組和鹽酸嗎啉胍組的死亡速度最快，人參皂苷組的死亡速度相對較慢。通過Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ 方法估計各組的平均生存時間。人參皂苷組的存活時間為（7．23±1．72）ｄ；鹽酸嗎啉胍的存活時間為（６．72±1．0６）ｄ；病毒對照組的存活時間為（４．８0±0．95）ｄ。病毒對照組的生存時間最短。

２．３ 體重增重變化

由表3可知，對試驗雞增重差異進行比較，結果發(fā)現(xiàn)以病毒對照組增重最小，其次是鹽酸嗎啉胍組，人參皂苷組的增重最接近正常對照組。

２．４ 血清抗體水平檢測

通過對試驗末所有存活雞進行剖殺，收集血樣，分離血清，用ＥＬＩＳＡ的方法進行抗體檢測，人參皂苷組ＯＤ值為０．４９２±０．０２９，鹽酸嗎啉胍組和病毒對照組分別為０．３８１±０．０４１、０．０４１±０．０３１。結果表明，人參皂苷組的抗體水平略高于鹽酸嗎啉胍組和病毒對照組。說明人參皂苷對感染雞抗體水平有一定的促進作用。

３ 討論

通過試驗結果表明，人參皂苷能夠推遲人工感染雞的發(fā)病時間，明顯降低人工感染雞的發(fā)病率和死亡率。從剖檢變化中可以發(fā)現(xiàn)，人參皂苷組的病變范圍明顯低于病毒對照組。結合各組體重變化的差異，人參皂苷很可能是通過增強機體的免疫力來達到抗病毒效果的。這也和ＮＤ的發(fā)病機制相一致。試驗結果表明，人參皂苷對ＮＤ死亡率的影響與鹽酸嗎啉胍組相比差異不顯著，但是和病毒對照組差異顯著。可以說明，藥物的綜合防治效果以人參皂苷最好，其次是鹽酸嗎啉胍。可能和它們的作用機制不同有關。鹽酸嗎啉胍的抗病毒機制主要是通過阻斷ＲＮＡ聚合酶的活性和蛋白質(zhì)的合成來發(fā)揮抗病毒作用的，沒有提高機體免疫力的作用。人參皂苷能夠顯著提高機體的免疫力，增強抗病毒能力。這是中藥抗病毒效果優(yōu)于西藥的原因，也是中藥抗病毒的一大優(yōu)點［７－９］。通過間接ＥＬＩＳＡ實驗檢測試驗末存活雞的血清抗體水平，所有攻毒組的血清抗體水平的ＯＤ值均高于正常對照組，說明耐過雞均產(chǎn)生了針對ＮＤＶ的體液免疫。人參皂苷組的ＯＤ值要高于鹽酸嗎啉胍和病毒對照組，說明人參皂苷能夠促進抗體的產(chǎn)生。

Ｌｅｅ等［１０］已經(jīng)證實人參皂苷可以促進機體抗體水平的提高，對體液免疫有加強作用，但在本試驗中，發(fā)現(xiàn)各組抗體水平的ＯＤ值差異不顯著。我們認為文獻報道的人參皂苷對體液免疫加強的作用是在機體正常條件下，作為疫苗佐劑來發(fā)揮作用的。人參皂苷的免疫保護效果已經(jīng)有很多報道［１１，１２］，國內(nèi)外學者通過諸多試驗證明，人參皂苷的免疫促進作用，是通過體液免疫和細胞免疫兩種途徑共同實現(xiàn)的，人參皂苷的細胞免疫作用是通過對多種免疫細胞的影響即增強巨噬細胞的吞噬作用、剌激Ｔ淋巴細胞和Ｂ淋巴細胞功能、增強殺傷細胞活性及誘導干擾素而使機體免疫功能大為增強［１３－１５］。人參皂苷的體液免疫作用是通過特異性體液免疫和非特異性體液免疫途徑中某些環(huán)節(jié)，如免疫球蛋白或補體成分而發(fā)揮作用的［１６］。結合本試驗研究結果，證明人參皂苷對雞的細胞免疫和體液免疫功能均有增強作用，這對雞病毒性疾病的防治具有十分重要的意義，是西藥抗病毒藥鹽酸嗎啉胍所不能比擬的。

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