多穗柯不同液相提取物對糖尿病小鼠MDA/CAT活性的影響

摘要：用鏈脲佐菌素（ＳＴＺ）建立糖尿病ＫＭ小鼠模型，將糖尿病ＫＭ小鼠分成陽性對照組（二甲雙胍組）、多穗（Ｌｉｔｈｏｃａｒｐｕｓ ｐｏｌｙｓｔａｃｈｙｕｓ Ｒａｈｅｄ）柯乙酸乙酯提取物（高、中、低）組、多穗柯水提取物（高、中、低）組。每天對模型試驗組灌胃多穗柯不同液相提取液［高劑量組２００ ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）、中劑量組１００ ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）、低劑量組５０ ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）］，正常組灌胃生理鹽水，陽性對照組灌胃二甲雙胍片溶液，每隔３ ｄ測量ＫＭ小鼠血糖值。１５ ｄ后，斷頭取血，測量其血清中的丙二醛（ＭＤＡ）、過氧化氫酶（ＣＡＴ）值。結果表明，多穗柯乙酸乙酯、水相提取液都能降低小鼠血糖和小鼠血清中的ＭＤＡ值，可使小鼠血清中的ＣＡＴ值恢復。多穗柯提取液具有降血糖功效，對糖尿病小鼠具有一定的調節保護作用。

關鍵詞：多穗柯；降血糖；丙二醛（ＭＤＡ）；過氧化氫酶（ＣＡＴ）

中圖分類號：ＴＳ２０１．２＋５ 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０12）02－0354-03

Ｔｈｅ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｒｏｍ Ｌｉｔｈｏｃａｒｐｕｓ pｏｌｙｓｔａｃｈｙｕｓ Ｒaｈｅｄ ｏｎ ｔｈｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＣＡＴ ａｎｄ ＭＤＡ ｉｎ Ｄｉａｂｅｔｉｃ Ｍｉｃｅ

ＺＨＡＮＧ Ｊｉａｎ，ＺＥＮＧ Ｊｕｎ－ｙｉｎｇ，ＴＡＮＧ Ｍｉｎｇ

（Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｈｕｎａｎ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ ｆｏｒ Ｓｔｕｄｙ ａｎｄ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｔｈｎｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｐｌａｎｔ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ，Ｈｕａｉｈｕａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，

Ｈｕａｉｈｕａ ４１８００８，Ｈｕｎａｎ，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉｄｉａｂｅｔｉｃｓ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｒｏｍ Ｌｉｔｈｏｃａｒｐｕｓ ｐｏｌｙｓｔａｃｈｙｕｓ Ｒａｈｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｍｉｃｅ， ｔｈｅ ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｃｉｎ ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｉａｂｅｔｉｃ ＫＭ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ａｌｌｏｃａｔｅｄ ｔｏ ７ ｇｒｏｕｐｓ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ， ｔｈｒｅｅ Ｌ. pｏｌｙｓｔａｃｈｙｕｓ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｇｒｏｕｐｓ ａｎｄ ｔｈｒｅｅ Ｌ. pｏｌｙｓｔａｃｈｙｕｓ ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ， ｍｉｄｄｌｅ ａｎｄ ｌｏｗ ｌｅｖｅｌ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｉｎ ｔｒｅａｔ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｔａｋｅｎ ｅａｃｈ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｏｓｅ， ｉ．ｅ． ５０ ｍｇ／ｋｇ、１００ ｍｇ／ｋｇ ｏｒ ２００ ｍｇ／ｋｇ ｅｖｅｒｙ ｄａｙ． Ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｉｃｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｃｏｎｔｒｏｌ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｔａｋｅｎ salt ｗａｔｅｒ ｏｒａｌｌｙ． Ｔｈｅ ｍｉｃｅ ｉｎ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｔａｋｅｎ ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ． Ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ ｇｌｕｃｏｓｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｅｖｅｒｙ ｔｈｒｅｅ ｄａｙｓ． Ａｆｔｅｒ １５ ｄａｙｓ， ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ ｏｆ ａｌｌ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ （ＭＤＡ） ａｎｄ ｃａｔａｌａｓｅ （ＣＡＴ） ｖａｌｕｅ ｉｎ ｓｅｒｕｍ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ａｎｄ ｗａｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｒｏｍ Ｌ. pｏｌｙｓｔａｃｈｙｕｓ ｃｏｕｌｄ ｒｅｄｕｃｅ ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ ｇｌｕｃｏｓｅ ａｎｄ ｔｈｅ ＭＤＡ ｉｎ ｓｅｒｕｍ， ａｎｄ ａｌｓｏ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＣＡＴ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｍｉｃｅ ｓｅｒｕｍ． Ｉｔ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｔｈａｔ Ｌ. pｏｌｙｓｔａｃｈｙｕｓ ｈａｄ ｓｔｒｏｎｇ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｏ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｄｉａｂｅｔｉｃ ＫＭ ｍｉｃｅ．

Ｋｅｙ wｏｒｄｓ： Lｉｔｈｏｃａｒｐｕｓ ｐｌｏｙｓｔａｃｈｙｕｓ Ｒaheｄ； ａｎｔｉｄｉａｂｅｔｉｃｓ； ＭＤＡ； ＣＡＴ

多穗柯（Ｌｉｔｈｏｃａｒｐｕｓ ｐｏｌｙｓｔａｃｈｙｕｓ Ｒａｈｅｄ），俗稱甜茶，殼斗科櫟屬植物［１］。多穗柯是一種傳統中草藥，具有清熱利尿、滋潤肝腎、潤肺鎮咳等功效，可用于防治痢疾、皮膚瘙癢、癰疽惡瘡等癥［２，３］。多穗柯民間藥用已有上千年的歷史，特別是在降血糖、調血脂及降血壓方面有獨特的療效，初步推斷其抗氧化成分中含有黃酮類等物質［４］。多穗柯產地群眾很早就有采其嫩葉作“甜茶”飲用的習慣。甜茶香氣濃郁、色澤鮮艷、甘甜回味持久，是因為其中富含一種天然甜素，這種甜味劑并非糖類，在多穗柯葉中的量極高，能滿足糖尿病患者及愛美人士對甜食的需求，具有很高的利用價值。

本試驗通過不同化學溶劑提取多穗柯全草得到不同液相的提取物，用液相提取物連續灌胃鏈脲佐菌素（ＳＴＺ）ＫＭ糖尿病小鼠１４ ｄ，測定血糖濃度，觀測其血液、肝臟、腎臟中丙二醛（ＭＤＡ）及過氧化氫酶（ＣＡＴ）的活力變化，研究ＭＤＡ及ＣＡＴ兩個主要抗氧化指標活性動態［５］，為進一步探索多穗柯預防治療糖尿病，開辟新的中藥資源提供理論依據。

１ 材料與試劑

１．１ 試驗材料

多穗柯采自湖南省芷江縣甜茶基地。

試驗用ＫＭ小白鼠購置于中南大學湘雅醫學院實驗動物研究中心（合格證號：湘檢證字２００８－０００２）。挑選體格健壯、身體完整無損的ＫＭ小白鼠用于試驗，適應性培養７ ｄ后，選取體重為（２５±２）ｇ的ＫＭ小鼠進行試驗。

１．２ 試劑和儀器

鏈脲佐菌素（ＳＴＺ）（用ｐＨ ４．５的檸檬酸緩沖液配制成ＳＴＺ濃度為５０ ｍｇ／ｍＬ的溶液）；二甲雙胍（重慶科瑞制藥有限責任公司，批號：２４９００３）；乙酸乙酯（廣東汕頭市西隴化工廠，批號：０６１０２２２）；ＭＤＡ試劑盒、ＣＡＴ試劑盒（南京建成生物工程研究所）；ＢＦ－２０１中草藥粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）；ＲＥ－５２ＡＡ旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）；ＴＸＮＷ－１０Ｂ超聲波循環提取機（北京弘祥生物技術開發公司）；利舒坦血糖試紙（美國Ａｂｂｏｔｔ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ公司，批號：０１０７１２０８）；ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ 利舒坦血糖儀（美國Ａｂｂｏｔｔ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ公司）。

２ 試驗方法

２．１ 多穗柯提取液的制備

稱取多穗柯葉子適量，在５０～６０ ℃干燥８ ｈ，粉碎，過１００目篩，準確稱取３．５ ｋｇ，按７０％乙醇（體積分數）∶樣品＝１０∶１（質量體積比，kg/L）的比例配制，靜置２４ ｈ，置于超聲波循環提取機中破碎提取有效成分。超聲波循環提取總時間４０ ｍｉｎ，每超聲２ s，間隙１ s，工作頻率４０ ｋＨｚ、轉速１ ３００ ｒ／ｍｉｎ。將乙醇提取液用旋轉蒸發儀６５ ℃減壓濃縮到較小體積，回收乙醇，再將回收后的濃縮液放入６５ ℃恒溫干燥箱中，使其干燥直至黏稠狀的浸膏［６］。

用適量８０ ℃蒸餾水回收浸膏，靜置讓其自然冷卻，葉綠體會自然沉淀在最底層。將去除葉綠體的溶液轉移至５００ ｍＬ的分液漏斗，用氯仿萃取，將下層萃取液裝入廣口瓶，上層再次萃取，重復６次。萃取完以后對上層液體再用乙酸乙酯萃取，取上層液，萃取方法次數同氯仿。將多穗柯乙酸乙酯萃取液裝入圓底燒瓶，在旋轉蒸發儀上減壓濃縮，溫度５５ ℃，直至冷凝管中不再有溶劑下流，回收乙酸乙酯。將回收乙酸乙酯后的所得物用８０ ℃蒸餾水從圓底燒瓶上洗脫下來，將所得溶液放于烘干箱烘干后研碎成粉末，置于冰箱保存以備后用。水相提取液提取方法與乙酸乙酯提取方法相似。

２．２ ＫＭ糖尿病動物模型的制備

用ｐＨ ４．５的檸檬酸緩沖液配制成鏈脲佐菌素（ＳＴＺ）濃度為５０ ｍｇ／ｍＬ的溶液，把ＫＭ小白鼠禁食不禁水２４ ｈ后分成３組，雌雄各半，稱重后分別腹腔注射ＳＴＺ溶液１５０ ｍｇ／ｋｇ體重。連續３ ｄ測量小鼠血糖，血糖濃度大于１１．１ ｍｍｏｌ／Ｌ的為造模成功的ＫＭ糖尿病小白鼠。

２．３ 給藥方法

選取鏈脲佐菌素造模成功的ＫＭ糖尿病小白鼠８０只，稱重，隨機分組：模型對照組、陽性對照組、多穗柯水提取物［高劑量組２００ ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）、中劑量組１００ ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）、低劑量組５０ ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）］組、多穗柯乙酸乙酯提取物［高劑量組２００ ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）、中劑量組１００ ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）、低劑量組５０ ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）］組。另取１０只健康小鼠為正常對照組，每天灌胃生理鹽水。陽性對照組每天灌胃二甲雙胍片溶液（５ ｍｇ／ｋｇ），各試驗組每天灌胃多穗柯不同液相提取液，每天上午８∶００～１０∶００給藥，連續給藥１４ ｄ，每隔３ ｄ測１次血糖，控制培養室的溫度在２５～３０ ℃。

２．３ 取樣（取血提上清液及取組織）

給藥１５ ｄ后斷頸處死試驗小鼠，用剪刀剪斷小鼠頸部一側，然后使小鼠血液流入離心管（已加抗凝劑肝素鈉）中，用簽字筆標號。離心后取血清置于１．５ ｍＬ的離心管，－２０ ℃冰箱保存備用。取小鼠腎臟、肝臟、胰、十二指腸、肌肉、脂肪分別用鋁箔紙包好標記好，置于－２０ ℃保存備用。

２．４ 指標測定

用ＭＤＡ與ＣＡＴ試劑盒測量ＫＭ小鼠血清中的ＭＤＡ值與ＣＡＴ值；數據以均數±標準差（ｘ±ｓ）表示，采用ＳＰＳＳ １３．０統計軟件進行統計分析，組間差異顯著性比較采用ｔ檢驗。

３ 結果與分析

３．１ 試驗小白鼠灌胃期間體重及血糖

按照試驗步驟，在試驗第０、３、６、９、１２、１５ ｄ測定試驗動物ＫＭ小白鼠的體重、血糖數據，繪制數據變化圖１、圖２。

由圖１可知，ＫＭ小白鼠體重在造模后都呈下降趨勢，在給藥后體重下降趨勢得到了一定的緩解，而正常組的體重則呈上升趨勢。

由圖２可知，ＫＭ小白鼠血糖濃度在造模后迅速上升，在多穗柯不同液相提取物的作用下試驗鼠血糖濃度有逐漸降低趨勢，其中又以乙酸乙酯組降血糖效果較為明顯，而正常組的血糖則保持在一個較低水平。模型對照組血糖水平則一直保持在一個較高水平。

３．２ 多穗柯水提取物及乙酸乙酯提取物對糖尿病小白鼠ＭＤＡ的影響

從圖３、圖４中可以看出，正常組及二甲雙胍組的ＭＤＡ值相近，而糖尿病對照組則明顯高于其他組。試驗數據顯示，多穗柯水相提取液、多穗柯乙酸乙酯提取物組對糖尿病小鼠具有一定的降低ＭＤＡ的作用，乙酸乙酯各組的ＭＤＡ低于水提取物組，說明多穗柯乙酸乙酯提取物降ＭＤＡ效果更好。

３．３ 多穗柯水提取物及乙酸乙酯提取物對糖尿病小白鼠ＣＡＴ的影響

從圖５、圖６中可以看出，正常組及二甲雙胍組的ＣＡＴ值都比其他組要高，糖尿病對照組則處于最低。多穗柯乙酸乙酯提取液組及多穗柯水提液組的ＣＡＴ值高于糖尿病對照組而又低于正常組及二甲雙胍組，說明多穗柯水提取物及乙酸乙酯提取物對糖尿病小白鼠的ＣＡＴ值有一定的回復能力，乙酸乙酯組效果更好一些。

４ 討論

一般用于小白鼠糖尿病造模的有兩種藥物：ＳＴＺ和四氧嘧啶。四氧嘧啶造模的穩定性不是很高，在造模成功后血糖有可能恢復正常，并且毒性較大，動物存活率較低。鏈脲佐菌素ＳＴＺ造模用藥量小，藥物毒性小，模型穩定，但價格較貴［７］。本試驗通過腹腔注射ＳＴＺ建立糖尿病小鼠模型效果較好，而且操作簡單、快捷。

多穗柯乙酸乙酯、水提取物都能降低小白鼠血糖濃度，都有降低血糖功效，其中以多穗柯乙酸乙酯提取物效果更為顯著。多穗柯水提取物、乙酸乙酯提取物試驗組中試驗鼠ＭＤＡ值都比糖尿病模型組的ＭＤＡ值要低，說明多穗柯水提取物、乙酸乙酯提取物能在一定程度上阻止小白鼠細胞產生醛基（ＭＤＡ）、自由基等，具有較好的抗氧化作用，表明多穗柯水提取物和乙酸乙酯提取物在一定程度上能阻止小白鼠細胞的損壞。多穗柯水提取物和乙酸乙酯提取物試驗組中試驗鼠ＣＡＴ值都比糖尿病模型組的ＣＡＴ值要高，顯示多穗柯水提取物及乙酸乙酯提取物能在一定程度上恢復糖尿病小白鼠的酶活力。

多穗柯具有藥理作用的主要成分有總黃酮、茶多酚、咖啡堿等化學物質。多穗柯含有的黃酮類、多酚類化合物具有清除自由基、降血糖、抗氧化等作用，對臨床治療糖尿病及高血脂、心血管等并發癥有一定的功效。由于中藥自身具有的毒副作用較小又可以防治一些并發癥的優點，多穗柯已成為一種很有開發前景的抗糖尿病中草藥。但多穗柯乙酸乙酯及水相提取物中的有效成分及藥理機制有待進一步的研究。

參考文獻：

［１］ 中國科學院植物研究所．中國高等植物圖鑒［Ｍ］． 北京：科學出版社，１９７２．

［２］ 全國中草藥匯編編寫組．全國中草藥匯編（下冊） ［Ｍ］．北京：人民衛生出版社，１９８７．

［３］ 李勝華，伍賢進，楊青丹，等．多穗柯化學成分研究［Ｊ］．中藥材，２０１０，３３（４）：５４９－５５１．

［４］ 廖曉峰，于 榮，肖坤福．天然野生植物多穗柯甜茶的化學成分分析［Ｊ］． 林產化工通訊 ２００３，３７（６）：３２－３３．

［５］ 張俐勤，戚向陽，陳維軍，等． 羅漢果皂苷提取物對糖尿病小鼠血糖、血脂及抗氧化作用的影響［Ｊ］．中國藥理學通報，２００６，２２（２）：２３７－２４０．

［６］ 李勝華，伍賢進，郁建平，等．多穗柯總黃酮提取工藝及其含量動態變化研究［Ｊ］．食品科學，２００８，２９（０６）：１３９－１４１．

［７］ 楊明華，柴可夫，楊蘇蓓． 四氧嘧啶致糖尿病大鼠模型血糖穩定性考察［Ｊ］．中國比較醫學雜志，２００６，１６（８）：４８２－４８４．