阿魏不同溶劑提取物抑菌活性測定

摘要：通過超聲波萃取法用不同溶劑提取阿魏有效成分，結合生長速率法測定阿魏不同溶劑提取物對植物病原菌的抑制活性。結果表明，丙酮、氯仿、乙酸乙酯對阿魏抑菌活性成分的提取能力較強，而且氯仿萃取相表現出較高的抑菌活性；在降低測試濃度的條件下，低濃度的氯仿萃取相對供試病原菌也表現出了較好的抑菌效果。

關鍵詞：阿魏；有效成分；抑菌效果；生長速率法

中圖分類號：Ｓ４８２．１ 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０12）02－0295-03

Determination of Antibacterial Activity of Different Extraction from Ferula Solvents

ＷＡＮＧ Ｃｈｕｎ－ｊｕａｎ，ＸＩＥ Ｈｕｉ－ｑｉｎ，ＹＡＮＧ Ｄｅ－ｓｏｎｇ

（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Cｏｌｌｅｇｅ， Ｓｈｉｈｅｚｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Shihezi ８３２０００，Ｘｉｎｊｉａｎｇ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａｃｔｉｖｅ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｏｌｖｅｎｔｓ ｏｆ Ｆｅｒｕｌａ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ． Ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ， ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ Ｆｅｒｕｌａ ｓｏｌｖｅｎｔｓ ａｇａｉｎｓｔ ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａｃｅｔｏｎｅ， ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ， ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｈａｄ ｂｅｔｔｅｒ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ， ａｎｄ ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｓｈｏｗｅｄ ｈｉｇｈ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ． Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅ， ｔｈｅ ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｌｓｏ ｓｈｏｗｅｄ ｂｅｔｔｅｒ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｔｅｓｔｅｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ at ｌｏｗｅｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｆｅｒｕｌａ； ａｃｔｉｖｅ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ； ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ； ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ

中藥材阿魏屬于傘形科芹亞科前胡族阿魏亞族植物，阿魏屬植物大多生長于內陸干旱荒漠地區，主要分布于地中海、中亞及其臨近地區，產地屬大陸性氣候，干旱少雨，夏熱冬寒，氣溫變化劇烈，日照長，日溫差大。我國有２６種１變種，主要分布于新疆［１］。阿魏屬植物耐旱，但土壤水分的多少直接影響植株的高度［２］。

阿魏所含化學成分十分豐富，主要有揮發油、樹膠樹脂等，以倍半萜類（Ｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｓ）、香豆素類（Ｃｏｕｍａｒｉｎｓ）和多硫化合物（Ｐｏｌｙｓｕｆａｎｅｓ）為主要生物活性成分，倍半萜是其最顯著的特征化合物，另一個顯著的特征化合物是具有香豆素類母核結構化合物，該類化合物在一些阿魏種中較常見，其中絕大多數香豆素是７-羥基傘型花內酯衍生物，少部分為呋喃香豆素（Ｆｕｒｏｃｏｍａｒｉｎｓ）。阿魏中的香醇類物質具有抑菌活性［３］，倍半萜酯Ｆｅｒｕｔｉｎｉｎ和Ｔｅｎｕｆｅｒｉｄｉｎｅ是低毒副作用的激素活性成分。中醫認為阿魏具有截瘧、止痢、消積、解毒、除臭、殺蟲、疏風、活血和通經等功能［４］，另有研究證明阿魏具有抗過敏、抗炎和免疫藥用價值。

Ｈｏｍａｄｙ等［５］利用阿魏進行雌性小鼠抗生育及不育試驗，得出阿魏中的香豆素有抗ＨＩＶ活性以及阻止細胞漿釋放的功能，有些還具有抗癌細胞擴散的活性等。

本試驗用不同溶劑提取阿魏有效成分并測定其抑菌活性［６］，為進一步研究阿魏在農藥上的應用提供依據［７］。

１ 材料

１．１ 植物材料

阿魏于２００８年４月～２００９年４月采集于新疆瑪河流域，室內陰干后干燥箱內５０ ℃烘干、粉碎、過４０目篩備用。

１．２ 藥品及儀器

石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正乙醇、乙醇、丙酮等為市售分析純；超聲波洗潔器、旋轉蒸發儀、無菌操作臺、高壓滅菌鍋、錐形瓶、容量瓶、培養皿等。

１．３ 測試樣品

阿魏丙酮提取物，阿魏石油醚提取物，阿魏乙酸乙酯提取物，阿魏正丁醇提取物，阿魏氯仿提取物；阿魏甲醇浸膏石油醚萃取相，阿魏甲醇浸膏氯仿萃取相，阿魏甲醇浸膏乙酸乙酯萃取相，阿魏甲醇浸膏正丁醇萃取相，阿魏甲醇浸膏水相，均為實驗室自制。

１．４ 供試病原菌

小麥紋枯病菌（Ｒｈｉｘｏｃｔｏｎｉａ ｃｅｒｅａｌｉｓ Ｖａｎｄｅｒ Ｈｏｅｖｅｎ）、番茄早疫病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｓｏｌａｎｉ Ｊｏｎｅｓ ｅｔ Ｇｒｏｕ）、番茄灰霉病菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ Ｐｅｒｓ ｅｔ Ｔｒｉｓ）、辣椒疫霉病菌（Ｐｈｙｔｏｐｈｏｒａ ｃａｐｓｉｃｉ Ｌｅｏｎ）、蘋果根腐病菌（Ｂｏｔｒｙｏｓｐｈａｅｒｉａ ｒｉｂｉｓ）、蘋果霉心病菌 （Ｔｒｉｃｈｏｔｈｅｃｉｕｎ ｒｏｓｅｕｍｍ）、棉花枯萎病菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ．ｓｐ ｖａｓｉｎｆｅｃｔｕｍ）、水稻稻瘟病菌（Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ ｏｒｙｚｅ）、棉花黃萎病菌（Ｖｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｄａｈｌｉａｅ Ｋｌｅｂ）、油菜菌核病菌（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）、蘋果炭疽病菌（Ｇｌｏｍｅｒｅｌｌａ ｃｉｎｇｕｌａｔａ）、白菜黑斑病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃａｅ），由石河子大學農學院植物保護系植病教研室提供。

２ 試驗方法

２．１ 阿魏活性成分的提取

滲漉法——稱取１ ｋｇ粉碎過１０～２０目篩的供試植物樣品，以甲醇為溶劑，將植物樣品用溶劑濕潤，一層層放入于玻璃滲漉桶中，上部用石頭壓住，從上方加入溶劑至高出樣品幾厘米，加蓋浸泡一夜，第二天打開下口收集溶液，上口不斷加入新鮮溶劑，至流出溶液無色為滲漉結束。過濾后用旋轉蒸發儀減壓濃縮濾液至干，０～４ ℃冰箱保存備用。

超聲波提取法——稱取２０ ｇ植物樣品于２５０ ｍＬ三角瓶內，加入６０ ｇ丙酮，于超聲波清洗器中振蕩２０ ｍｉｎ，過濾，濾渣加入一定丙酮，重復提取多次，合并濾液，旋轉蒸發儀減壓濃縮濾液至干，用丙酮溶解并定容至濃度相當于１ ｇ（植物干樣）／ｍＬ，０～４ ℃冰箱保存備用。

丙酮、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正乙醇提取方法相同。

２．２ 抑菌活性生物測定

抑菌活性測定采用生長速率法［８］。將上述菌株接入ＰＤＡ培養基置于培養室（溫度２６～２８ ℃；光照１２ ｈ／ｄ）連續培養幾代后，在試驗前３～５ ｄ再接種一次培養備用。

將供試藥液配制成０．０１ ｇ／ｍＬ和０．００５ ｇ／ｍＬ 的藥液，將菌種平板用０．４ ｃｍ的打孔器打出一定數量的菌餅備用。培養基熔化后，從濃度由高到低用吸管吸取１ ｍＬ藥液，分別加入培養基，趁熱倒１０ ｍＬ于直徑９ ｃｍ培養皿中制平板，以１ ｍＬ丙酮代替１ ｍＬ藥液作對照；用接種針將菌餅放置在含藥培養基上，菌絲一面向下，每皿接３塊，按等邊三角形形式排列在皿中央，然后加蓋并標記，置于２６ ℃溫箱中培養；待培養７２ ｈ后取出培養基，用卡尺量菌落直徑（十字交叉縱橫量取２次，算平均數）。按下列公式計算菌落直徑和抑制率：菌落直徑＝測量直徑平均數－０．４ ｃｍ（菌餅的直徑）；抑制率＝（對照菌落直徑－處理菌落直徑）／對照菌落直徑×１００％。

３ 結果與分析

３．１ 阿魏不同溶劑提取物的離體抑菌活性

從７２ ｈ阿魏不同溶劑提取物的離體抑菌活性測定結果（表１）可見，阿魏丙酮及其他不同溶劑提取物對植物病原真菌表現出較強的離體抑菌活性；丙酮、氯仿、乙酸乙酯提取物抑菌活性較高，對植物病原菌７２ ｈ抑制率均在９５％以上，而石油醚、正乙醇提取物抑菌活性相對較低。

３．２ 阿魏甲醇提取物的不同溶劑萃取相離體抑菌活性

阿魏甲醇提取物的不同溶劑萃取相的離體抑菌活性測定結果見表２。從表２可以看出，阿魏甲醇提取物氯仿和乙酸乙酯萃取相抑菌活性較高，在供試濃度為１ ｇ／Ｌ時７２ ｈ對９種植物病原菌菌絲生長抑制率均在８０％以上。

３．３ 不同濃度阿魏甲醇提取物氯仿相離體抑菌活性

從７２ ｈ阿魏甲醇提取物氯仿萃取相降低濃度測定離體抑菌活性結果（表３）可知，在降低測試濃度后，阿魏甲醇提取物氯仿相仍然表現了較好的抑菌效果，在０．０１ ｇ／ｍＬ的濃度下，對7種植物病原菌抑制率都在8０％以上；其中對番茄灰霉病菌抑菌效果最好，達１００％。在０．００５ ｇ／ｍＬ的濃度下，抑制效果較高濃度的都有所降低，但均在５３％以上。

４ 小結與討論

１）通過阿魏不同溶劑提取物的抑菌活性測定，得知丙酮、氯仿、乙酸乙酯對阿魏活性成分的提取能力較強。因而在常規的抑菌生測時，可考慮用丙酮、氯仿、乙酸乙酯作為阿魏活性成分提取溶劑。

２）阿魏甲醇提取物氯仿萃取相表現出了較高的抑菌活性，降低測試濃度，阿魏甲醇提取物的氯仿萃取相對６種病原菌也表現出較好的抑菌效果，說明阿魏提取物中的抑菌活性成分主要集中在石油醚—氯仿這一極性段。

３）在降低測試濃度后，阿魏甲醇提取物氯仿相仍然表現出較好的抑菌效果，可以推測在氯仿段具有抑菌活性成分的種類較多，后期工作有必要對氯仿段活性成分進一步分離。

４）從試驗得知，阿魏不同溶劑提取物對植物病原菌均表現出較高的離體抑菌活性，且具有高效性和廣譜性。可進一步通過孢子萌發法和盆栽試驗來測定阿魏的活體抑菌活性，從而更全面了解應用阿魏。

５）阿魏的有效成分對植物病原菌具有較好的抑菌效果，而且在氯仿段包含更多的抑菌活性成分，如果氯仿段抑菌活性成分能夠進一步分離出，并加以測定和研究，將為阿魏作為新型農藥源提供有力的佐證，對保護環境和促進農作物豐產有重要意義。

參考文獻：

［１］ 沈觀冕．中草藥叢書：阿魏［Ｍ］．烏魯木齊：新疆人民出版社，１９８６．

［２］ 江蘇新醫學院．中藥大辭典（上冊）［Ｍ］．上海：上海出版社，１９８６．

［３］ ＺＨＯＵ Ｐ，ＴＡＫＡＩＳＨＩ Ｙ，ＤＵＡＮ Ｈ Ｑ，ｅｔ ａl．Ｃｏｕｍａｒｉｎｓ ａｎｄ ｂｉｃｏｕｍａｒｉｎ ｆｒｏｍ Ｆｅｒｕｌａ ｓｕｍｂｕｌ：ａｎｔｉ-ＨＩＶ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｙｔｏｋｉｎｅｒｅｌｅａｓｅ ［Ｊ］． Ｐｈｙｔｏｄｔｅｍ，２０００，５３：６８９－６９７．

［４］ ＬＫＥＤＡ Ｋ，ＡＲＡＯ Ｙ，ＯＴＳＵＫＡ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ＵＭ． ｂｅｌｌｉｆｅｒａｅ fａｍｉｌｙ ａｃｔ ａｓ ａｇｏｎｉｓｔｓ／ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ ｆｏｒ ERα ａｎｄ ＥＲβ：Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｂｅｔｗｅｅｎ ｆｅｍｔｉｎｉｎｅ－ｌｉｇａｎｄｅｄ ERα ａｎｄ ＥＲβ［Ｊ］． Ｂｉｏｃｈｅｍｈｙｓｉ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｉｃａｔ，２００２，２９１（２）：３５４－３６０．

［５］ ＨＯＭＡＤＹ Ｍ Ｈ，ＫＨＬＥＩＦＡＴ Ｋ Ｍ，ＴＡＲＡＷＮＥＨ Ｋ Ａ，ｅｔ ａl． Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Fｅｒｕｌａ ｈｏｕｍｏｎｉｓ ｅｓｔｒａｃｔｓ ｉｎ ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌ，２００２，５７：２２４７－２２５６．

［６］ 張宗炳．殺蟲藥劑的毒力測定：原理、方法、應用［Ｍ］．北京：科學出版社，１９８８．

［７］ 江志利，陳安良，白 偉，等．六種植物精油對家蠅的熏蒸及觸殺毒力測定［Ｊ］． 農藥學學報，２００２（１）：８５－８８．

［８］ 吳文君等．我國植物源害蟲控制劑的研究與開發［Ｊ］．農藥，１９９５，３４（２）：６－８．