全自動梯形微板法檢測RhD血型試劑配制比例探討

摘 要 目的：探討全自動梯形微板法檢測RhD血型試劑配制的最佳比例，提高RhD血型檢測結(jié)果的準確性。方法：分別使用RhD血型定型試劑和生理鹽水以1∶5、1∶12、1∶20配制比例的血型試劑對每位獻血者留取的1份抗凝試管樣本，應用全自動血型儀梯形微板法進行RhD血型自動檢測。RhD陰性者應用抗人球蛋白法進行確證實驗。結(jié)果：350例樣本中，使用1∶5配制比例的血型試劑1次判讀后結(jié)果相符率為97%，1∶12配制比例的血型試劑1次判讀后結(jié)果相符率為100%，1∶20配制比例的血型試劑1次判讀后結(jié)果相符率為98%。對RhD陰性血1∶5配制比例的血型試劑1次判讀后結(jié)果相符率為83%，1∶12配制比例的血型試劑1次判讀后結(jié)果相符率為100%，1∶20配制比例的血型試劑1次判讀后結(jié)果相符率為93%。結(jié)論：全自動梯形微板法檢測RhD血型技術(shù)有著不可替代的優(yōu)越性，適合血站工作特點，但試劑配制的比例可影響血型儀的檢測結(jié)果，造成全自動血型儀錯判或漏判，工作人員應根據(jù)各實驗室的不同情況使用恰當?shù)难驮噭┡渲票壤赃M一步提高檢測結(jié)果的準確性。

關鍵詞 梯形微板法 全自動血型檢測

Rh血型系統(tǒng)是最復雜的遺傳多態(tài)性血型系統(tǒng)之一，在臨床上的重要性，僅次于ABO血型系統(tǒng)而處于第2位。在輸血治療和母嬰免疫引起的新生兒溶血病的臨床醫(yī)學中更有著重要的意義^［1］。而RhD抗原因其高的免疫原性而最具臨床價值，產(chǎn)生的抗體往往可持續(xù)多年，甚至終身^［2］。隨著輸血技術(shù)的發(fā)展，全自動樣品處理系統(tǒng)在各級采供血機構(gòu)得到廣泛應用，利用全自動樣本處理系統(tǒng)對獻血者進行RhD血型進行定型，實現(xiàn)了RhD血型檢測的自動化、標準化，保證了檢測結(jié)果的準確性，降低了工作人員的勞動強度。但在實際工作中全自動梯形微板法血型檢測時需將RhD血型定型試劑用生理鹽水進行稀釋。如何能以最適當比例配制血型試劑，提高全自動血型檢測設備檢測RhD血型1次判讀的準確性，現(xiàn)對此進行總結(jié)分析與探討。

資料與方法

資料來源：無償獻血者200人次，每人留取試管枸櫞酸鈉抗凝樣本5ml。

試劑：RhD（IgM）血型定型試劑（單克隆抗體），上海血液生物醫(yī)藥有限責任公司，經(jīng)中國藥品生物制品檢定所批檢合格；氯化鈉注射液500ml∶4.5g（太龍藥業(yè)股份有限公司）；以上試劑均在有效期內(nèi)使用。

主要儀器：Xantus全自動血型儀（愛康電子有限公司）；KA-2200離心機（久保田公司）；120孔梯形微板（奧林巴斯公司）。

方法：①梯形微板法進行RhD定型：用全自動血型儀將試管樣本濃縮紅細胞10μl連同生理鹽水200μl一同加到預稀釋板中，充分混合后，每份樣本吸取50μl加注到梯形微板板孔中，再在每孔中分別加注RhD血型定型試劑和生理鹽水以1∶5、1∶12、1∶20配制比例的血型試劑25μl，振蕩混勻，靜置反應后，數(shù)字血型儀分析反應圖像，根據(jù)RhD（IgM）血型定型原則判定結(jié)果。

結(jié)果判定：判定結(jié)果時，工作人員需目測微板上結(jié)果，與電腦中判讀的結(jié)果相對照，即電腦結(jié)果-目測結(jié)果兩對照，均符合者，按此結(jié)果發(fā)送報告，如兩者不符或與檔案信息不符要用試管法對檢測標本進一步做RhD定型。如為RhD陰性，按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》進行確證^［3］。

質(zhì)量控制：每批試驗均做試劑陰性、陽性對照，定期參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心的室間質(zhì)量評價活動。

結(jié) 果

不同配制比例的RhD血型試劑判讀結(jié)果：結(jié)果見表1。

討 論

經(jīng)典的試管離心法目前仍被認為是最可信賴的RhD定型方法，但是它操作費時，且易出現(xiàn)人為差錯，故不適合采供血系統(tǒng)大批量樣本的檢測。根據(jù)血站工作特點，微板法適合于大批量樣本的血型鑒定，只是對不符或可疑的樣本才進一步做試管法確定。但根據(jù)我們的試驗結(jié)果，梯形微板法全自動血型檢測結(jié)果受多種因素的影響尤其是血型試劑配制的比例直接影響判讀結(jié)果根據(jù)我們的試驗結(jié)果，梯形微板法全自動血型檢測的試劑配制以RhD血型定型試劑和生理鹽水1∶12為宜，過濃或過淡均影響檢測結(jié)果，尤其對RhD陰性血影響最大，所以選擇恰當比例配制血型試劑可大大提高了全自動梯形微板法檢測RhD的準確性和符合性。

參考文獻

1 李軍，任召祺，李俊祺，等.輸血前進行RhD檢測的重要意義［J］.北京醫(yī)學，2005，27（12）:817.

2 高峰.輸血與輸血技術(shù)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2003:182.

3 衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國臨床檢驗操作規(guī)程［M］.第3版.南京:東南大學出版社，2006:249-251.

表1 不同配制比例的RhD血型試劑判讀結(jié)果［例（%）］