氣陰兩虛型胃癌前病變凋亡相關基因的表達及中藥的影響

【摘要】 目的 探討氣陰兩虛證型患者凋亡相關基因的表達，觀察善胃Ⅲ號治療氣陰兩虛型胃癌前病變的療效，并從細胞凋亡和相關基因的表達方面探討其作用機理。方法 77例患者均經胃鏡與病理檢查證實為胃癌前病變，隨機分成兩組，光鏡觀察治療前后胃黏膜的增生情況，并采用Tunel法檢測細胞凋亡，免疫組化檢測fas、fas-L、bcl-2、bax的表達。結果 治療組（善胃Ⅲ號，氣陰兩虛型）有效率79.31%（29例），優于對照組（猴頭菌片）29.17%（48例）。治療組細胞凋亡率和fas-L、bax表達率分別從（15.46±11.91）%、46.67%、42.88%升高至（71.43±19.87）%、76.92%、68.42%；而bcl-2表達率從87.50%下降至20.00%。對照組猴頭菌片對上述指標無明顯作用。結論 善胃Ⅲ號能有效治療氣陰兩虛型胃癌前病變，明顯誘導胃癌前病變胃黏膜細胞凋亡，增強fas-L、bax表達而抑制bcl-2表達。

【關鍵詞】 證型； 善胃Ⅲ號； 胃癌前病變； 細胞凋亡； 基因表達

The Qi-yin deficiency symptom two gastric precancerous lesions of apoptosis related gene expression and effects of Chinese Drugs DAI Er-qing*，YANG Jun，LI Peng-jun*.*The Affiliated Hospital of Armed Police Logistics College，Tianjin 300162，China

【Abstract】 Objective To explore expression of apoptosis-related genes in the pattern of Qi-yin deficiency symptom.To study the effect of Benefiting Stomach Ⅲ on treating precancerosis of gastric cancer，and the mechanism of apoptosis and its relative genes expression.Methods 77 cases of precancerous lesions of gastric cancer were divided into 2 groups at random，Chinese herbal observation group （treatment group blow，the pattern of Qi-yin deficiency symptom） and Hericium tablet on market sell in control group （control group blow）.The hyperplasia of gastric epithelial cell was observed by microscope.The apoptosis and expression of fas，fas-L，bcl-2，and bax were detected by Tunel and immunohistochemical method separately.Results The efficiency rate of treatment group （79.31% ，n=29） was higher than that of control group （29.17%，n=48）.Apoptosis，fas-L and bax expression rate were significantly increased from （15.46±11.91）%、46.67%、42.88% to （71.43±19.87）%、76.92%、68.42%，but bcl-2 expression rate was decreased from 87.50 % to 20.00% in treatment group.Control group didn′t display obvious effect on genes expression.Conclusion Genesis of the pattern of Qi-yin deficiency symptom may be related with the apoptosis-related genes.Benefiting Stomach Ⅲ is effective to precancerosis of gastric cancer （the pattern of Qi-yin deficiency symptom），induce significantly gastric epithelial apoptosis，increase fas-L、bax expression but suppress bcl-2 expression.

【Key words】 Pattern of syndrome； Benefiting StomachⅢ； Precancerosis of gastric cancer； Apoptosis； Gene expression

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慢性萎縮性胃炎（CAG）起病緩慢，時輕時重，病程較長，缺乏特異性的癥狀和體征，多呈緩慢進行性改變，可由慢性淺表性胃炎發展而來，也可兩者并存，有的呈隱襲性。CAG特別是伴有腸上皮化生（IM）或不典型增生（Dys）者，有發展成胃癌的傾向，慢性萎縮性胃炎伴（IM）和（或）異型增生Dys是胃癌的癌前病變。善胃Ⅲ號為治療慢性萎縮性胃炎、胃癌前病變的純中藥制劑，有益氣養陰、解毒散瘀的功效。本文觀察善胃Ⅲ號對氣陰兩虛型胃癌前病變的治療作用，并從細胞凋亡和相關基因的表達方面探討其作用機理，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 77例患者均經胃鏡與病理檢查證實為胃癌前病變，隨機分成兩組。治療組29例符合氣陰兩虛型標準，男12例，女17例；年齡28～56歲，平均（39±12.11）歲。對照組48例，男18例，女30例；年齡25～54歲，平均（43±11）歲。診斷標準、胃癌前期病變氣陰兩虛型辨證分型標準及療效標準參照相關文獻^［1］。

1.2 治療方法 治療組用善胃Ⅲ號方治療，藥用：白人參6 g，太子參20 g，黃精20 g，黃芪30 g，石斛10 g，鱉甲10 g，元參15 g，山慈菇5 g等。主要功效：益氣養陰，軟堅散結。每次10 g，3次/d，飯前30 min溫開水沖服，3個月為1療程，服藥2個療程。對照組服用市售成藥猴頭菌片［ZZ-5318-鄂衛藥準字（1983）第000147號，楚中藥業有限公司生產］，每次口服4片，3次/d，服法與療程同觀察組。治療期間停服一切影響本臨床研究的藥物。

1.3 儀器與試劑 儀器：石蠟包埋機、脫水機、切片機均為德國LEICA公司產品；BX50顯微鏡（OLYMPUS）；圖像分析系統帶數碼相機。試劑：凋亡細胞原位檢測Kit，采用北京中山生物工程公司進口分裝的TUNEL染色試劑盒；BCIP顯色液購于北京中山生物公司；分別采用北京中山生物技術公司進口分裝的fas蛋白免疫組化試劑盒、fas-L蛋白免疫組化試劑盒、bcl-2蛋白免疫組化試劑盒、bax蛋白免疫組化試劑盒。

1.4 實驗方法 胃黏膜標本用10%的福爾馬林固定，按常規石蠟包埋、切片，數碼相機顯微照相，用病理圖像分析系統分析。細胞凋亡檢測用原位末端標記法（TUNEL），計數細胞凋亡數（每高倍視野）；fas、fas-L、bcl-2、bax表達用免疫組織化學法檢測，計數其陽性表達率。

1.5 統計學處理 采用SPSS統計軟件對數據進行分析，計數資料用χ2檢驗，計量資料用t檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

治療組總有效率明顯高于對照組，差異有統計學意義（χ2=5.731，P<0.01）。見表1。治療組治療前后癥狀緩解總有效率為77.55%，對照組癥狀緩解總有效率55.96%，兩組比較差異有統計學意義（χ2=9.2061，P<0.05）。見表2。兩組藥物對胃黏膜細胞凋亡及相關基因表達的影響見表3。

3 討論

正常人胃黏膜上皮組織更新較快，以細胞凋亡和增殖維持著細胞總數的平衡，由正常細胞變為癌細胞要經歷一個相當長的階段，即癌前病變階段。胃腺頸部上皮細胞的底部，存在著未分化多潛能的儲備細胞，在有害因子刺激下，機體為適應環境致使儲備細胞增生并向成熟的腸上皮分化即IM，向不成熟的方向分化就轉變成癌。胃黏膜Dys和IM是細胞過度增生和喪失正常的分化，被認為是胃癌前期病變。而腫瘤的形成一方面是增殖分化異常，分化不良增殖過度，另一方面是誘導凋亡的基因突變，抑制凋亡的基因過度表達。在基因控制下的細胞凋亡是細胞受到細胞內外信號的啟動后主動參與并遵循一定程序的細胞自我消亡過程，是機體維持正常新陳代謝的主要機制，而細胞凋亡異常會在惡性疾病的發生、發展中起著重要作用。原位雜交、免疫組化等分子生物學技術檢測表明，胃癌前病變中存在著fas-L、bcl-2等基因的異常表達，當病變發展成為癌前病變及癌時，細胞凋亡則明顯下降^［2~4］。細胞凋亡與分裂密切相關，已有證據表明，在正常和腫瘤組織中，存在十分復雜的多因素調控機制（如p53，c-myc，c-fos，bcl-2和bax等），如果受損細胞不能正確啟動凋亡機制則可能導致腫瘤發生，而細胞凋亡決定于多種凋亡相關基因的相互作用，存在多種調控點構成的復雜調控系統。

課題組經多年大量的臨床觀察及實驗研究，認為胃癌前病變不能單純用某一證型來概括，根據正邪虛實的相互關系，認為疾病后期、病變嚴重時，多屬于氣陰兩虛證型（正虛）。善胃Ⅲ號方是依據中醫辨證論治的基本理論，并結合本課題組已經取得的科研成果組方而成。善胃Ⅲ號白人參味甘微苦，善補肺脾之氣，脾為生化之源，肺主一身之氣，為大補元氣之品，能益氣生津；石斛甘寒，能養胃生津，滋陰除熱。白人參、石斛功專補脾益胃，合而為君。黨參味甘性平，補脾益胃，健運中氣，凡脾胃氣虛，尤其是脾胃虛弱而又有津傷之癥者，用之最宜；黃精味甘，補脾氣，益脾陰，兼以養陰潤肺；天花粉甘微苦酸，其性偏涼，既能滋養胃陰生津，又擅長清解胸胃之煩熱；黨參、黃精、天花粉益氣養陰清熱共為臣藥。白花蛇舌草甘淡性涼，山慈菇味辛性寒，共為佐藥，清熱解毒，活血消瘀散結。諸藥配合，全方“標本兼顧，寓消于補”，補虛為主，瀉實為輔，虛實并調，標本兼顧，共成益氣養陰、解毒散瘀之劑。研究結果表明，經善胃Ⅲ號方治療后，與猴頭菌片對照組相比，細胞凋亡指數較治療前明顯增加（P<0.01）；提示可能通過糾正CAG細胞凋亡而起到治療作用。

腫瘤的發生發展是與細胞本身的基因改變密切相關的。fas-L是一種介導細胞凋亡的膜蛋白，與其受體fas分子結合后，fas分子向細胞內傳導細胞凋亡信號，引起fas表達，導致細胞凋亡。bc1-2和bax兩者間的比例關系影響細胞凋亡狀態，bc1-2表達水平較高時，可形成bc1-2和bc1-2同源二聚體，細胞凋亡受抑制；bax表達水平較高時，則形成bax和bax同源二聚體，加速細胞凋亡。由淺表性胃炎、胃癌前病變、胃癌演變過程中，bcl-2蛋白表達陽性率逐漸增加，bax蛋白表達陽性則逐漸減少，bcl-2/bax逐漸增加。本文觀察善胃Ⅲ號方對氣陰兩虛型胃癌前病變的作用，并通過檢測治療后細胞凋亡及相關基因表達的改變，以進一步探討其分子生物學作用機理。結果表明，善胃Ⅲ號方能有效逆轉氣陰兩虛型胃癌前病變，有效率79.31%，優于對照組（猴頭菌片）29.17%。治療組細胞凋亡率和fas－L、bax表達增強；而bcl-2、bcl-2/bax表達減弱。上述結果提示，善胃Ⅲ號方有效逆轉氣陰兩虛型胃癌前病變的可能機制是明顯誘導胃癌前病變細胞凋亡，增強fas-L、bax表達而抑制bcl-2表達。

參 考 文 獻

［1］ 代二慶，趙占考，袁紅霞，等.善胃Ⅰ-Ⅲ號方治療慢性萎縮性胃炎胃癌前病變的臨床研究［J］.中醫藥學刊，2004，22（4）:6.

［2］ 高碧珍，蘭啟防，李燦東，等.慢性胃炎證候與幽門螺桿菌及bcl-2蛋白的相關性研究［J］.福建中醫學院學報，2003，13（6）:1-3.

［3］ 胡玲，勞紹賢，唐純志，等.胃癌癌前病變中醫證候與細胞凋亡相關癌基因mRNA表達的關系［J］.廣州中醫藥大學學報，2004，21（2）:82.

［4］ 戴潔，祁曉莉，于淑霞，等.胃黏膜良惡性病變中bcl-2、bax、c-myc基因蛋白表達及意義［J］.張家口醫學院學報，1999，16（4）:27.

（收稿日期：2011-11-07）

（本文編輯：連勝利）