活血促愈膠囊質量標準研究

基金項目：湖南省科技廳基金項目（06FJ3017）；湖南省中醫藥管理局基金項目（2008093）

作者單位：411102 湖南省湘潭職業技術學院（陳丹）；湖南省中醫藥研究院（李柯，李若存）

通訊作者：陳丹

【摘要】 目的 建立活血促愈膠囊的質量標準。方法 采用薄層色譜法對處方中的丹參、槐米、三七、積雪草進行鑒別；用高效液相色譜法對成品中人參皂苷Rg1進行含量測定。結果 薄層色譜中能檢出丹參、槐米、三七、積雪草；人參皂苷Rg1在2.26～13.56 μg范圍呈良好的線性關系，r0.9998，平均回收率為97.22%，RSD為1.42%。結論 所建立的方法能夠用于本品的質量控制。

【關鍵詞】 活血促愈膠囊； 薄層色譜法； 人參皂苷Rg1； 高效液相色譜法

Study on quality standard for Huoxue Cuyu Capsule CHEN Dan^*，LI Ke，LI Ruo-cun.^*Xiangtan Vocational Technical College，Xiangtan 411102，China

【Abstract】 Objective To establish quality standards for Huoxue Cuyu Capsule.Methods Radix et Rhizoma Salviae，Flos Sophorae，Radix et Rhizoma Notoginseng，Herba Centellae were identified by TLC;Ginsenoside Rg1 was determined by HPLC.Results Radix et Rhizoma Salviae，Flos Sophorae，Radix et Rhizoma Notoginseng，Herba Centellae were detected by TLC;Ginsenoside Rg1 in the range of 2.26-13.56 μg was a good linear relationship，r0.9998;The average recovery was 97.22%，and RSD was 1.42%.Conclusion The established methods can be used for the quality control of Huoxue Cuyu Capsule.

【Key words】 Huoxue Cuyu Capsule; Thin layer chromatography; Ginsenoside Rg1; High performance liquid chromatography

活血促愈膠囊是由丹參、槐米、三七、積雪草組方研制而成的中藥6類新藥，功能為活血化瘀、涼血消腫、通絡止痛，用于急性軟組織損傷，中醫辨證屬血瘀證者。為了有效地控制其質量，筆者采用薄層色譜法對制劑中的丹參、槐米、三七、積雪草進行了鑒別，采用高效液相色譜法對三七的人參皂苷Rg1進行了含量測定。現報道如下。

1 儀器與試劑

LC-10A高效液相色譜儀（日本島津）；C18（Column 200×4.6 mm，5 μ）色譜柱（大連依利特分析儀器有限公司）；N2000數據處理軟件（浙江大學智能信息工程研究所）。羥基積雪草苷（批號：1110893-200201）、積雪草苷（批號：110892-200403）、蘆丁對照品（批號：0080-9504）、丹參酮ⅡA、（ 批號：0766-200010）、三七皂苷R1 （批號：110745-200415）、人參皂苷Rg1 （批號：110703-200726）、人參皂苷Rb1 （批號：704-200114）均為中國藥品生物制品檢定所提供。甲醇、乙腈（色譜純試劑，天津科密歐化學試劑有限公司），水為重蒸餾水，其它試劑均為分析純（為湖南匯虹試劑有限公司提供）。活血促愈膠囊（批號：20080401、20080405、20080409）由湖南省中醫藥研究院中藥研究所制劑室提供。

2 薄層色譜鑒別

2.1 丹參鑒別 取三批樣品各1.0 g，加甲醇25 ml，超聲處理30 min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加水15 ml使溶解，溶液置分液漏斗中，用乙酸乙酯振搖提取2次，每次15 ml，分取乙酸乙酯層（水層備用），蒸干，殘渣加乙酸乙酯1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取丹參酮ⅡA對照品，加乙酸乙酯制成每1 ml含2 mg的溶液，作為對照品溶液。取除丹參外的其余處方量藥材，按制備工藝方法制備缺丹參的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制成缺丹參的陰性溶液照。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取上述三種溶液各10 μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯（19∶1）為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。

2.2 槐米的鑒別 取丹參鑒別項下的水層，加水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次15 ml，分取正丁醇層，加氨試液振搖提取2次，每次15 ml，合并氨試液層（正丁醇層備用），蒸干，殘渣加甲醇5 ml使溶解，作為供試品溶液。另取蘆丁對照品，加甲醇制成每1 ml含4 mg的溶液，作為對照品溶液。取除槐米外的其余處方量藥材，按制備工藝方法制備缺槐米的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制成缺槐米的陰性溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取上述三種溶液各10 μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（8∶1∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，待乙醇揮干后，分別置日光及紫外光燈（365 nm）下檢視，陰性無干擾。

2.3 三七、積雪草的鑒別 取槐米鑒別項下的正丁醇層，用正丁醇飽和的水洗滌二次，每次15 ml，分取正丁醇層，蒸干，殘渣加甲醇2 ml使溶解，搖勻，作為供試品溶液。另取人參皂苷Rg1對照品、三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的混合溶液，作為對照品溶液。再取積雪草苷對照品及羥基積雪草苷對照品，加甲醇制成1 ml含1 mg的混合溶液，作為對照品溶液。取除三七外的其余處方量藥材，按制備工藝方法制備缺三七的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制成缺三七的陰性溶液。取除積雪草外的其余處方量藥材，按制備工藝方法制備缺積雪草的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制成缺積雪草的陰性溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取上述供品溶液3～6 μl，對照品溶液各10 μl，陰性溶液各3～6 μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（7∶3∶0.5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾^［1～5］。

3 含量測定

3.1 色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.5%磷酸溶液（20∶80）為流動相；檢測波長為203 nm。理論板數按人參皂苷Rb1峰計不低于2000。

3.2 對照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1對照品適量，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備 取本品內容物，研細，取約0.4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇20ml，超聲30分鐘（功率250W，頻率40kHz），濾過，容器及濾渣用甲醇10 ml洗滌，洗液與濾液合并，蒸干，殘渣加水15 ml使溶解，用以水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15 ml，合并正丁醇液，用氨試液25 ml洗滌1次，取正丁醇液，用以正丁醇飽和的水50 ml分2次洗滌，取正丁醇液，分液漏斗用適量正丁醇洗滌，洗液與正丁醇液合并，蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解，移至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

3.4 陰性溶液的制備 取除三七外的其余處方量藥材，按制備工藝方法制備缺三七的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制成缺三七的陰性溶液。

3.5 干擾試驗 分別精密吸取對照品溶液、陰性溶液與供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，測定，結果表明，陰性溶液在人參皂苷Rg1保留時間處無吸收。

3.6 線性關系考察 精密吸取人參皂苷Rg1（C1.13 mg/ml）對照品溶液2、4、6、8、10、12 μl進樣，測定其峰面積積分值，以濃度為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線，其回歸方程為：Y104623X+19645，r0.9998。結果表明人參皂苷Rg1在2.26～13.56 μg范圍內具有良好的線性關系。

3.7 精密度試驗 精密吸取同一供試品溶液20 μl，重復進樣5次，測定其峰面積積分值，計算RSD（%）為0.64%，說明精密度良好。

3.8 穩定性試驗 分別精密吸取供試品溶液20 μl，于0、4、8、12、24 h進樣，測定其峰面積積分值。計算結果RSD（%）為0.73%，說明24 h內供試液穩定性良好。

3.9 重復性試驗 取同一批號樣品（批號：20080401）按上述條件，測定5次，測定其峰面積積分值。結果RSD（%）為0.40%，說明方法重復性好。

3.10 回收率試驗 精密稱取已知含量為11.28 mg/g（批號：20080401）樣品約0.18 g，共6份，分別精密加入人參皂苷Rg1對照品溶液（1.2 mg/ml）1.0 ml，即1.2 mg，按含量測定項下的方法測定含量，計算回收率，平均值為97.22%，RSD為1.42%。結果見表1。

表1 回收率測定結果表

3.11 樣品含量測定 取三批樣品，按上述方法測定。結果見表2。

4 討論

4.1 薄層色譜鑒別 活血促愈膠囊既含有非極性成分，也含有極性性成分，所以先采用甲醇提取、濃縮，濃縮物用水溶解，水層分別用乙酸乙酯和正丁醇萃取出非極性成分與極性成分，然后利用槐米中蘆丁易溶于堿性溶液的性質，用氨試液將蘆丁從正丁醇層提取出來。分別制成供試品溶液，以化學對照品丹參酮ⅡA、蘆丁、人參皂苷Rg1、三七皂苷R1、積雪草苷及羥基積雪草苷對照，用TLC法分別檢出成品中丹參、三七、積雪草、槐米。本法取樣量少，處理方法簡便，經濟，省時，且薄層分離效果好。

表2 樣品含量測定結果表

4.2 含量測定 三七為方中君藥，主要含三七皂苷類成分，因此筆者擬參照《中國藥典》2005年版一部三七含量測定方法測定三七總皂苷，由于成品中其它成分的干擾，未能達到要求。人參皂苷Rg1在三七中的含量較高，藥理研究表明，三七Rg1是活血化瘀和促進骨拆愈合的有效成分，同時中國藥品生物制品檢定所已提供用于含量測定的對照品，參照《中國藥典》2005年版一部人參葉項下的含量測定方法建立了成品中人參皂苷Rg1的含量方法，經方法學考察和產品測定的結果表明，所建立的方法簡便，重現性好，能夠作為控制本品內在質量的指標。

參考文獻

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［2］ 王寶琴.中成藥質量標準與標準物質的研究.北京：中國醫藥科技出版社，1994.

［3］ 陳發奎.常用中草藥有效成分含量測定.北京：人民衛生出版社，1997.

［4］ 王喜軍.高效液相色譜在中藥研究中的應用.哈爾濱：黑龍江科學出版社，1994.

［5］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.北京：化學工業出版社，2005.

（收稿日期：2011-04-25）

（本文編輯：梅宏偉）