白假絲酵母菌致食物中毒機理的研究

【摘要】 目的 研究白假絲酵母菌致食物中毒的機理。方法 首先提取白假絲酵母菌的毒性物質(zhì)，明確其性質(zhì)，再進行小白鼠灌胃試驗和家兔灌胃試驗。結(jié)果 白假絲酵母菌毒素為熱不穩(wěn)定外毒素，能使小白鼠疲倦、厭食、豎毛、發(fā)紺、顫抖、呼吸加快、腹瀉、脫水甚至死亡；能使家兔心跳、呼吸加快、嘔吐、腹瀉。結(jié)論 白假絲酵母菌能產(chǎn)生熱不穩(wěn)定外毒素，引發(fā)食物中毒。【關鍵詞】 白假絲酵母菌； 食物中毒； 機理研究The candida albicans cause food poisoning mechanism research MING Ru-cheng¹，XU Ai-mei，YANG Qin-de，LI Zhi-ying，HAN Xiao-li LIU Wei¹.¹Guangrao Center for Disease Conrol and Prevention，Guangrao 257300，China【Abstract】 Objective To research the Candida albicans cause food poisoning mechanism.Methods First pick-up the poisonous substance from the Candida albicans， make clear its property. Then Mus musculus albus intragastric administration experiment and the rabbit intragastric administrationexperiment.Results the Candida albicans toxinum is the heat instability ectotoxin;make the Mus musculus albus anguor、anorexy、piloerection、cyanosis、jitter、accelerated breathing、alvi profluvium、anhydration even death；make the rabbit cardiopalmus and breathing accelerated、disgorging、alvi profluvium.Conclusion the Candida albicans toxinum can create the heat instability ectotoxin， initiate food poisoning.【Key words】 Candida albicans; Food poisoning; Mechanism research 2006年9月份，廣饒縣某超市餐飲部售出的飯菜致使16人食物中毒，住院治療。主要癥狀為發(fā)熱（9/16）、惡心（15/16）、嘔吐（14/16）、腹痛（15/16），腹痛部位在上腹部或臍周，腹痛性質(zhì)以陣痛或絞痛為主。腹瀉（16/16）以水樣便居多，脫水（12/16）、頭痛（7/16）、頭暈（7/16）、發(fā)紺（9/16）。餐后9 h為發(fā)病高峰，經(jīng)治療后患者均康復出院。采集患者吐、瀉物經(jīng)病原學鑒定為白假絲酵母菌；采集剩余飯菜、油、醬油、醋，結(jié)果從剩余飯菜和醬油中分離到與患者吐瀉物中相同的優(yōu)勢菌——白假絲酵母菌（Candida albicans）。筆者對白假絲酵母菌致食物中毒的機理進行了探討，現(xiàn)報告如下。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 菌種來源 患者吐、瀉物，剩余飯菜、超市餐飲部使用的醬油中分離到的白假絲酵母菌。1.1.2 實驗儀器試劑 SKGP-01型隔水式電熱恒溫培養(yǎng)相（湖北黃石市醫(yī)療器械廠），YXO602型電熱蒸氣消毒器（山東新華醫(yī)療器械廠），LT-04S型離心機；JH-2型張力傳感器（中國北京航天醫(yī)學工程研究所），內(nèi)置BL-410智能型生物信號處理系統(tǒng)（成都泰盟電子有限公司研制），IBM電腦兩臺；營養(yǎng)肉湯、MYSPA培養(yǎng)基^［1］（實驗室自制），API 20C Aux（酵母菌鑒定系統(tǒng)，法國梅里埃BIOMERIEUX生產(chǎn)）。1.1.3 實驗動物 21～27 g小白鼠，由山東省疾病預防控制中心提供，2 kg左右家兔，由山東明華兔業(yè)提供。1.2 方法1.2.1 菌種鑒定1.2.1.1 形態(tài)學 行革蘭氏染色，顯微鏡下觀察。1.2.1.2 生化鑒定 將培養(yǎng)獲得的菌株接種到培養(yǎng)基上30 ℃ 48 h純培養(yǎng)后接種API 20C Aux 30 ℃培養(yǎng)48 h。1.2.1.3 芽管試驗 將分離到的菌株接種于0.5 ml兔血清中，30 ℃孵育3 h，鏡下觀察芽管形成。1.2.2 產(chǎn)毒培養(yǎng) 將分離到的菌株接種于營養(yǎng)肉湯，于30 ℃培養(yǎng)48 h后，2500轉(zhuǎn)/min離心沉淀，取上清液待用^［2］。1.2.3 小白鼠灌胃試驗1.2.3.1 將上述白假絲酵母菌毒素液3等份，1份不做處理，1份于沸水浴中加熱15 min，冷卻待用；另1份于沸水浴中加熱30 min，冷卻待用。1.2.3.2 將試驗用小白鼠40只分成4組，每組10只，1組灌注無菌營養(yǎng)肉湯1 ml；2組灌注未做處理的白假絲酵菌毒素液1 ml；3組灌注15 min熱處理的白假絲酵母菌毒素液1 ml；4組灌注30 min熱處理的白假絲酵母菌毒素液1 ml。分籠飼養(yǎng)，5 h后觀察、測定并記錄小白鼠有無疲倦、厭食、豎毛、呼吸加快、發(fā)紺、腹瀉、脫水及死亡等現(xiàn)象。1.2.4 家兔灌胃試驗 將2 kg左右20只分為2組，固定在試驗臺上。1組無菌操作吸取上述白假絲酵母菌毒素液5 ml進行灌胃；2組無菌操作吸取無菌肉湯進行灌胃，分別飼養(yǎng)。觀察有無嘔吐、腹瀉現(xiàn)象，8 h后測定心跳、呼吸及血壓。心跳、呼吸采用聽診測定。血壓采用頸總動脈插管測定其平均動脈血壓。體溫用溫度計肛試測定。2 結(jié)果2.1 菌株為革蘭氏陽性，圓形或卵圓形，菌體較大。2.2 生化試驗結(jié)果見表1。表1 白假絲酵母菌生化鑒定結(jié)果 有意義的分類單位：白假絲酵母菌（Candida albicans）鑒定98.2% T值0.87，不一致的試驗GLY 14%。2.3 芽管試驗 鏡檢可見萌出芽管的孢子呈圓形，芽管的粗細為孢子直徑的1/3～2/3，其萌芽的連接不收縮。2.4 小白鼠灌胃試驗結(jié)果見表2。表2 白假絲酵母菌毒素液對小白鼠灌胃試驗結(jié)果 注：表中數(shù)字為平均數(shù)；脫水使體重減輕30% 試驗小白鼠的呼吸1組和2組，差異有統(tǒng)計學意義（t6.64 P<0.01）；試驗小白鼠的呼吸1組和3組差異無統(tǒng)計學意義（t2.12，P>0.05）。20 h小白鼠死亡5只。2.5 家兔灌胃試驗結(jié)果見表3。表3 白假絲酵母菌毒素液對家兔灌胃試驗結(jié)果 注：表中數(shù)據(jù)為平均值 試驗組家兔有嘔吐和腹瀉現(xiàn)象。與對照組比較，試驗組家兔的呼吸，差異有統(tǒng)計學意義（t6.36，P<0.01）；試驗組家兔心跳差異有統(tǒng)計學意義（t3.13，P<0.05）；試驗組家兔體溫差異有統(tǒng)計學意義（t4.27，P<0.01）；試驗組家兔血壓差異無統(tǒng)計學意義（t2.12，P>0.05）。3 討論白假絲酵母菌引起食物中毒的報道不多，2008年10月葛素君等人首次報道，其菌株生化試驗與白假絲酵母菌鑒定不一致的試驗是GLY甘油。本試驗株是陽性，與葛素君等人報告株是一致的。但引發(fā)食物中毒的白假絲酵母菌是否一定是甘油試驗陽性，還有待于大量菌株試驗證明。下一步可提取引發(fā)食物中毒的白假絲酵母菌DNA進行序列測定，與一般白假絲酵母菌進行比對，看基因序列是否有差異^［3］。小白鼠灌胃試驗的結(jié)果證明，白假絲酵母菌毒素液能使小白鼠出現(xiàn)疲倦、厭食、豎毛、發(fā)紺、顫抖、呼吸加快、腹瀉、脫水，甚至出現(xiàn)死亡^［4］。但沒有葛素君等人報告的那么嚴重，這也許是灌胃試驗和腹腔注射試驗的區(qū)別。推測胃液或許對毒素起一定的作用。白假絲酵母菌細胞外水解酶作為致病因子有兩種^［5］，分泌型天冬氨酸蛋白酶-2及細胞外磷脂酶B。將分離菌株的毒素提取液做小白鼠灌胃試驗的結(jié)果證明，白假絲酵母菌毒素是一種不耐熱的外毒素^［6，7］。白假絲酵母菌污染食物，引發(fā)食物中毒，應引起人們的重視。參 考 文 獻［1］ 明儒成，聶海玲.封新平一種新組分酵母菌培養(yǎng)基的研制及應用.生物技術，2008，18（2）： 49-51.［2］ 葛素君，王志剛，許際華，等.白假絲酵母菌致食源性疾病的病原學檢測與鑒定.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2008， 15 （10）：2030-2032.［3］ 劉運德，樓永良.微生物學檢驗.第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003， 52：370-371.［4］ 靳穎，劉錦，張明華.白假絲酵母菌感染及分型方法的研究進展.武警醫(yī)學院學報，2009，18（11）：987-989.［5］ 趙亮.呼吸道感染中白假絲酵母菌細胞外水解酶和耐藥性對菌株毒力的影響.碩士論文，2007.［6］ 林艷.分泌型天冬氨酸蛋白酶-2的研究進展.國際口腔醫(yī)學雜志，2011，38（1）：38-40.［7］ 汪春華.白假絲酵母菌分泌型天冬氨酸蛋白酶的研究進展.蚌埠醫(yī)學院學報， 2009，34（6）： 546-548.（收稿日期：2011-05-30）（本文編輯：車艷）