COX-2和FHIT在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)和相關(guān)性的研究

【摘要】 目的 探討非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer， NSCLC）中FHIT和COX-2蛋白的表達(dá)相關(guān)性及其與肺癌發(fā)展之間的關(guān)系。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測57例NSCLC組織及6例良性病變肺組織中FHIT和COX-2蛋白的表達(dá)。結(jié)果 NSCLC組織FHIT和COX-2蛋白的陽性表達(dá)率分別為22.80%和82.46%。FHIT在NSCLC組織中表達(dá)缺失，與腫瘤的組織分型、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切（P<0.05），與患者的性別、年齡、腫瘤大小及分化程度無關(guān)（P>0.05）。COX-2在NSCLC組織中高表達(dá)與腫瘤的組織分型、TNM分期、腫瘤大小及分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切（P<0.05），與患者的性別、年齡無關(guān)（P>0.05）。癌組織中FHIT和COX-2蛋白的表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)（r0.342，P0.004）。結(jié)論 FHIT和COX-2蛋白在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)成顯著負(fù)相關(guān)，提示兩者在非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展中可能存在重要的協(xié)同作用。【關(guān)鍵詞】 FHIT； COX-2； 非小細(xì)胞肺癌； 免疫組織化學(xué)Study on the expression and correlation of FHIT and COX-2 in non-small cell lung cancer ¹YANG Yong-shan， WANG Yan.¹The Third Clinical Hospital of Harbin Medical University， Daqing， 163318， China【Abstract】 Objective To investigate the correlation of the expression of FHIT and COX-2 proteins and study its role in the development of non-small cell lung cancer （NSCLC）.Methods The expression of FHIT and COX-2 proteins was detected by SP immunohistochemical technique in 57 cases of non-small cell lung cancer and 6 cases of benign lung lesions.Results The positive rates of FHIT and COX-2 proteins were 22.80% and 82.46% respectively in NSCLC. Reduction of FHIT had no relation to the sex or age of the patients， sizes of tumors and tumor differentiation（P>0.05）.The expression of FHIT was closely related to the types of histology， stages of TNM and lymph node metastasis（P<0.05）.The expression of COX-2 was not related to the sex or age of the patients （P>0.05）. The expression of COX-2 was closely related to the types of histology， stages of TNM， sizes of tumors， tumor differentiation and lymph node metastasis（P<0.05）. The expression of FHIT protein has a significant negaitive correlation with that of COX-2 protein in NSCLC（r0.342， P0.009）.Conclusion There is a significant negative correlation between high expressions of FHIT and COX-2 proteins in NSCLC. The high expressions of FHIT and COX-2 proteins are possibly related to the development and metastasis of NSCLC.【Key words】 FHIT； COX-2； Non-small lung cancer； Immunohistochemistry 肺癌是當(dāng)今世界上最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率逐年增加，其中非小細(xì)胞肺癌占大多數(shù)。細(xì)胞癌變是多因素、多階段、多基因變異的結(jié)果。FHIT基因?yàn)槎喾N腫瘤的候選抑癌基因，其表達(dá)頻繁地降低或缺失，在細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化及腫瘤發(fā)生中具有十分重要的作用^［1，2］。COX-2是可誘導(dǎo)型表達(dá)蛋白，與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有著密切關(guān)系^［3］。已知兩種基因與肺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但兩者在肺癌中表達(dá)的相關(guān)性尚未見報(bào)道。本研究旨在探討FHIT蛋白和COX-2蛋白的表達(dá)相關(guān)性及其與非小細(xì)胞肺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。1 材料與方法1.1 標(biāo)本來源 標(biāo)本隨機(jī)取自哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院病理科2000～2002年經(jīng)肺部手術(shù)切除的NSCLC組織蠟塊57例和良性病變肺組織蠟塊6例。所有材料均經(jīng)福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm后連續(xù)切片，常規(guī)染色后，復(fù)查病理診斷，并按WHO標(biāo)準(zhǔn)分型、分級。其中腺癌26例，鱗癌27例，其它4例；良性病變肺組織6例；高、中、低分化分別為16、11和30例；按腫瘤大小分為D≤3 cm和D>3 cm組，分別為23和34例；其中男38例，女性19例；年齡最小30歲，最大79歲，按年齡分為<60歲和≥60 歲兩組，分別為30和27例，平均58歲；所有病例均有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況記錄，其中轉(zhuǎn)移者19例。臨床分期依據(jù)1997年國際抗癌聯(lián)盟（UICC）TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，其中Ⅰ～Ⅱ期16例，Ⅲ期41例。所有病例術(shù)前均未接受放療、化療。1.2 試劑及染色法 COX-2多克隆抗體（兔抗）及鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組化染色試劑盒均為美國Santa Cruz公司產(chǎn)品；FHIT多克隆抗體（兔抗）和Envision試劑盒均為Zymed公司產(chǎn)品，均購自北京中山生物技術(shù)有限公司。用免疫組化SP法。實(shí)驗(yàn)步驟按SP試劑盒說明書進(jìn)行，DAB顯色。將已知陽性的肺癌切片作為陽性對照，用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對照。1.3 結(jié)果判定 FHIT和COX-2陽性反應(yīng)產(chǎn)物均呈棕黃色顆粒狀，定位在細(xì)胞漿中。參照有關(guān)文獻(xiàn)^［4］，每張切片隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野，每個(gè)高倍視野計(jì)數(shù)100個(gè)癌細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞百分率，結(jié)果判定采用盲法，并由病理科醫(yī)師對染色結(jié)果復(fù)閱核定。判定標(biāo)準(zhǔn): （1）陰性（-）：陽性細(xì)胞數(shù)<5%；（2）弱陽性（+）：陽性細(xì)胞數(shù)在5%～25%之間， 染色淡；（3）中度陽性（++）：陽性細(xì)胞數(shù)26%～50%之間， 染色清晰；（4）強(qiáng)陽性（+++）: 陽性細(xì)胞數(shù)>50%，染色強(qiáng)。1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，組間比較采用χ²檢驗(yàn)及Fisher確切概率法， 相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)分析，結(jié)果均以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2 結(jié)果2.1 FHIT和COX-2在NSCLC和肺良性病變組織中的表達(dá) 如表1所示，57例NSCLC標(biāo)本中，F(xiàn)HIT蛋白陽性表達(dá)13例，陽性率22.80%；COX-2蛋白陽性表達(dá)47例，陽性率82.46%。6例良性病變肺組織標(biāo)本中FHIT蛋白全部陽性表達(dá)，COX-2蛋白全部陰性表達(dá)。兩組標(biāo)本中的FHIT和COX-2表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。表1 FHIT和COX-2在NSCLC和肺良性病變組織中的表達(dá)2.2 FHIT和COX-2蛋白表達(dá)與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系 由表2可知，在NSCLC組織中，F(xiàn)HIT在NSCLC組織中表達(dá)缺失，與腫瘤的組織分型、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切（P<0.05），與患者的性別、年齡、腫瘤大小及分化程度無關(guān)（P>0.05）。COX-2在NSCLC組織中高表達(dá)，與腫瘤的組織分型、TNM分期、腫瘤大小及分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切（P<0.05），與患者的性別、年齡無關(guān)（P>0.05）。表2 FHIT和COX-2表達(dá)與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系2.3 NSCLC組織中FHIT和COX-2表達(dá)的相關(guān)性 由表3可見，57例NSCLC組織中，Spearman 等級相關(guān)分析顯示FHIT和COX-2表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)（r0.342，P0.004）。表3 NSCLC 組織中FHIT和COX-2蛋白表達(dá)的相關(guān)性 注：r0.342，P0.0043 討論脆性組氨酸三聯(lián)體（fragilehistidinetriad，F(xiàn)HIT）基因是于1996年首次克隆出的一個(gè)新的候選抑癌基因，其定位于染色體3p14.2，跨越人類基因組中一個(gè)最普遍的脆性位點(diǎn)FRA3B及腎細(xì)胞癌相關(guān)性斷裂點(diǎn)t。大量研究表明，F(xiàn)HIT基因在肺癌等腫瘤中均存在異常。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)HIT在NSCLC組織中表達(dá)缺失，與腫瘤的組織分型、TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，與患者的性別、年齡、腫瘤大小及分化程度無關(guān)。環(huán)氧化酶是由兩種基因型，即COX-1 和COX-2組成的催化前列腺素合成的限速酶。其中COX-2在大多數(shù)組織正常生理?xiàng)l件下并不存在，僅在細(xì)胞受到刺激時(shí)迅速合成，催化花生四烯酸產(chǎn)生多種前列腺素類物質(zhì)，通過多種途徑，參與包括炎癥、腫瘤等多種病理生理過程。研究表明，COX-2在NSCLC組織中高表達(dá)與腫瘤的組織分型、TNM分期、腫瘤大小及分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，與患者的性別、年齡無關(guān)。兩者在肺癌中的相關(guān)性尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)中57例肺癌組織中有FHIT大量表達(dá)缺失同時(shí)COX-2高表達(dá)，呈明顯的負(fù)相關(guān)（r0.342，P0.004），提示兩者在非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、發(fā)展中可能存在重要的協(xié)同作用，兩者的聯(lián)合檢測可能對肺癌的診治及預(yù)后有重要意義，可能會(huì)成為肺癌的靶向治療的新目標(biāo)，但需進(jìn)一步的研究來探討兩基因間的具體作用機(jī)制。參 考 文 獻(xiàn)［1］ Lee YC， Wu CT， Shih JY， et al. Frequent allelic deletion at the FHIT locus assosiate with p53 overexpression in squamous cell carcinoma subtype of Taiwanese non-small-cell lung cancers. Br J Cancer， 2004， 90（12）: 2378-2383.［2］ Pekarsky Y， Palamarchuk A， Huebner K， et al. FHIT as tumou supperssor: mechanisms and therapeutic opportunitiesp. Cancer Biol Ther， 2002， 1（3）: 232-236.［3］ 王志偉，范向軍，朱銘巖，等.PFC，TNF-α和NO在豬胰腺移植急性排斥反應(yīng)中的意義.中國普通外科雜志，2004，12（10）：754.［4］ Hao XP， Willis JE，Pretlow TG， et al. Loss of fragile histidine triad expression in colorectal carcinomas and premalignant lesions. Cancer Res， 2000， 60（1）: 18-21.（收稿日期：2011-05-25）（本文編輯：車艷）