CyclinD1和P21在肥大乳房腺體組織中的表達(dá)及意義

[摘要]目的：探討肥大乳房中CyclinD1和P21的表達(dá)級(jí)意義。方法：采用免疫組化SP法，分別測(cè)定了34例腺性肥大乳房和30例正常體積乳房腺體中CyclinD1和P21的表達(dá)。結(jié)果：CyclinD1在34例肥大乳房中，陽(yáng)性18例，陽(yáng)性率52.94%；30例正常對(duì)照組中，全部表達(dá)陰性，陽(yáng)性率0，兩組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。P21在34例肥大乳房中，3例陽(yáng)性，陽(yáng)性率8.82%；正常對(duì)照組30例，陽(yáng)性9例，陽(yáng)性率30.00%。兩組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：乳房肥大的形成可能與CyclinD1增多和P21減少有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]CyclinD1;P21;乳房肥大

[中圖分類號(hào)]R730.45[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1008-6455（2011）10-1556-02

Expression of CyclinD1 and P21 in the mammary gland of the hypertrophic breast and their significance

JIN Jun-hua，ZHANG Rui-rui，WANG Qi，XIE Qun，LIU Dan-dan，HUI Zu-yan，HU Qiang

(Department of Plastic Surgery，the Central Hospital of Xiangyang，Xiangyang 441021，Hubei，China)

AbstractObjectiveTo detect the expression of CyclinD1 and P21 in the mammary gland of the hypertrophic breast and the normal voluminal breast，so that their function and significance in the pathogenesis of breast hypertrophy can be investigated.MethodsThe breast tissue samples were obtained， including hypertrophic breast tissue(34 cases) and normal voluminal breast tissue(30 cases).They were detected by the SP method immunohistochemistry for the expression of CyclinD1 and P21.ResultsThe positive expression rate of CyclinD1 in the hypertrophic breast was 52.94％(18 of 34)，while 0 in the normal voluminal breast(0 of 30)，showing a significant difference between the two groups（P<0.05）. The positive expression rates of P21 in the hypertrophic breast and normal voluminal breast were 8.82％(3 of 34) and 30.00％(9 of 30)， showing a significant difference between the two groups（P<0.05）. ConclusionThe development of hypertrophic breast may be related to the excessive expression of CyclinD1and decreased expression of P21 in the breast tissue.

Key words: CyclinD1;P21; hypertrophic breast

乳房肥大是一種常見(jiàn)的良性增生性病變，其主要表現(xiàn)為乳房體積過(guò)度增大，常給患者帶來(lái)身心困擾。其確切的發(fā)病機(jī)制目前尚不明確，本課題通過(guò)免疫組化的方法，檢測(cè)了34例腺性肥大乳房和30例正常體積乳房腺體中CyclinD1和P21的表達(dá)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，旨在探討CyclinD1和P21在乳房肥大癥發(fā)病機(jī)制中的作用。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1標(biāo)本：實(shí)驗(yàn)組選自2007年7月～2011年6月就診于我科的肥大乳房患者34例，同期收治的因單純?nèi)榉肯麓剐腥榉繎业豕潭ㄐg(shù)的患者30例作為對(duì)照組。其中肥大乳房患者單側(cè)乳房體積均在600g以上，對(duì)照組乳房體積在250～350g。實(shí)驗(yàn)組年齡18～45歲，平均年齡28.33歲；對(duì)照組年齡26～46歲，平均年齡31.21歲。兩組間年齡經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（采用兩樣本t檢驗(yàn)，P＞0.05）。

1.1.2試劑：一抗為鼠抗人P21， CyclinD1單克隆抗體，購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司；SABC免疫組化試劑盒，購(gòu)自美國(guó)New Mark公司。

1.2方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)方法：標(biāo)本經(jīng)4%的福爾馬林固定，石蠟包埋，連續(xù)4μm切片，每例標(biāo)本切片4張，一張備用，另外3張分別行HE染色、免疫組化CyclinD1和p21染色用。閱片采用雙盲法，以細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性，隨機(jī)選擇5個(gè)高倍鏡視野，以陽(yáng)性細(xì)胞率＞10%為陽(yáng)性。

1.2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05。

2結(jié)果

2.1 CyclinD1蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞核中，表現(xiàn)為黃色或棕黃色顆粒。34例肥大乳房中，陽(yáng)性18例，陽(yáng)性率52.94%；30例正常對(duì)照組中，全部表達(dá)陰性，陽(yáng)性率0。兩組間比較χ2=23.78，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見(jiàn)表1及圖1、2）。P21蛋白亦表達(dá)于細(xì)胞核中，表現(xiàn)為淡黃色至棕黃色顆粒，34例肥大乳房中，3例陽(yáng)性，陽(yáng)性率8.82%；正常對(duì)照組30例，陽(yáng)性9例，陽(yáng)性率30.00%。兩組間統(tǒng)計(jì)學(xué)比較χ2=4.69，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見(jiàn)表2及圖3、4）。

3討論

乳房的過(guò)度發(fā)育使乳房的體積過(guò)度增大，形成乳房肥大癥，俗稱巨乳癥。過(guò)去的研究顯示乳房肥大可能是一個(gè)多因素導(dǎo)致的疾病，可能與多種刺激細(xì)胞增殖的因素相關(guān)。有研究顯示同雌激素及其受體存在密切關(guān)系[1]，但也有研究顯示同表皮生長(zhǎng)因子[2]存在關(guān)系。

CyclinD1是真核細(xì)胞中控制細(xì)胞周期由G1期進(jìn)入S期的一個(gè)重要的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白，分子量為36KD，其作用機(jī)理為：雌激素、生長(zhǎng)因子等刺激細(xì)胞使CyclinD1表達(dá)增加，然后與CDK4/6結(jié)合，形成CD/CDK復(fù)合體，促進(jìn)下游蛋白磷酸化，磷酸化的蛋白調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子2表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)多種基因表達(dá)，如編碼CDK1和CyclinA、E的基因，最終通過(guò)一系列的反應(yīng)促使細(xì)胞越過(guò)限制點(diǎn)加速增殖。Cyclin D1過(guò)度表達(dá)會(huì)加快細(xì)胞周期的進(jìn)行，加速細(xì)胞的分裂，從而導(dǎo)致組織或器官的增生和肥大，甚至?xí)辜?xì)胞向惡性轉(zhuǎn)化。因此，CyclinD1基因被認(rèn)為可與多種癌基因協(xié)同促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，是一種弱致癌基因，在多種腫瘤中有CyclinD1基因擴(kuò)增或表達(dá)增強(qiáng)。本研中究發(fā)現(xiàn)，與正常體積乳房相比，肥大乳房中CyclinD1的表達(dá)同正常體積乳房組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示肥大乳房的發(fā)生可能同CyclinD1基因的過(guò)表達(dá)相關(guān)，CyclinD1基因的促細(xì)胞增殖作用可能是乳房肥大的發(fā)病因素之一。

P21是細(xì)胞周期蛋白和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的廣泛抑制劑，是野生型P53基因下游靶基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物[3-4]，可與多種Cyclins/CDK復(fù)合物結(jié)合，抑制底物磷酸化，使細(xì)胞周期停滯于G1期，進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖。另外，P21還能抑制細(xì)胞增殖核抗原（PCNA）依賴性DNA復(fù)制，通過(guò)直接抑制DNA合成來(lái)抑制細(xì)胞增殖[5]。本研究中，與正常體積乳房組相比，肥大乳房組中P21表達(dá)降低，兩組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。提示可能P21的減少對(duì)Cyclins/CDK的抑制作用降低也參與了乳房增生肥大。

過(guò)去對(duì)于CyclinD1和P21的研究多集中在腫瘤方面，兩者之間的動(dòng)態(tài)平衡才可以保持細(xì)胞的正常增殖，若兩者之間的平衡被打亂，則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞周期紊亂，致使細(xì)胞異常增生。本課題采用免疫組化的方法檢測(cè)了34例肥大乳房和30例正常體積乳房，發(fā)現(xiàn)較正常體積乳房，肥大乳房中存在CyclinD1的增多和P21的減少，提示這兩個(gè)因子之間的表達(dá)失衡可能與乳房肥大的發(fā)生密切相關(guān)。

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[收稿日期]2011-06-26 [修回日期]2011-08-12

編輯/張惠娟