VEGF-C與血VEGFR-3在直腸癌組織中的表達及意義

[摘要] 目的 探討血管內皮細胞生長因子-C與血管內皮生長因子受體-3在直腸癌中的表達及意義。方法 檢測50例直腸癌患者的直腸遠端切緣組織中的VEGF-C、VEGFR-3蛋白表達，并取50例正常直腸組織作對照。結果 直腸癌患者的癌組織中VEGF-C、VEGFR-3的表達要遠高于正常對照組（P＜0.05），VEGF-C、VEGFR-3的表達與性別、分化程度、浸潤深度無關（P＞0.05）；而與淋巴結轉移、Dukes分期有關（P＜0.05），且VEGF-C、VEGFR-3在直腸癌組織中的表達呈正相關。結論 VEGF-C、VEGFR-3在直腸癌組織中均呈高表達，二者的表達可能與直腸癌淋巴轉移過程有關。

[關鍵詞] 內皮細胞生長因子-C；血管內皮生長因子受體-3；直腸癌

[中圖分類號]R735.3+7[文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2011）27-22-03

Expression and Its Clinical Significance of Vascular Endothelial Growth Factor-C and Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-3 in Rectal Cancer Tissue

WU WenhuiTANG YouzhenYANG ShibinXIAO Longbin

Department of Gastrointestinal Surgery， Huangpu Hospital of the First Affiliated Hospital， SUN Yatsen University， Guangzhou 510700， China

[Abstract] ObjectiveTo detect expression of vascular endothelial cell growth factor-C and vascular endothelial growth factor recipient-3 in rectal cancer tissue， and evaluate its clinical significance. Methods VEGF-C， VEGFR-3 protein express in distal margin tissue of tumor from fifty rectal cancer patients were detected， and were compared with 50 normal rectal tissues. Results The express of VEGF-C，VEGFR-3 in rectal cancer patients’ tissue was much higher than that in normal rectal tissues（P＜0.05），the express of VEGF-C、VEGFR-3 has no relationship with gender， differentiation level， depth of infiltration（P＞0.05）， but related to lymph node metastasis， Dukes staging（P＜0.05），expression of VEGF-C、VEGFR-3 in rectal cancer tissue showed positive correlation. Conclusion VEGF-C、VEGFR-3 in rectal cancer tissue shows high expression， and this might be linked to process of lymph node metastasis.

[Key words] Vascular endothelial cell growth factor-C；Vascular endothelial growth factor recipient-3；Rectal cancer

直腸癌（rectal cancer）是胃腸道中最常見的惡性腫瘤，其發病率僅次于胃癌和食道癌。直腸癌常易發生轉移，這也是其致死的主要原因，其主要轉移途徑為淋巴轉移。近年來有報道稱[1]，血管內皮細胞生長因子-C（VEGF-C）與血管內皮生長因子受體-3（VEGFR-3）可能在腫瘤的淋巴轉移過程中起關鍵作用。為探討它們與直腸癌淋巴轉移的關系，本文特選擇50例直腸癌患者石蠟標本，采用免疫組化法觀察其遠端組織中血管內皮細胞生長因子-C與血管內皮生長因子受體-3的表達，報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

收集我院病理科于2009年1月～2010年12月保存的直腸癌石蠟標本50例（標本均取自直腸遠端切緣組織）。其中男30例，女20例；年齡27～81歲，平均年齡(58.15±9.34)歲。所有患者直腸癌的病理類型均為腺癌，高分化者15例、中分化者22例、低分化者l3例；腫瘤直徑范圍為1.5～6.8 cm；腫瘤浸潤的深度為：浸潤至肌層17例、浸潤至漿膜層19例、浸潤至漿膜下層14例；存在淋巴結轉移者26例，無淋巴節轉移者24例；；Dukes分期：A+B期20例，C+D期30例。患者行病灶切除前均未進行放療或化療治療，且手術類型均為全直腸系膜切除，患者的臨床資料及病理資料均完整保存。為進行實驗對比，另選擇50例正常者直腸遠端組織作為對照組。

1.2試劑與方法

（1）術中取組織后進行HE染色，常規HE染色后用光學顯微鏡觀察組織的病理學形態。

（2）免疫組化法[2]：試劑：兔抗人VEGF-C多克隆抗體、兔抗人VEGFR-3多克隆抗體（北京中杉金橋公司）。免疫組化過程：①將石蠟切片放入二甲苯溶液中脫蠟、去離子化；再放入乙二胺四乙酸(EDTA)緩沖液中進行抗原高壓熱修復；將處理后的切片放在實驗室中自然冷卻。②加入打孔劑室溫下洗滌10min；標本放入3％過氧化氫溶液10min，用于封閉內源性過氧化物酶，后用PBS緩沖液洗滌標本3次，每次3min.③向標本中滴入特異性兔抗人VEGF-C多克隆抗體、兔抗人VEGFR-3多克隆抗體，放入濃度5%的CO2培養箱孵育過夜。④第2天取出標本，再用PBS緩沖液洗滌3次，每次3min。⑤向標本中加入PV9000試劑盒中的大分子通透劑，于CO2培養箱37℃孵育30min ；取出后再用PBS緩沖液洗滌3次，隨后加入試劑盒中抗兔抗體酶復合物，于CO2培養箱37℃孵育30min；取出后再用PBS緩沖液洗滌3次。⑥用二氨基聯苯胺（DAB）控制標本的顯色，流水沖洗3h，蘇木素染色，封片，放在光學顯微鏡下觀察。PBS代替一抗做陰性對照。

1.3結果判定

VEGF-C、VEGFR-3的表達均定位于細胞漿及細胞間質，陽性為胞漿中染色出現黃色顆粒。采用半定量積分法：細胞計數取高倍鏡（×400）下取5個視野，計數陽性腫瘤細胞數目并計算其占腫瘤細胞數的百分比。0分：其比率＜5％；1分：比率5％～25％；2分：26％～50％；3分：51％～75％；4分：＞75％。染色強度評分：0分為無染色，1分為染色呈淡黃色，2分為黃或深黃色，3分為褐色。以上兩項積分相乘＞4分才可判定為陽性。

1.4統計學處理

數據以SPSS13.0統計軟件分析處理，計數資料采用行×列的χ2檢驗行組間比較，相關分析采用Spearman等級相關分析檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1VEGF-C、VEGFR-3在直腸癌患者與正常對照直腸遠端組織中的表達

染色結果顯示，VEGF-C主要表達于細胞漿中，VEGFR-3主要表達于細胞漿和細胞間質中。對照組直腸遠端相應切緣組織中VEGF-C、VEGFR-3表達較弱，陽性率分別為25.1%和22.7%。而在直腸癌患者的遠端直腸切緣組織中此二者的表達呈強陽性，陽性率分別為64.3%和61.4%，二者的陽性率比較差異均有統計學意義(χ2=11.23，9.76，P＜0.05）。

2.2 直腸癌組織中VEGF-C、VEGFR-3的表達與相關因素的關系

將50例直腸癌患者的標本按照性別、分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移、Dukes分期等進行分組，比較VEGF-C、VEGFR-3的表達。結果顯示，VEGF-C、VEGFR-3的表達在性別、分化程度、浸潤深度三個因素中差異無統計學意義（P＞0.05）；在淋巴結轉移、Dukes分期兩個因素中差異有統計學意義（P＜0.05），具體數據見表1。

2.3VEGF-C、VEGFR-3二者表達的相關性

經Spearman等級相關分析，直腸癌組織中VEGF-C與VEGFR-3的表達呈正相關，結果有統計學意義（r=0.372，P ＜0.05）。見表2。

表2VEGF-C、VEGFR-3二者表達的相關性

VEGF-C VEGFR-3rP

陽性陰性

陽性227

陰性5 110.371 0.003

3討論

在我國，近年來直腸癌的發病率有逐年上升的趨勢，且患者逐漸年輕化。在直腸癌患者中，淋巴轉移是導致患者預后不良和死亡的重要因素。由于直腸癌的發生、發展和轉移都是相當復雜的過程，因此目前對其分子機制還不清楚。但近年來有研究表明，VEGF-C和VEGFR-3在促進腫瘤淋巴管生成及淋巴結轉移過程中發揮了重要作用。本文即選擇了此二者為研究對象，探討其與腫瘤轉移的關系。

在人類的基因組中，VEGF-C基因長約40kb，它能穩定的表達出一種高度保守性的蛋白，這種蛋白能夠促進淋巴管、血管內皮細胞增生，從而參與人體多種病理生理過程[3]。VEGFR-3則是在胚胎早期即定位于血管內皮細胞，之后還會在淋巴管內皮細胞上表達。有研究表明，VEGF-C與VEGFR-3具有高度親和力，二者共同作用可激活酪氨酸激酶生物信號傳導系統，細胞有絲分裂增加可誘導腫瘤新生淋巴管形成[4]。本研究的結果顯示，直腸癌組織中VEGF-C與VEGFR-3的表達呈正相關，這也支持了以上論點。本文的結果還顯示，對照組直腸遠端相應切緣組織中VEGF-C、VEGFR-3表達較弱，陽性率分別為25.1%和22.7%。而在直腸癌患者的遠端直腸切緣組織中此二者的表達呈強陽性，陽性率分別為64.3%和61.4%，二者的陽性率比較差異均有統計學意義（P＜0.05）。這提示，直腸癌患者的癌組織中VEGF-C、VEGFR-3的表達要遠高于正常對照組，說明此二者的高度表達可能與腫瘤的生長和轉移相關。

通過本文的實驗我們還發現，VEGF-C、VEGFR-3的表達在性別、分化程度、浸潤深度三個因素中差異無統計學意義（P＞0.05）；在淋巴結轉移、Dukes分期兩個因素中差異有統計學意義（P＜0.05）。這說明性別、分化程度和浸潤深度可能不是影響淋巴結轉移的影響因素，而VEGF-C、VEGFR-3的表達可能與淋巴結轉移和Dukes分期有關。有報道也稱[5，6]，腫瘤細胞自身也可分泌VEGF-C，以促進其外周和內部的淋巴管形成，淋巴管數目的增多使癌細胞更易于侵入淋巴管從而促進淋巴結轉移。相當多的惡性腫瘤組織中均會高表達VEGF-C，因此考慮其可能與淋巴結轉移相關。

綜上所述，隨著腫瘤淋巴管轉移機制的深入研究，抗淋巴管生成治療可成為治療腫瘤轉移的新亮點。He等已經在應用可溶性VEGFR-3受體蛋白抑制小鼠肺癌淋巴管生成方面取得了成功[7]。另外，我們還可以應用VEGF-C、VEGFR-3聯合檢測來初步估計患者的預后及為治療方案的確定提供依據。

[參考文獻]

[1] 商嵩山，丁元升，張劍權，等．104例直腸癌患者淋巴結轉移情況及其相關因素分析[J]．山東醫藥，2010，50(35)：9-11．

[2] Hirakawa S，Lawrence FB，Kodama S，et a1．VEGF-C induced lymphangio genesis in sentinel lymph nodes promotes tumor metastasis to distant sites[J]．Blood，2007，109(2)：1010-1017．

[3] 王從玉，鄧躍華，劉弋，等．nm23 VEGF-C及VEGFR-3在大腸癌中的表達及意義[J]．中國腫瘤臨床，2008，35(19)：1118-1l21．

[4] 馬陳，邢春根，陳曉崗，等．VEGF-C和VEGFR-3在大腸癌中表達及其意義[J]．現代實用醫學，2009，21(1)：64-65．

[5] 陳嘉希，曹家慶，李趙江波，等．VEGF-C、VEGFR-3在原發性大腸癌中的表達及與淋巴轉移關系的研究[J]．江西醫學院學報，2009，40(1)：67-70，76.

[6] 劉俊良，張延新，杜華貞. 基質金屬蛋白酶-9與血管內皮細胞生長因子在大腸腺癌中的表達及臨床病理學意義[J]．臨床和實驗醫學，2008，7（3）：39-40.

[7] He Y，Kozaki K，Karpanen T，et al．Suppression of tumor lymphangiogenesis and lymph node metastasis by blocking vascular endothelial growth factor receptor 3 signaling[J]．Nat1 Cancer Inst，2002，94(11)：819-825．

（收稿日期：2011-08-01）