溫州地區嬰幼兒HCMV感染現狀的分析及其臨床意義

[摘要] 目的 探討嬰幼兒人巨細胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）的感染狀態與其感染標志物的關系及其臨床意義。方法 收集我院住院嬰幼兒（0～3歲）病例，以化學發光法（chemiluminesence immunoassay，CLIA）定量檢測其HCMV-IgM以及HCMV-IgG，以實時熒光定量PCR法（Fluorescence Quantitative PCR，FQ-PCR）檢測HCMV-IgM陽性者尿液標本中病毒核酸載量，分析嬰幼兒HCMV的感染狀態及其臨床意義。結果 在900例患者中，HCMV-IgM陽性病例為161例（17.9%），即HCMV現癥感染率達到17.9%；HCMV-IgG陽性者738例（82%），即82%的嬰幼兒通過胎盤獲得HCMV-IgG抗體，其中148例為HCMV-IgM及HCMV-IgG同時陽性（16.4%），即16.4%的嬰幼兒在從母體獲得了HCMV-IgG抗體的基礎上感染了HCMV；HCMV-IgM及HCMV-IgG均陰性者為73例，即未獲得HCMV感染及免疫力的患者占8.1%。在161例現癥感染患者中，有59例檢測到HCMV的DNA（36.7%），即約有一半的現癥感染患兒出現了病毒活動性感染。結論 雖然絕大部分嬰幼兒從母體獲得了HCMV-IgG抗體，但由于該抗體缺乏中和病毒的作用以及0～3歲嬰幼兒免疫系統的不完善，有超過四分之一（17.9%+8.1%）已經感染HCMV或者將受到HCMV感染的威脅，且活動性HCMV感染主要發生在嬰兒組（28d～1歲）。該病毒感染是導致嬰幼兒肝功能損害的重要病原體之一，因此加強HCMV的防治具有十分重要的意義，尤其是目前出現了對更昔洛韋等抗病毒藥物耐受的病毒突變，開發疫苗將是行之有效的手段。

[關鍵詞] 人巨細胞病毒；化學發光法；實時熒光定量PCR

[中圖分類號] R185 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2011）27-95-03

The Analysis and Clinical Value of the HCMV Infection Status in the Infant of Wenzhou City

QIAO ZengpeiZHENG XiaoqunXIE Qipeng

The Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical College，the Yuying Children’s Hospital of Zhejiang Province，Wenzhou 325027，China

[Abstract] Objective To analyze the clinical value of the relationship between the markers of human cytomegalovirus（HCMV）infection and its infection status in the infants. Methods To collect in-patient blood samples of infants between 0-3 years old，of which the HCMV-IgM and HCMV-IgG were quantitatively detected by chemiluminesence immunoassay（CLIA），and urine would be collected from the IgM positive children to be analyzed for HCMV DNA load by Fluorescence Quantitative PCR，to analyze the current status of HCMV infection in this population. Results Among the 900 samples，161 were positive for HCMV-IgM，meaning a current infection rate of 17.9%，while 738 were positive for HCMV-IgG，meaning 82% children inherited HCMV-IgG by placental circulation，among which，148 were double positive for the two HCMV-IgG HCMV-IgM meaning a current infection occurred with a presence of HCMV-IgG（16.4%）. The rest was double negative for HCMV-IgM and HCMV-IgG，meaning 8.1% were not infected or passively immuned. Among the 161 current infected，76 were positive in HCMV-DNA test，meaning an active infection rate of about 47.2%. Conclusion Tough most infant can inherit HCMV-IgG from mother，over one fourth of the children between 0-3 years old have been infected by HCMV or at risk of infection because of the insufficiency of neutralization of HCMV-IgG and infant’s immature immune system. Furthermore，the active infection more likely occurs in the infant between 28 days to 1 year old. HCMV is one of the most important pathogens that cause infant liver damage，so the prevention and treatment of HCMV infection showed an absolute importance，especially when the virus occurred mutation to withstand ganciclovir，making the vaccination looks more workable to prevent HCMV infection.

[Key words] Human cytomegalovirus；Chemiluminescence；Fuorescence quantitative PCR

人巨細胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）屬于β皰疹病毒亞科，有嚴格的種屬特異性，人是其唯一宿主。HCMV感染在人群中極為常見，其血清IgG抗體陽性率因社會經濟狀態、生活條件和衛生習慣而異。在發達國家高社會經濟地位的人群，HCMV抗體陽性率達到40%～80%，而在發展中國家或者低收入人群抗體陽性率甚至達到90%～100%。在免疫力正常的人群，HCMV感染一般不會引起嚴重的臨床表現，而在免疫力低下人群可以引起較為嚴重的預后。嬰幼兒是一個免疫系統不很完善的群體，容易受到HCMV的感染，并表現出一些臨床癥狀。本研究通過化學發光法（CLIA）定量分析900例我院門診兒童血液樣本中HCMV的IgM、IgG抗體以及IgM陽性患者的尿液標本進行HCMV的DNA檢測，以了解該群體的HCMV感染狀態，為HCMV感染的預防和治療提供依據。

1資料與方法

1.1一般資料

收集本院2009年5月～2011年5月住院的0～3歲患者900例，根據年齡分為新生兒組（0～28d）、嬰兒組（28d～1歲）和幼兒組（1～3歲）。

1.2方法

采集靜脈血并分離血清，于-20℃保存，一周內以化學發光法（CLIA）定量檢測血清中HCMV-IgM和HCMV-IgG抗體。方法參照雅培化學發光試劑盒，同時設置空白及陰性對照。對HCMV-IgM抗體陽性者采集尿液標本，以FQ-PCR法檢測其HCMV病毒核酸載量。具體方法如下：取晨尿1mL于無菌離心管中，2000rpm離心5min，棄上清，沉淀中加入50μL的DNA提取液，混勻，100℃煮沸10min，取出12000rpm離心5min，取上清5μL HCMV DNA擴增體系，擴增條件為93℃2min預變性，93℃ 5s，57℃ 45s，40個循環，37℃ 1s。在Light Cycler自動熒光PCR儀上進行反應，每次實驗按照試劑盒提供的定量陽性標準品做標準曲線，同時設置陰性、空白對照。反應結束后，用電腦自動分析計算定量結果。

1.3統計學分析

采用SPSS18.0統計軟件進行統計學分析，率的比較采用卡方檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2結果

全部900例研究對象中，HCMV-IgM和HCMV-IgG均陽性者為148例，占16.4%，HCMV-IgM陽性而HCMV-IgG陰性者為13例，占1.4%；HCMV-IgM陰性而HCMV-IgG陽性者為590例，占65.6%；HCMV-IgM及HCMV-IgG均陰性者為73例，占8.1%。161例HCMV-IgM陽性病例中，59例檢測出HCMV-DNA，占36.7%，其中101例出現了肺炎、支氣管炎等癥狀的呼吸系統疾病，占62.7%；有32例出現了肝膽損傷，占19.9%；其余出現了如胃腸道功能紊亂癥狀、粒細胞減少和血小板減少等血液系統疾病等癥狀，占17.4%。詳見表1～3。

表1各年齡組HCMV感染陽性率比較[n（%）]

年齡組nHCMV-IgM IgGHCMV-IgG HCMV-IgMHCMV-DNA

新生兒組 223 28（12.5） 189（84.7） 1（0.4） 17（7.6）

嬰兒組 511 102（19.9） 305（55.4） 7（1.3） 57（11.2）

1～3歲組 166 18（10.8） 96（57.8） 5（3.0） 2（1.2）

總計 900 148（16.4） 590（65.6） 13（1.4） 76（8.4）

注：HCMV-IgM＞5為陽性，HCMV-IgG＞15為陽性，HCMV-DNA＞5.0E+02為陽性

表2HCMV IgM、DNA陽性患者的臨床表現

臨床表現例數

肺炎及毛細支氣管炎 92

上呼吸道感染9

嬰兒肝炎 23

嬰兒高膽紅素血癥 11

胃腸道功能紊亂9

血液系統疾病17

表3 HCMV IgM、 DNA關聯性分析

項目DNA（+）DNA（-） 合計

IgM（+） 59102161

IgM（-） 17 646663

經過兩兩四格表χ2檢驗，新生兒組與嬰兒組的HCMV-IgM陽性率以及HCMV-DNA的陽性率之間有顯著性差異（P均＜0.05），且嬰兒組的HCMV-IgM陽性率和HCMV-DNA陽性率高于新生兒組；嬰兒組與1～3歲幼兒組的HCMV-IgM及HCMV-DNA陽性率之間有顯著性差異（P均＜0.05），且嬰兒組的HCMV-IgM陽性率及HCMV-DNA陽性率高于1～3歲組；新生兒組與1-3歲幼兒組的HCMV-IgM陽性率之間的差異無統計學意義（P＞0.05），而HCMV-DNA陽性率之間有顯著性差異（P＜0.01），且新生兒組的HCMV-DNA陽性率高于1～3歲幼兒組。

3討論

人巨細胞病毒（HCMV）屬于廣泛感染人類的β皰疹病毒，為雙鏈DNA病毒，具有嚴格的種屬特異性。如同其他皰疹病毒屬的病毒一樣，在免疫力正常人群，一般在初次感染后即建立終生存在的潛伏感染，在我國成人的感染率可高達80%～100%[1]。Ping Zhao等[2]研究發現，該病毒感染在女性比男性高，在不同職業中以農民和醫生最高。在免疫力正常人群，常常在初次感染后就形成潛伏感染，沒有臨床癥狀，當宿主的免疫力降低，如HIV感染、長期使用免疫抑制劑的器官移植患者以及妊娠期婦女，曾經潛伏的病毒可以激活成為活動性感染并導致臨床癥狀[3，4]。在妊娠期婦女，HCMV可以由潛伏感染轉變為活動感染，常可造成胎兒先天性感染，表現為流產、死胎以及先天畸形等[4，5]，是造成出生缺陷的重要病原體。嬰幼兒以免疫機能不很完善為特點[6]，極易受到HCMV的感染，并表現為以黃疸為主要表現的肝炎綜合征、肺炎等癥狀[7]。

本文綜合分析了溫州地區嬰幼兒的HCMV-IgM、HCMV-IgG以HCMV-DNA的拷貝數與嬰幼兒HCMV感染狀態的關系及不同年齡組之間的HCMV感染狀態的差異以及HCMV-IgM與HCMV-DNA之間的關聯性。分析表明嬰兒組（28d～1歲）的HCMV-IgM陽性率最高，而在1～3歲幼兒組和28d～1歲新生兒組，HCMV-IgM陽性率沒有顯著性差異； HCMV-DNA的陽性率在嬰兒組最高，其次是新生兒組，1～3歲幼兒組最低。分析表明，在各年齡組中，嬰兒組HCMV活動性感染發生率最高，其次是新生兒組以及1～3歲幼兒組，這可能是由于新生兒通過胎盤或者母乳從母體獲得高滴度的HCMV-IgG，使得新生兒階段發生的HCMV感染大多轉變為潛伏感染，極少發生活動性感染。隨著嬰兒與外界環境接觸頻繁以及HCMV-IgG消耗殆盡，再加上在28d～1歲嬰兒階段自主免疫機能不完善，導致潛伏的HCMV再激活并開始復制而形成活動性感染，部分甚至造成嚴重的呼吸系統感染和肝膽功能損害。而隨著自主免疫功能的逐漸完善，幼兒體內的效應細胞如細胞毒性T淋巴細胞（CTL）的作用，活動感染的HCMV再次轉變為潛伏感染，所以在1～3歲幼兒組其HCMV-IgM及HCMV-DNA的陽性率都是三組中最低的。

綜合上述研究，可以發現人群的HCMV感染主要發生在圍產期或新生兒期，而且約有25%的嬰幼兒發生了HCMV現癥感染，其中約有一半出現了病毒復制，發生了HCMV活動性感染，引起以呼吸系統感染和肝膽系統感染為主的臨床表現。由于新生兒通過胎盤獲得HCMV-IgG的保護性作用，在絕大多數新生兒都是潛伏感染而沒有明顯的臨床癥狀。綜合上述的分析，可以發現該地區嬰幼兒HCMV感染現狀不容樂觀，加強預防和治療HCMV感染十分重要。

目前，治療和預防HCMV感染最有效的抗病毒藥物是更昔洛韋（GCV）、萬纈洛韋（VGCV）等，然而國內外已經有報道HCMV對這些抗病毒藥物產生耐受[8]，有近95%對GCV耐藥的HCMV病毒株在UL97編碼基因發生了突變[9]。

鑒于HCMV感染在嬰幼兒的高發生率和嚴重的臨床表現以及越來越多地發生HCMV對抗病毒藥物產生耐藥，為了預防HCMV感染，加快研制能有效預防HCMV感染的疫苗變得越發重要。

[參考文獻]

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（收稿日期：2011-06-27）