RegⅠα蛋白表達(dá)與原發(fā)性胃癌發(fā)展過程的病理特性和相關(guān)性研究

[摘要]目的 探討RegⅠα蛋白表達(dá)與原發(fā)性胃癌發(fā)展過程的病理特性和相關(guān)性。方法 收集本院胃癌標(biāo)本138例，設(shè)胃癌組和癌旁正常黏膜組，采用免疫組化觀察RegⅠα蛋白在原發(fā)胃癌的表達(dá)，并對2年原發(fā)性胃癌患者生存率進(jìn)行分析。結(jié)果 與對照組比，胃癌RegⅠα 陽性率為64.1 %；早期胃癌和進(jìn)展期胃癌Reg I α 表達(dá)無差異，但Borrmann IV RegⅠα 陽性表達(dá)強(qiáng)于其他分期；陽性主要集中在胃竇；印戒細(xì)胞癌陽性表達(dá)較高；淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移與血行轉(zhuǎn)移 Reg I α 陽性表達(dá)較高；臨床分期、分化程度與RegⅠα表達(dá)有關(guān)，與年齡、性別、腫瘤位置、腫瘤大小無關(guān)。胃癌患者RegⅠα 蛋白表達(dá)陰性的2年生存率為84.9 %。結(jié)論RegⅠα可作為評價胃癌預(yù)后的參考指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 原發(fā)性胃癌；RegⅠα蛋白；免疫組化

[中圖分類號]R735.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A[文章編號] 1673-9701（2011）20-01-03

Expression of RegⅠα Protein and Pathologic Feature in Developing of Primary Gastric Cancer

DAI Weili1 HUANG Yan2HONG Huanping3

1.Department of Pathology， Zhejiang Province Tumour Hospital，Hangzhou310022，China；2.Department of Pathology，Second Affiliated Hospital of Zhejiang University School of Medicine，Hangzhou 310009， China ；3.Zhejiang University School of Medicine，Hangzhou 310058， China

[Abstract] Objective To investigate the expression of RegⅠα protein in gastric carcinoma， and explore its correlations to clinic pathologic features and prognosis of gastric cancer. Methods Immunohistochemistry was used to reveal the expression of RegⅠα protein in 138 speciments of primary gastric carcinomas and corresponding normal tissues collected from gastric cancer patients enrolled in our hospital. The correlations of RegⅠα protein to clinic pathologic features and prognosis of gastric carcinoma and 2-year survival rate in the patients were analyzed. Results 64.1% patients showed a positive Reg I α protein. Early gastric cancer and advanced cancer Reg I α expression was not different， but Reg I α expression in Borrmann IV is higher than other stages. RegⅠα expression was mainly in the antrum. RegⅠα protein expression in signet ring cell carcinoma was significantly stronger than in other types of tumor. The patients with RegⅠα protein-positive had a significantly higher rate in lymphatic metastasis and venous invasion. RegⅠα expression was irrelevant with age， sex， tumor location， tumor size. The 2-year survival rate in the patients with RegⅠα protein- positive was 84.9%. ConclusionRegⅠα protein may function as a factor in the development of gastric cancer.

[Key words] Primary gastriccarcinoma； RegⅠα Protein； Immunohistochemistry

胃癌的好發(fā)年齡在40歲以上，男性多見。原發(fā)性胃癌早期臨床多無明顯的上消化道癥狀，隨著病情的發(fā)展，可逐漸出現(xiàn)無特征性的酷似胃炎或胃潰瘍的癥狀。RegⅠα蛋白屬于鈣依賴性植物血凝素家族（C型植物血凝素家族），研究發(fā)現(xiàn)它在哺乳動物生理學(xué)和人類疾病中有多重角色，其在胃癌發(fā)生發(fā)展中的病理生理作用尚不清楚。國內(nèi)外學(xué)者認(rèn)為，RegⅠα與胃癌的關(guān)系密切[1-4]。本課題研究RegⅠα在原發(fā)性胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的表達(dá)，考察RegⅠα與胃癌的相關(guān)性和其病理特點(diǎn)，并對臨床診斷提供建議。

1材料與方法

1.1組織標(biāo)本

收集本院2008年1月～2009年4月手術(shù)切除胃癌標(biāo)本138例，按WHO腫瘤病理學(xué)與遺傳學(xué)分類（胃癌）進(jìn)行組織學(xué)分型[2]。設(shè)立胃癌組和癌旁正常黏膜片組（遠(yuǎn)離腫瘤浸潤部位5cm以上的胃黏膜片組織）。所有患者在手術(shù)前均未接受過化療和放療。組織標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，每個蠟塊取4μm厚連續(xù)切片做免疫組化染色，所有病例均經(jīng)術(shù)后組織病理學(xué)確診，可參考圖1。

1.2試劑

鼠抗人RegⅠα抗體（IgG）、生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgG抗體和抗生素蛋白（ABC）均由瑞士Dako公司生產(chǎn)。

1.3免疫組化方法

經(jīng)脫蠟處理的原發(fā)性胃癌組織切片在含5g/L鼠抗人RegⅠα 抗體（IgG）的PBS中孵育，4℃過夜；采用生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgG抗體于室溫內(nèi)孵育20min，后在已混合的ABC孵育20min，采用對二氨基聯(lián)苯和過氧化氫顯色1min；陰性對照處理同樣本。

1.4免疫組化結(jié)果判斷

所有結(jié)果均由兩位病例醫(yī)生獨(dú)立地按盲法觀察，高倍鏡（×400）隨機(jī)取4個不同的視野，記錄細(xì)胞總數(shù)及陽性細(xì)胞數(shù)，按陽性細(xì)胞所占比例計(jì)分：陽性細(xì)胞率≤5%為0分，陽性細(xì)胞率 ＞5%且≤25%為1分，陽性細(xì)胞率＞25%且≤50%為2分，陽性細(xì)胞率＞50%為3分；同時根據(jù)染色的強(qiáng)弱程度計(jì)分：無染色0分，弱染色1分，中等強(qiáng)度染色2分，強(qiáng)染色3分。最終根據(jù)二者的乘積判斷結(jié)果，≤1分為陰性，＞1分為陽性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，用配對t檢驗(yàn)分析RegⅠα蛋白在腫瘤組織和正常對照組的表達(dá)，卡方檢驗(yàn)分析RegⅠα蛋白表達(dá)與各種病理參數(shù)的關(guān)系；隨訪資料的生存分析采用Log-rank檢驗(yàn)，P＜0.05可認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2結(jié)果

見表1 、

2.1胃癌組織與癌旁正常胃黏膜組織Reg I α蛋白的表達(dá)

免疫組化結(jié)果表明，138 例胃癌組織標(biāo)本中，RegⅠα陽性率為64.1%（89/138），對照組138例癌旁正常組織中RegⅠα陽性率為 20.3%（28/138），統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示，與癌旁正常組織相比，RegⅠα在胃癌組織中的表達(dá)顯著 （P＜0.01） 。

2.2RegⅠα蛋白表達(dá)與原發(fā)性胃癌發(fā)展過程的病理特性

表1顯示，早期胃癌和進(jìn)展期胃癌的RegⅠα 陽性表達(dá)無顯著差異，但進(jìn)展期分期的Borrmann Ⅳ 期RegⅠα 陽性表達(dá)強(qiáng)于其他分期；陽性主要集中在胃竇的癌細(xì)胞胞漿中，在幽門和胃體表達(dá)較弱；組織分型中，陽性表達(dá)最高為印戒細(xì)胞癌；淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)移與血行轉(zhuǎn)移可表達(dá)RegⅠα 陽性；臨床分期、分化程度與RegⅠα陽性表達(dá)有關(guān) （P＜0.01）；RegⅠα表達(dá)與年齡、性別、腫瘤位置、腫瘤大小均無關(guān)。

2.3RegⅠα蛋白表達(dá)和原發(fā)性胃癌生存率的關(guān)系

對138例胃癌患者隨訪2年的生存率結(jié)果顯示，胃癌患者RegⅠα 蛋白表達(dá)陽性患者和RegⅠα蛋白表達(dá)陰性患者的2年生存率分別為34.8 %和84.9 %，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.01）。

3 討論

RegⅠα是一組分泌蛋白，其功能相當(dāng)于急性反應(yīng)蛋白、抗凋亡因子或胰腺β細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞分泌的生長因子。研究發(fā)現(xiàn)它在哺乳動物生理學(xué)和人類疾病中有多重角色。Dieckgraefe BK等[3]發(fā)現(xiàn)，RegⅠα在胃中表達(dá)強(qiáng)度要比腸消化道中高，它參與了消化道黏膜片的增生、分化、抗凋亡、炎癥反應(yīng)。在最近幾年，有實(shí)驗(yàn)依據(jù)支持這些蛋白在腫瘤變化和進(jìn)展中扮演的角色。RegⅠα可能誘導(dǎo)炎癥中上皮細(xì)胞的細(xì)胞凋亡[4]。因此本課題的研究旨在考察RegⅠα蛋白的表達(dá)在原發(fā)性胃癌的發(fā)生、發(fā)展中扮演的角色和可能的作用及對胃癌患者的生存率的影響。

目前的研究顯示，RegⅠα不但在早期的胃癌中表達(dá)，而且還在癌灶鄰近的上皮細(xì)胞中有表達(dá)，與Sekikawa 等A[1]的試驗(yàn)結(jié)果相似。Yutaka Yonemura[5]用RT-PCR法分析RegⅠαmRNA在112例初期胃癌中87例陽性的免疫組化法分析195例初期胃癌中60例陽性（30.8%）。我們的研究結(jié)果為64.13%的RegⅠα蛋白表達(dá)，與上述文獻(xiàn)相當(dāng)。

RegⅠα蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)和靜脈轉(zhuǎn)移相關(guān)，與Fukui H 和Yonemura Y 研究結(jié)果相同[6，7]。腫瘤靜脈轉(zhuǎn)移的發(fā)生率RegⅠα蛋白陽性表達(dá)比RegⅠα蛋白陰性表達(dá)的患者要有意義。本課題發(fā)現(xiàn)RegⅠα表達(dá)與腫瘤浸潤和腫瘤分期有關(guān)，與 Yonemura Y[7]的研究結(jié)果相似。胃癌患者RegⅠα 蛋白表達(dá)陽性患者和RegⅠα 蛋白表達(dá)陰性患者的2年生存率存在顯著性差異，與劉曉光等[8]的研究結(jié)果相似。

我們的課題結(jié)果提示，RegⅠα在癌細(xì)胞中的表達(dá)與腫瘤活動是平行的， RegⅠα在腫瘤細(xì)胞增長和轉(zhuǎn)移中扮演著重要角色，可作為評價胃癌預(yù)后的參考指標(biāo)。

[參考文獻(xiàn)]

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[7]Yonemura Y，Sakurai S，Yamamoto H，et al. REG gene expression is associated with the infiltrating growth of gastric carcinoma[J]. Cancer，2003，98：1394–1400.

[8]劉曉光，楊月琴，李繼承.原發(fā)性胃癌REG Ⅰα蛋白表達(dá)與臨床病理特性的相關(guān)性研究[J].分子細(xì)胞生物學(xué)報(bào)，2008，3 （1）：573-576.

（收稿日期：2011-05-06）

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