解淀粉芽胞桿菌WH1菌液防治油茶炭疽病試驗(yàn)

摘要：抑菌測(cè)定結(jié)果表明，解淀粉芽胞桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＷＨ１發(fā)酵液室內(nèi)抑菌培養(yǎng)７２ ｈ，抑菌率為１００％，培養(yǎng)９６ｈ，抑菌率為８３．２％。田間試驗(yàn)結(jié)果表明，第一次藥后１５ ｄ防效為７４．４％，末次藥后１５ ｄ防效為５３．５％，與對(duì)照化學(xué)藥劑差異性顯著。

關(guān)鍵詞：解淀粉芽胞桿菌；油茶；炭疽病；防治

中圖分類號(hào)：S482.2+8文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０11）18－3720-02

Effect of Bacillus amyloliquefaciens on Oil Camellia Anthracnose Caused by Colletotrichum gloeosporioides

ＷＡＮＧ Ｙｉ－ｘｕｎ１，ＣＨＥＮ Ｊｉｎｇ－ｙｕａｎ１，ＱＩ Ｇａｏ－ｆｕ２，ＬＩＵ Ｙａｎ－ｊｕｎ３，ＣＨＥＮ Ｍｉｎ３，ＨＵＡＮＧ Ｊｕｎ－ｂｉｎ２

（１． Ｈｕｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ， Ｗｕｈａｎ， ４３００７５； ２． Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｗｕｈａｎ ４３００７０，Ｃｈｉｎａ；

３． Ｗｕｈａｎ ｆｏｒｅｓｔｒｙ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｅｘｔｅｎｄｉｎｇ ｓｔａｔｉｏｎ， Ｗｕｈａｎ ４３００２３，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｌｉｑｕｉｄ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ｏｎ ｏｉｌ ｃａｍｅｌｌｉａ ａｎｔｈｒａｃｎｏｓｅ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｔｅｓｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ Ｂ. ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ ＷＨ１ ｈａｄ １００％ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅ ａｔ ７２ ｈｏｕｒｓ， ａｎｄ ８３．２％ ａｔ ９６ ｈｏｕｒｓ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｆｉｅｌｄ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｗａｓ ７４．４％ ａｆｔｅｒ １５ ｄａｙｓ ｏｆ ｆｉｒｓｔ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｌｉｑｕｉｄ， ａｎｄ ５３．５％ ａｆｔｅｒ １５ ｄａｙｓ ｏｆ ｌａｓｔ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ， which was significantly different from that of chemical agent．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ； ｏｉｌ ｃａｍｅｌｌｉａ； ａｎｔｈｒａｃｎｏｓｅ； ｃｏｎｔｒｏｌ

油茶是我國(guó)南方地區(qū)重要的木本糧油樹種，適宜在丘陵山區(qū)種植，發(fā)展油茶生產(chǎn)不僅對(duì)提高我國(guó)食用植物油生產(chǎn)能力，保障我國(guó)糧油安全，提升人民健康水平有利，而且能夠增加農(nóng)民收入和改善生態(tài)環(huán)境，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和生態(tài)價(jià)值。炭疽病是油茶生產(chǎn)上的重要病害之一，主要危害油茶葉片和果實(shí)，不僅導(dǎo)致油茶產(chǎn)量大幅降低，一般減產(chǎn)１０％～３０％，重病區(qū)可減產(chǎn)４０％～５０％［１，２］，而且該病害嚴(yán)重影響茶油品質(zhì)，甚至危害消費(fèi)者健康，嚴(yán)重制約著油茶產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。由于大量化學(xué)農(nóng)藥的使用易引起炭疽病病菌的抗（耐）藥性，且造成環(huán)境污染，不利于生產(chǎn)出高品質(zhì)的油茶。因此，試驗(yàn)利用一株高效生防菌株——解淀粉芽胞桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＷＨ１發(fā)酵液對(duì)油茶炭疽病進(jìn)行生物防治［３］，以期為油茶無(wú)公害生產(chǎn)提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。

１材料與方法

１．１供試菌株

解淀粉芽胞桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）ＷＨ１、油茶炭疽病病菌（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ）均為湖北省林業(yè)科學(xué)研究院實(shí)驗(yàn)室保存菌株。

１．２方法

１．２．１室內(nèi)抑菌測(cè)定將活化的解淀粉芽胞桿菌ＷＨ１菌種按１％接種量接種后于２８ ℃、２００ ｒ／ｍｉｎ振蕩培養(yǎng)４８ ｈ，８ ０００ ｒ／ｍｉｎ離心１０ ｍｉｎ，取上清液，用孔徑為０．２２ μｍ的微孔濾膜過(guò)濾除菌獲得無(wú)菌發(fā)酵液。按照發(fā)酵液與ＰＤＡ培養(yǎng)基體積比１∶９的比率混合制成ＰＤＡ平板。從ＰＤＡ平板中活化好的油茶炭疽病病菌的菌落邊緣用直徑為６ ｍｍ打孔器打孔，將菌餅接種到上述含解淀粉芽胞桿菌ＷＨ１發(fā)酵液的ＰＤＡ平板中，放在２５ ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。以不含發(fā)酵液ＰＤＡ平板作為空白對(duì)照，４次重復(fù)。測(cè)量油茶炭疽病病菌的菌落直徑并計(jì)算抑菌率。

１．２．２田間試驗(yàn)田間試驗(yàn)選擇在武漢市鄭店油茶苗圃地進(jìn)行。試驗(yàn)材料為二年生的油茶嫁接苗。供試藥劑為解淀粉芽胞桿菌ＷＨ１發(fā)酵液（湖北省林業(yè)科學(xué)研究院實(shí)驗(yàn)室制備）；２５％多菌靈可濕性粉劑（上海穗光化學(xué)有限公司）；７０％甲基托布津可濕性粉劑（日本曹達(dá)株式會(huì)社）。

在試驗(yàn)前，對(duì)試驗(yàn)地油茶苗發(fā)病情況進(jìn)行系統(tǒng)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)植株發(fā)病率高達(dá)４６．８％，為保證試驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性、可靠性，將試驗(yàn)地油茶苗所有發(fā)病葉片摘除，然后噴施藥劑。試驗(yàn)共設(shè)４個(gè)處理，解淀粉芽胞桿菌ＷＨ１發(fā)酵液，稀釋１０倍；２５％多菌靈可濕性粉劑６００倍稀釋液；７０％甲基托布津可濕性粉劑

１ ０００倍稀釋液；以噴施清水作為空白對(duì)照。每個(gè)處理４次重復(fù)，共１６個(gè)小區(qū)。

施藥時(shí)間為２０１０年７月１日，正值油茶炭疽病發(fā)病始盛期。于藥后１５ ｄ（７月１５日）進(jìn)行第一次調(diào)查，以后每隔１０ ｄ施藥一次，連續(xù)用藥５次，在最后一次用藥后１５ ｄ（９月２０日）進(jìn)行第二次調(diào)查。

１．２．３試驗(yàn)調(diào)查調(diào)查油茶苗發(fā)病情況，以株為單位，每小區(qū)隨機(jī)取樣，記錄總株數(shù)和病株數(shù)，計(jì)算發(fā)病率。根據(jù)病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，在調(diào)查油茶發(fā)病情況同時(shí)，以葉片為單位，記錄葉片總數(shù)和葉片發(fā)病程度，計(jì)算病情指數(shù)。分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：

０級(jí)為葉片無(wú)病斑；

１級(jí)為病斑占葉片總面積小于５％；

３級(jí)為病斑占葉片總面積６%~１０％；

５級(jí)為病斑占葉片總面積１１%~２５％；

７級(jí)為病斑占葉片總面積２６%~５０％；

９級(jí)為病斑占葉片總面積５０％以上。

計(jì)算方法［４］：

發(fā)病率＝×１００％

病情指數(shù)＝×１００

２結(jié)果與分析

２．１室內(nèi)抑菌結(jié)果

解淀粉芽胞桿菌ＷＨ１無(wú)菌發(fā)酵液對(duì)油茶炭疽病具有很好的室內(nèi)抑菌效果。培養(yǎng)７２ ｈ，抑菌率為１００％，培養(yǎng)９６ ｈ，抑菌率為８３．２％。

２．２田間試驗(yàn)結(jié)果

從表１可知，施藥處理１５ ｄ后調(diào)查，解淀粉芽胞桿菌ＷＨ１發(fā)酵液防效最好，防效高達(dá)７４．４％，其次為７０％甲基托布津可濕性粉劑，防效達(dá)５９．０％，２５％多菌靈可濕性粉劑效果最差，防效僅為４８．７％。末次用藥１５ ｄ后調(diào)查，解淀粉芽胞桿菌ＷＨ１發(fā)酵液防效為５３．５％；其次為７０％甲基托布津可濕性粉劑防效達(dá)４４．２％；２５％多菌靈可濕性粉劑效果最差，防效僅為３９．５％。

３小結(jié)與討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，生防菌株解淀粉芽胞桿菌ＷＨ１發(fā)酵液防治油茶炭疽病具有較好的效果，對(duì)作物安全，不污染環(huán)境，是十分具有開發(fā)潛力的生防菌。解淀粉芽胞桿菌ＷＨ１發(fā)酵能夠產(chǎn)生一種Sｕｒｆａｃｔｉｎ類脂肽的活性物質(zhì)，抑制炭疽病病原菌生長(zhǎng)，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡產(chǎn)生拮抗作用［３］。此次化學(xué)殺菌劑對(duì)油茶炭疽病防治效果相對(duì)較差，主要由于天氣因素影響，試驗(yàn)中后期階段曾出現(xiàn)長(zhǎng)時(shí)間的陰雨天氣，且高溫高濕，有利于油茶炭疽病發(fā)生和蔓延；其次可能由于長(zhǎng)期使用該類殺菌劑而導(dǎo)致油茶炭疽病病原菌產(chǎn)生抗（耐）藥性，有必要進(jìn)一步對(duì)油茶炭疽病病菌進(jìn)行抗（耐）藥性檢測(cè)。

參考文獻(xiàn)：

［１］ 楊光道，束慶龍，段琳，等． 主要油茶品種對(duì)炭疽病的抗性研究［Ｊ］． 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，２００４，３１（４）：４８０－４８３．

［２］ 靳愛(ài)仙，周國(guó)英，李河． 油茶炭疽病的研究現(xiàn)狀、問(wèn)題與方向［Ｊ］． 中國(guó)森林病蟲， ２００９，２８（２）：２７－３１．

［３］ ＱＩ Ｇ Ｆ， ＺＨＵ Ｆ Ｙ， ＤＵ Ｐ， ｅｔ ａｌ． Ｌｉｐｏｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｄｕｃｅｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｆｕｎｇａｌ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ａ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｐａｔｈｗａｙ［Ｊ］． Ｐｅｐｔｉｄｅｓ， ２０１０，３１（１１）：１９７８－１９８６．

［４］ 農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所生測(cè)室． 農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則（一）［Ｍ］． 北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，２０００．