ＮaCl脅迫下堿蓬基因組MSAP分析

摘要：采用甲基化敏感擴增多態性（ＭＳＡＰ）技術檢測ＮａＣｌ脅迫下堿蓬（Ｓｕａｅｄａ ｓａｌｓａ Ｌ．）基因組ＤＮＡ甲基化的變化，結果顯示，堿蓬基因組ＤＮＡ全甲基化比率與ＮａＣｌ處理濃度存在一定的劑量效應關系（Ｒ＝－０．９２）；利用１８種組合的引物，檢測不同ＮａＣｌ濃度處理下堿蓬基因組時共發現147個甲基化位點。

關鍵詞：堿蓬；ＤＮＡ甲基化；高鹽ＣＴＡＢ；ＭＳＡＰ

中圖分類號：Ｑ９４９．７４５．１文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０11）18－3856-03

Methylation-sensitive Amplified Polymorphism of Suaeda salsa L. Genome under NaCl Stress

ＺＨＡＯ Ｘｉｕ－ｊｕａｎ，ＨＡＮ Ｙａ－ｎａｎ，ＣＡＩ Ｌｕ

（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｂａｏｔｏｕ ０１４０１０，Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｉｎ Ｓｕａｅｄａ ｓａｌｓａ Ｌ． ｇｅｎｏｍｅ ｕｎｄｅｒ ＮａＣｌ ｓｔｒｅｓｓ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ ｕｓｉｎｇ ＭＳＡＰ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ （Ｒ＝－０．９２） ｂｅｔｗｅｅｎ ＮａＣｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｗｈｏｌｅ ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｉｎ Ｓｕａｅｄａ ｓａｌｓａ； １４７ ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ abtained from treatments ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎs of ＮａＣｌ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｏｕｔ ｂｙ ｕｓｉｎｇ １８ ｐａｉｒｓ ｏｆ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐｒｉｍｅｒｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｓｕａｅｄａ ｓａｌｓａ Ｌ．； ＤＮＡ ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ； ｈｉｇｈ ｓａｌｔ ＣＴＡＢ； ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＭＳＡＰ）

甲基化敏感擴增多態性（ＭＳＡＰ）技術是一種基于同裂酶應用在ＡＦＬＰ基礎上發展起來的檢測基因組ＤＮＡ甲基化的方法［１］。由ＭｓｐⅠ代替ＭｓｅⅠ作為內切酶，與ＨｐａⅡ配對，共同識別５’－ＣＣＧＧ－３’序列，由于二者對ＤＮＡ甲基化有不同的敏感性而顯示不同的多態性。目前，此技術已經應用于小麥［２］、水稻［３］及玉米［４］等糧食作物的ＤＮＡ甲基化檢測，擬南芥［５］、棉花［６］及油菜［７］等植物的研究中也應用到了此項技術。

堿蓬（Ｓｕａｅｄａ ｓａｌｓａ Ｌ．）分布于我國東北、西北、華北及沿海各省，主要生于鹽堿地、河岸、湖邊［８］。其富含氨基酸和胡蘿卜素等，可作為蔬菜食用，種子可用于榨油。一般在含鹽量高達３％的潮間帶也能稀疏叢生，是一種典型的鹽堿地指示植物。該實驗利用ＤＮＡ甲基化檢測技術——ＭＳＡＰ技術，檢測鹽生植物鹽脅迫下ＤＮＡ甲基化的變化機制，建立鹽濃度與ＤＮＡ甲基化之間的劑量效應關系，為研究耐鹽機理做好理論基礎。

１材料和方法

１．１材料

挑選飽滿的堿蓬種子，土壤種植。待其長出幼苗后，分別用濃度為０、１５０、３００、４５０、６００ ｍｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ澆灌，每隔一天澆一次，每次１５ ｍＬ，處理７ ｄ后提取基因組ＤＮＡ。

１．２方法

１．２．１堿蓬基因組ＤＮＡ的提取與檢測采用高鹽ＣＴＡＢ法［９］提取堿蓬基因組ＤＮＡ，利用紫外分光光度計和瓊脂糖凝膠電泳檢測ＤＮＡ提取濃度和質量?！?br>