口腔鱗癌中基質(zhì)金屬蛋白酶-2的表達及臨床意義

【摘要】目的 了解口腔鱗癌（OSCC）組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）的表達情況，探討其與口腔鱗癌組織浸潤轉(zhuǎn)移潛能及預(yù)后的關(guān)系。方法 采用免疫組化SP法檢測50例口腔鱗癌組織和10例正常口腔黏膜組織中MMP-2的表達，分析其表達與臨床指標(biāo)的關(guān)系。結(jié)果 OSCC中MMP-2的表達顯著高于正常口腔粘膜組（P<0.01），其陽性表達率分別為76%和10%，深層浸潤的口腔鱗癌組織中，MMP-2的陽性表達率顯著高于淺層浸潤的口腔鱗癌組織（P<0.01）。結(jié)論 OSCC中MMP-2的表達顯著高于正常口腔黏膜組織，MMP-2的陽性表達與腫瘤浸潤程度密切相關(guān)，提示MMP-2有促進腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移的作用。

【關(guān)鍵詞】口腔鱗癌；MMP-2；浸潤轉(zhuǎn)移；免疫組織化學(xué)

口腔鱗癌是口腔頜面部最常見的惡性腫瘤，并多呈高度局部破壞性而危及生命。有研究表明，MMP-2的活性和表達的增加與人類多種惡性腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移潛能及預(yù)后密切相關(guān)［1］。本研究采用免疫組化方法檢測OSCC中MMP-2的表達，分析其與OSCC浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 50例口腔鱗癌標(biāo)本取自本院2009～2010年手術(shù)切除標(biāo)本，10例正常口腔黏膜標(biāo)本取自本院2009～2010年非腫瘤患者手術(shù)切除標(biāo)本。50例口腔鱗癌病例術(shù)前未經(jīng)化療、放療或其他生物治療，經(jīng)病理證實，其中30例為深層浸潤（浸潤累及肌層、骨質(zhì)或深層腺體），20例為淺層浸潤（腫瘤局限于黏膜及黏膜下層）。全部標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。

1.2 方法 采用免疫組化SP法（試劑均購于福州邁新生物工程有限公司），以MMP-2即用型鼠抗人多克隆抗體標(biāo)記MMP-2，抗原修復(fù)采用檸檬酸組織抗原修復(fù)液進行加熱抗原修復(fù)，嚴(yán)格控制實驗時間、實驗溫度和各種試劑濃度等條件，按照說明書進行染色，以0.01 mol/L的PBS液代替一抗做陰性對照，陽性對照切片由試劑公司提供。

1.3 結(jié)果判定 MMP-2免疫組化陽性信號位于細胞漿內(nèi)，呈棕色或棕黃色顆粒，依照陽性細胞密度計分：0%，0分；＜25%，1分；25%～50%，2分；＞50%，3分。＜2分者為陰性（-），≥2分者為陽性（+）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 14.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MMP-2的表達 MMP-2陽性信號位于OSCC細胞胞漿中，口腔鱗癌組織中，MMP-2的陽性率為76%（38/50），正常口腔黏膜中，MMP-2的陽性率為10%（1/10），兩者相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。

2.2 MMP-2的表達與口腔鱗癌浸潤深淺程度的關(guān)系 研究表明，在深層浸潤的口腔鱗癌組織中，MMP-2的陽性表達率顯著高于淺層浸潤的口腔鱗癌組織，兩者相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=8.095，P<0.05）。

3 討論

浸潤轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要生物學(xué)特征，浸潤主要是指癌細胞侵犯和破壞周圍正常組織，進入循環(huán)系統(tǒng)的過程，同時癌細胞在繼發(fā)組織器官中定位生長也包含浸潤。浸潤的實現(xiàn)取決于腫瘤細胞對正常組織的破壞能力，腫瘤本身可產(chǎn)生多種分解酶降解細胞外基質(zhì)及基底膜，基質(zhì)蛋白酶在這一過程中起重要作用［2，3］。與腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān)的基質(zhì)金屬蛋白酶主要是MMP-2，MMP-2的主要水解底物是變性膠原及細胞外基質(zhì)（BM）的主要成分Ⅳ型膠原和Ⅴ型膠原等，還可分解糖蛋白成分FN和LN。大多數(shù)口腔鱗癌呈高度局部破壞性，并侵犯周圍組織器官（包括呼吸道和頸部大血管）危及生命。在口腔鱗癌浸潤及轉(zhuǎn)移過程中，細胞外基質(zhì)和基底膜的降解和破壞是重要的環(huán)節(jié)。MMP-2（基質(zhì)金屬蛋白酶-2）在腫瘤細胞介導(dǎo)的細胞外基質(zhì)和基底膜降解中起關(guān)鍵作用。有學(xué)者對高轉(zhuǎn)移和非轉(zhuǎn)移口腔癌細胞株的MMP-2表達進行了研究，發(fā)現(xiàn)高轉(zhuǎn)移口腔癌細胞株主要表達MMP-2，且MMP-2的活性與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和對局部下頜骨浸潤顯著相關(guān)。活化的MMP-2定位于細胞穿透基質(zhì)的突出部位，估計其有“鉆頭”的作用。本組實驗免疫組化染色顯示MMP-2蛋白主要表達于口腔鱗癌的細胞漿內(nèi)，在肌層、骨質(zhì)、深層腺體口腔鱗癌組織中的表達顯著高于黏膜及黏膜下的表達，提示MMP-2可能是口腔鱗癌具有高轉(zhuǎn)移高浸潤能力的分子基礎(chǔ)。

以往研究表明，MMP-2在卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、肺癌等惡性腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移過程中起關(guān)鍵作用。韓月等［4］對42例原發(fā)性膽囊癌標(biāo)本行SABC免疫組化染色后顯示，MMP-2的高表達與膽囊癌細胞分化程度差、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、預(yù)后差有關(guān)，表明MMP-2的表達有利于判斷膽囊癌的生物學(xué)行為和預(yù)后。本組實驗中，MMP-2的表達與腫瘤浸潤的深淺程度相關(guān)，提示MMP-2可作為判斷口腔鱗癌浸潤轉(zhuǎn)移及預(yù)后的指標(biāo)。

參 考 文 獻

［1］ Davies B， Miles DW， Happerfield LC，et al.Activity of type Ⅳ collagenases in benign and m alignant breast disease. Br J cancer，1993，67:1126-1131.

［2］ Currann S， Murray GI. Matrix metalloproteinases in tumour invasion and metastasis. J Pothol， 1999，189:300.

［3］ Kleiner DE，Statler-Stevebson WG.Matrix metalloproteinases and metustasis. Cancer Chemmother Pharmacl，1999（43）:42.

［4］ 韓月，石景森.CD44V6和基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2表達與膽囊癌侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究.中華肝膽外科雜志，2002，8(40):253-254.