液基細(xì)胞學(xué)和高危人乳頭瘤狀病毒DNA檢測(cè)對(duì)宮頸病變篩查的價(jià)值

張春莉，李冬琴，王延明

(1.延安大學(xué)附屬醫(yī)院病理科，陜西延安 716000;2.延安大學(xué)附屬醫(yī)院婦科，陜西延安 716000)

子宮頸癌是婦科常見(jiàn)惡性腫瘤之一，現(xiàn)已明確人乳頭瘤狀病毒(human papilloma virus，HPV)感染是宮頸癌發(fā)生的主要病因［1-3］。巴氏涂片細(xì)胞學(xué)檢查是較早作為篩查宮頸癌的方法，但存在許多不足之處。近年液基制片技術(shù)的出現(xiàn)提高了宮頸癌及癌前病變的檢出率［4］，細(xì)胞學(xué)標(biāo)本制片質(zhì)量控制是準(zhǔn)確發(fā)現(xiàn)病變的前提，它包括標(biāo)本收集、涂片制備、固定染色等。此外，迄今發(fā)現(xiàn)的100多型HPV病毒中HPV16、18、31、33、35、39、45 等型持續(xù)感染可引起宮頸上皮內(nèi)瘤變與宮頸癌。因此，高危人乳頭瘤狀病毒(high risk human papilloma virus，HR-HPV)檢測(cè)在宮頸癌篩查與防治中也具有重要作用。在此主要探討液基細(xì)胞學(xué)(thin prep liquid based cytology testing，TCT)和高危人乳頭瘤狀病毒DNA(HR-HPV DNA)檢測(cè)對(duì)宮頸病變篩查的價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2009年10月至2010年10月期間在我院婦科門(mén)診就診的2876例患者為研究對(duì)象，年齡 19～62歲，平均(33.7 ±5.8)歲。排除急性生殖道炎癥、子宮頸錐切和子宮切除史。

1.2 方法

1.2.1 TCT 檢測(cè) 采用南京東大迪艾基因技術(shù)有限公司提供的試劑。用特制宮頸刷旋轉(zhuǎn)刷取宮頸管及外口的脫落細(xì)胞，并洗入細(xì)胞保存液中送檢，進(jìn)行液基細(xì)胞學(xué)檢查。其診斷標(biāo)準(zhǔn):采用2001 年TBS分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)［5］宮頸病變分為良性反應(yīng)性細(xì)胞改變、鱗狀上皮細(xì)胞異常和腺上皮細(xì)胞改變(AGUS，AIS)，其中以鱗狀上皮細(xì)胞異常為主，包括:①正常范圍(within normal limits，WNL);②意義不明的非典型鱗狀細(xì)胞(atypical squamous cells of undetermined significance，ASC-US);③低度鱗狀上皮內(nèi)病變(low grade squamous intraepithelial leison，LSIL);④高度鱗狀上皮內(nèi)病變(high grade squamous intraepithelial leison，HSIL);⑤鱗狀細(xì)胞癌(squamous cell carcinoma，SCC)。以TCT≥ASCUS/AGUS為異常。

1.2.2 HR-HPV DNA檢測(cè) TCT檢測(cè)異常的部分患者在外院進(jìn)行HPV DNA檢測(cè)。HPV DNA檢測(cè)采用凱普公司提供的試劑，利用建立在導(dǎo)流雜交法上的低密度基因芯片技術(shù)。標(biāo)本采集均使用一次性取樣器插入宮頸管順時(shí)針?lè)较蛐D(zhuǎn)3～5圈，取宮頸管分泌物裝入特制保存液中，提取樣本中的DNA，通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增，放大病毒DNA的量。利用雙鏈堿基互補(bǔ)的原理，將DNA產(chǎn)物加入固定有不同HPV亞型探針的低密度基因芯片上，進(jìn)行導(dǎo)流雜交，最終獲得特異性的雜交結(jié)果。檢測(cè)HPV亞型21種，其中包括高危型人乳頭瘤病毒 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型。檢測(cè)結(jié)果的診斷標(biāo)準(zhǔn)是:只有Biotin點(diǎn)和IC點(diǎn)同時(shí)顯色才能保證結(jié)果的真實(shí)性和有效性。

2 結(jié)果

2876例患者TCT檢查結(jié)果異常者183例，占6.36%，其中 ASC-US 104 例(56.83%)，LSIL 48 例(26.23%)，HSIL 21 例(11.48%)，SCC 10 例(5.46%)。183例TCT異常患者中有123例進(jìn)行了HR-HPV DNA檢測(cè)并回報(bào)了結(jié)果，其中陽(yáng)性87例，陽(yáng)性率53.05%;其中ASC-US 29 例(27.88%)、LSIL 32 例(66.67%)、HSIL 17 例(80.95%)、SCC 9 例(90.00%)。

3 討論

子宮頸癌篩查的主要目的是早期發(fā)現(xiàn)、診斷和治療宮頸癌前病變(cervical intraepithelial neoplasias，CIN)和宮頸癌［6］。子宮頸癌預(yù)防最成功的策略在于落實(shí)了人口普查和發(fā)明了細(xì)胞學(xué)篩查方法。

細(xì)胞學(xué)檢查一直是篩查宮頸癌的主要手段，但因假陰性高易造成對(duì)宮頸癌及癌前病變的漏診。TCT由于技術(shù)上的改進(jìn)，使宮頸異常細(xì)胞的檢出率明顯提高，本組資料中2876例患者TCT檢查結(jié)果異常者183例，占6.36%，其中ASC-US 104例，LSIL 48例，HSIL 21例，SCC10例。但有研究報(bào)道，TCT檢查對(duì)于ASCUS/AGU與病理診斷符合率低，意味著TCT檢查有可能導(dǎo)致對(duì)宮頸早期病變的漏診［7］。本組資料中164例TCT檢查異常者HR-HPV DNA檢測(cè)陽(yáng)性87例，陽(yáng)性率53.05%，盡管細(xì)胞學(xué)篩查大幅度降低了宮頸痛的發(fā)病率與病死率，但是細(xì)胞學(xué)檢查單次檢測(cè)敏感度低，需重復(fù)檢查，因此，許多組織，包括美國(guó)癌癥學(xué)會(huì)(ACS)，美國(guó)婦產(chǎn)科醫(yī)師學(xué)會(huì)(ACOG)等權(quán)威機(jī)構(gòu)推薦將宮頸癌明確的生物學(xué)病因HR-HPV檢測(cè)納入宮頸癌篩查方案。HR-HPV DNA檢測(cè)法取樣簡(jiǎn)單易行，檢測(cè)結(jié)果客觀準(zhǔn)確，特別適合大規(guī)模的人群篩查。婦女定期檢查HPV感染，能有效地判斷子宮頸癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。HR-HPV DNA檢測(cè)陽(yáng)性，預(yù)示發(fā)生宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)性增加，或預(yù)測(cè)在未來(lái)2～5年可能發(fā)生宮頸癌前病變［8］，因此，HPV檢測(cè)已成為宮頸的另一種防癌篩查手段。但是，HR-HPV DNA檢測(cè)假陽(yáng)性率也是普遍存在的一個(gè)問(wèn)題。假陽(yáng)性率發(fā)生的原因可能于以下幾點(diǎn)有關(guān):①操作技術(shù)上的錯(cuò)誤;②生物樣品的收集、儲(chǔ)藏、處理過(guò)程中污染;③反應(yīng)抑制劑的出現(xiàn)，發(fā)生了非特異性雜交反應(yīng);④臨床質(zhì)控不到位等。

綜上所述，無(wú)論是TCT技術(shù)或是高危型HPV檢測(cè)，均是臨床常用的宮頸病變檢查方法。通過(guò)細(xì)胞學(xué)檢查可以明確患者是否存在細(xì)胞學(xué)的改變，高危型HPV檢測(cè)采用標(biāo)準(zhǔn)化試劑盒，人為主觀因素影響小，可了解患者是否存在和宮頸癌關(guān)系密切的高危型HPV感染，故將TCT檢查與HR-HPV DNA檢查聯(lián)合用于宮頸病變的篩查，是防治宮頸癌的有效手段。

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