高效液相色譜法測定黑白芝麻中芝麻素含量*

葉子晨，梁佳龍，劉雪英，王慶偉，李曉曄，李穆瓊

(1.第四軍醫大學藥學系學員隊，西安 710033;2.第四軍醫大學藥學系藥物化學教研室，西安 710033;3.第四軍醫大學唐都醫院藥劑科，西安 710038)

芝麻又名胡麻，《神農本草經》記載:“芝麻，補心臟，益氣力，長肌肉，填髓腦，久服強身”。芝麻分黑、白兩種，《本草綱目》記載:“胡麻取油，以白者為勝，服食以黑者為良。”芝麻素屬木脂素類化合物，系芝麻的主要活性成分之一 。研究表明，芝麻素具有抗氧化［1］、調節血壓［2］、保護肝臟［3］和抑制腫瘤［4］等藥理作用。筆者采用高效液相色譜(HPLC)法對黑、白芝麻中的芝麻素進行了測定比較。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 SHIMADZU LC-2010ATH高效液相色譜儀;電子分析天平(梅特勒公司 );KQ-32000DB型數控超聲波儀(昆山超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥 黑芝麻1(購于陜西省西安市藥材市場，產地:陜西省咸陽市);黑芝麻2(購于陜西省西安市華潤萬家超市，產地:湖北省咸寧市);白芝麻 (購于陜西省西安市藥材市場，產地:陜西省咸陽市);芝麻素對照品(陜西施普利生物科技有限公司提供，含量:98%，批號:20090818001);甲醇 (色譜純，Fisher公司 )，色譜用水為雙蒸水。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備 對照品溶液的制備:精密稱取芝麻索對照品6.11 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，低溫避光保存備用。供試品溶液的制備:照《中華人民共和國藥典》2005年版附錄ⅡD清炒法［5］分別炒制黑、白芝麻備用。取不同來源芝麻生品或炒制品適量，搗碎，精密稱取1.0 g，置具塞三角燒瓶中，精密加甲醇10 mL，稱質量，低溫超聲30 min，再稱質量，補足減失的質量，搖勻，靜置30 min取上清液過孔徑0.45μm有機膜過濾，濾液低溫避光保存備用。

2.2 檢測波長的選擇 取芝麻素對照品溶液適量，用甲醇稀釋，以甲醇為空白對照，200～400 nm范圍掃描，結果芝麻素在203，234及287 nm有最大吸收峰，為排除雜質對測定的影響，選擇287 nm為HPLC分析測定波長。

2.3 色譜條件 色譜柱:Iinertsil ODS-3(150 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇-水 (75∶25);流速:1 mL·min-1;檢測波長:287 nm，進樣量:20μL，溫度:室溫。

2.4 方法專屬性 取適當濃度芝麻素對照品溶液、供試品溶液，在上述色譜條件下分別進樣，記錄色譜圖(圖1)。樣品溶液中其他未知成分與芝麻素分離完全，對測定無干擾，芝麻素的保留時間為8.5 min。

圖1 3種溶液HPLC色譜圖A.對照品;B.黑芝麻樣品;C.白芝麻樣品;1.芝麻素

2.5 線性范圍考察 精密量取芝麻素對照品儲備液適量，置于10 mL量瓶中，用甲醇逐步稀釋至刻度，搖勻得濃度分別為 0.60，3.00，6.00，14.97，29.94，59.88，89.82μg·mL-1的對照品溶液，分別吸取上述溶液20μL色譜條件下進樣，記錄峰面積，以峰面積(Y)對濃度進行回歸，芝麻素在0.60～89.82 mg·L-1濃度范圍內呈良好的線性關系，回歸方程為:Y=30 133.83X-3 145.52(r=0.999 9，n=3)。

2.6 精密度實驗 取芝麻素低、中、高3種濃度對照品溶液，同一天連續進樣3次，進樣量20μL，測定峰面積，計算芝麻素的日內相對標準偏差(RSD)。連續3 d進樣3次，測定峰面積，計算芝麻素的日間RSD。結果見表1，表明在該色譜條件下儀器精密度良好。

表1 精密度實驗結果 %

2.7 穩定性實驗 取白芝麻品溶液，在配制后0，6，12和24 h于色譜條件下進樣，芝麻素峰面積的RSD為0.82%。結果表明樣品溶液在該實驗條件下24 h內穩定。

2.8 加樣回收率實驗 精密稱量同一批已知芝麻素含量的白芝麻樣品溶液1.0 mL，分成3組，每組3份，分別加入89.82μg·mL-1芝麻素對照品溶液0.2，1.0及3.0 mL。甲醇溶解定量至10 mL，搖勻，色譜條件下測定，計算芝麻素的加樣回收率。結果其平均回收率100.0%，RSD=0.81%，見表2。

表2 芝麻素的加樣回收率結果

2.9 樣品測定 精密吸取上述供試品溶液1.5 mL，置10 mL棕色量瓶中，甲醇定容，色譜條件下測定，依據工作曲線計算樣品溶液的濃度，黑、白芝麻中芝麻素的含量結果見表3。

3 討論

黑、白芝麻微量元素整體差異較明顯［6］，其中除白芝麻鈉(Na)含量大于黑芝麻3倍以上外，其余元素的含量白芝麻均低于黑芝麻。白芝麻中的硒(Se)含量為黑芝麻的 85%，鈣(Ca)、銅(Cu)、鉀(K)、鎂(Mg)、鋅(Zn)、鐵(Fe)的含量為黑芝麻的60% ～80%，而錳(Mn)含量則僅為黑芝麻含量的6%。

表3 樣品測定結果

本研究結果表明，炒制品中的芝麻素含量稍高于生品，可能是炒制后芝麻素易于溶出;所用的白芝麻中芝麻素的含量均高于兩個黑芝麻中的芝麻素;黑芝麻2生品和炒制品中的芝麻素含量很低，進一步考察該黑芝麻出油率也很低，是否與產地和儲存時間過久有關有待于進一步考察。筆者所用的黑芝麻1和白芝麻中芝麻素的含量均高于文獻報道［7］，可能與芝麻來源、芝麻素萃取方法及測定方法靈敏度不同有關。

《中華人民共和國藥典》歷版收載的均為黑芝麻，其中的活性成分芝麻素只是作為定性鑒別項目之一。隨著農業科技的發展，芝麻的品種越來越多，以及相同品種有不同地域的產品，芝麻無論是作為油料資源，還是作為滋補藥，其質量越來越受到人們的關注，因此有必要建立相關成分的測定標準。筆者所建立的芝麻素測定方法簡便快速、靈敏度高，可為芝麻及其制品中芝麻素的含量測定提供參考。

［1］ 吳向起，楊解人.芝麻素的抗氧化作用及其對代謝綜合征大鼠腎病的影響［J］.中國藥理學通報，2008，24(8):1065-1069.

［2］ 孔祥，楊解人.芝麻素對腎性高血壓大鼠主動脈收縮功能一氧化氮和內皮素含量的影響［J］.中國實驗方劑學雜志，2006，12(4):47-49.

［3］ 崔云山，張善玉，樸惠順，等.芝麻素散劑對乙醇引起小鼠急性肝損傷的影響［J］.時珍國醫國藥，2005，16(1):6-7.

［4］ 魏艷靜，卞紅磊，余文靜，等.芝麻素對S180荷瘤小鼠的抗腫瘤作用研究［J］.時珍國醫國藥，2008，19(5):1075-1076

［5］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)［M］.北京:中國醫藥科技出版社，2010:附錄20.

［6］ 陳宇鴻.黑白芝麻無機元素含量測定分析［J］.微量元素與健康研究，1999，16(1):59-60.

［7］ 徐麗華，趙渤年，何心亮.黑芝麻中芝麻素的含量測定［J］.中國中藥雜志，1998，9(2):124-125.