反相高效液相色譜法測定地塞米松軟膏中地塞米松含量

楊習江，哈娜，哈力

(哈爾濱醫科大學附屬第一臨床醫院藥學部，150001)

地塞米松軟膏可用于治療過敏性皮炎、神經性皮炎、脂溢性皮炎或各種瘙癢癥等。該制劑收載于1990年版黑龍江省醫院制劑規范，其質量標準中無含量測定項。為有效控制該制劑的質量，筆者建立了反相-高效液相色譜(reversed phase-high performance liquid chromatography，RP-HPLC)法測定地塞米松軟膏中地塞米松含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 美國Waters 600高效液相色譜系統，2996二極管陣列檢測器，717plus自動進樣器，Empower數據管理系統。十萬分之一電子天平(型號:BP211D Sartorius)，萬分之一電子天平(型號:AE200上海梅特勒——托利多儀器有限公司)，超聲波清洗儀(型號:SB3200型 上海 BRANSON)，超純水器(型號:UPW50S北京普析通用儀器責任有限公司)。

1.2 試藥 地塞米松對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:100129-200804)，地塞米松軟膏(哈爾濱醫科大學附屬第一臨床醫院藥學部制劑室，批號:20090504，20090511，20090518)，甲醇為色譜純，水為超純水(實驗室自制)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:Sinochrom ODS-BP柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動相:甲醇-水(80∶20);檢測波長:240 nm［1］;流速:1.0 mL·min-1;柱溫:25℃;進樣量:20μL。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取地塞米松對照品25.0 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻;精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每毫升含地塞米松50.0μg)。

2.3 供試品溶液的制備 取地塞米松軟膏適量(相當于地塞米松2.5 mg)，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇約30 mL，置60℃水浴中加熱，振搖使地塞米松溶解，放冷至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻＞2 h，取出后迅速過濾，放至室溫，取續濾液，即得。

2.4 陰性對照溶液的制備 按處方量稱取處方中除地塞米松以外的其他藥用輔料，按制備工藝制成不含地塞米松的陰性供試品，按照“供試品溶液的制備”項下操作，制備陰性供試品溶液，備用。

2.5 系統適應性實驗 分別精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各20μL進樣，按“2.1”項下色譜條件進行測定。對照品與供試品溶液的地塞米松保留時間基本一致，陰性樣品溶液在此處無吸收峰出現，不干擾主藥的含量測定。

2.6 線性范圍的考察 精密吸取0.5 mg·mL-1對照品溶液 0.25，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50 mL，分別置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進樣20μL，測定地塞米松的峰面積，以進樣量為橫坐標，峰面積值為縱坐標，繪制標準曲線，得到回歸方程:Y=2.37×106X-2.22×105，r=0.999 9。結果表明:在上述色譜條件下，地塞米松在0.25～2.50μg范圍內，地塞米松峰面積值與進樣量呈良好的線性關系。

2.7 精密度實驗 精密吸取上述同一份的對照品溶液20μL和同一份的供試品溶液20μL，分別在上述的色譜條件下連續進樣6次，測定地塞米松的峰面積。實驗結果表明，樣品中地塞米松峰面積值的RSD＜2%，精密度良好。

2.8 穩定性實驗 取同一份供試品溶液(批號:20090511)分別于0，1，2，4，6，8 h 進樣20 μL，測定地塞米松的峰面積。實驗結果表明，樣品中地塞米松峰面積值的RSD＜2%，供試品溶液在8 h內穩定性良好。

2.9 重復性實驗 對同一批樣品(批號:20090511)分別取樣6份，按擬定的含量測定方法，制備供試品溶液，在上述的色譜條件下測定供試品溶液和對照品溶液的峰面積，計算地塞米松的含量。實驗結果表明，樣品中地塞米松含量的RSD＜2%，重復性良好。

2.10 加樣回收率實驗 精密稱取陰性對照樣品5 g(相當于含有地塞米松2.5 mg)，分別精密加入地塞米松對照品2.0，2.5，3.0 mg，按上述供試品溶液的制備方法制備成加樣回收供試品溶液，并按照上述色譜條件，吸取供試品溶液和對照品溶液，進樣20μL，測定地塞米松的峰面積，計算加樣回收率。結果見表1。實驗結果表明，平均回收率為100.1%，RSD為0.75%(n=9)。

表1 地塞米松加樣回收率實驗結果Tab．1 Results of recovery test of dexamethasone

2.11 樣品含量測定 按照上述含量測定方法，分別對3批樣品進行含量測定，結果批號為20090504，20090511，20090518的3批樣品地塞米松平均含量分別為 0.49，0.46，0.51 mg·g-1。

3 討論

筆者參照地塞米松含量測定的有關文獻［2-6］，分別采用甲醇和乙醇提取樣品中的地塞米松，在同一流動相系統中作相溶性預實驗。其中采用甲醇提取處理的樣品在(Ⅰ)甲醇∶水(80∶20)、(Ⅱ)甲醇∶水(90∶10)流動相溶液中有良好的溶解性，未見渾濁和白色絮凝物，但在(Ⅲ)甲醇∶水(70∶30)流動相溶液中可生成少量白色絮凝物;而用乙醇提取處理的樣品在上述3種流動相系統中均出現白色絮凝物，故實驗采用甲醇提取樣品中的地塞米松。

乳膏中的基質可污染色譜柱，因此在樣品處理時采用冰浴冷卻后迅速過濾的方法，為了使基質完全除去，以減少對色譜柱的損害，并使測定結果更加準確，一定要在提取地塞米松后將提取溶液放至室溫再定容至刻度，同時應在冰浴中冷卻＞2 h。

在參照地塞米松含量測定的有關文獻［1-6］和上述預實驗的基礎之上，采用3種流動相:(Ⅰ)甲醇∶水(80∶20)、(Ⅱ)甲醇∶水(90∶10)、(Ⅲ)乙腈∶水(60∶40)，在上述色譜條件下，取對照品溶液和供試品溶液分別進樣20μL，記錄HPLC色譜圖。結果表明，樣品在流動相(Ⅱ)甲醇∶水(90∶10)中基質和主藥地塞米松無法分離，而在流動相(Ⅲ)乙腈∶水(60∶40)中基質和主藥地塞米松分離不完全，但采用流動相(Ⅰ)甲醇∶水(80∶20)可得到較理想的HPLC色譜圖，方法簡便快速、分離度好、結果穩定，可為該制劑的質量控制提供客觀的定量評價方法。

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)［M］.北京:化學工業出版社，2005:184.

［2］ 錢方，黃偉，吳洪.高效液相色譜 (HPLC)法測定復方地塞米松乳膏中地塞米松的含量［J］.藥學服務與研究，2002，2(4):253-254.

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［4］ 周征，卓開華.高效液相色譜法測定復方氯霉素乳膏的含量［J］.中國醫院藥學雜志，2007，27(2):276-277.

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［6］ 王麗萍.高效液相色譜法測定皮炎平軟膏中樟腦與醋酸地塞米松含量［J］.醫藥導報，2007，26(5):550-551.