HPLC法測定氨酚那敏三味浸膏膠囊中對乙酰氨基酚含量

劉正磊，馮素香

氨酚那敏三味浸膏膠囊由對乙酰氨基酚、馬來酸氯苯那敏、四季青葉等組成，用于緩解感冒或流行性感冒引起的發熱、頭痛、咽痛、鼻塞、咳嗽等。含對乙酰氨基酚的復方制劑是目前使用較多的解熱鎮痛藥，其含量測定方法因配伍組方理化性質不同而不同。現行2010版《中國藥典》二部中對乙酰氨基酚原料的含量測定采用的是分光光度法，而對乙酰氨基酚滴劑的含量測定采用的是高效液相色譜法[1～3]。故本文用高效液相色譜法對氨酚那敏三味浸膏膠囊中對乙酰氨基酚的含量進行測定，以期建立氨酚那敏三味浸膏膠囊中對乙酰氨基酚的含量測定方法。

1 儀器與試藥

Waters高效液相色譜儀（配Waters2695 Separations Module，Waters2996 Photodiode Array Detector），Empower2色譜工作站）；XS105分析天平 (瑞士梅特勒)；XK96-A型快速混勻器（姜堰市新康醫療器械有限公司）；KQ-100型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；對乙酰氨基酚對照品（批號：10018-200408，中國藥品生物制品檢定所）；氨酚那敏三味浸膏膠囊（蕪湖綠葉制藥有限公司）；甲醇（色譜醇，Fisher公司）；乙腈（色譜醇，Fisher公司）；磷酸、氯仿等試劑均為分析純；純凈水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為Venusil XBP C18 (250×4.6 mm,5 μm)；流動相:甲醇-0.05%磷酸（15:85）；檢測波長：240 nm；柱溫30 ℃。

2.2 對照品溶液的制備

取對乙酰氨基酚對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1 mL含對乙酰氨基酚0.4 mg的溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品膠囊10粒，傾出內容物，研細，稱取0.5 g，移至100 mL量瓶中，加甲醇-水（20:80，v/v）50 mL，超聲處理10 min，加上述溶液至刻度，濾過，取續濾液1 mL，加上述溶液稀釋至10 ml，即得。

2.4 空白試驗

按照處方比例和工藝制成缺對乙酰氨基酚的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對照液。將陰性對照品溶液，對照品溶液及供試品溶液分別注入液相色譜儀，按上述色譜條件進行測定，結果見圖1。結果表明，處方中其他藥材和輔料不干擾對乙酰氨基酚的含量測定。

2.5 線性關系考察

2.6 中間精密度試驗

取同一批樣品，由3人在不同的時間按上述條件進行測定3次，平均標示含量為96.4%，RSD%=1.81，結果表明：中間精密度良好，符合定量分析要求。

2.7 穩定性試驗

取同一供試品溶液，分別在0，0.5，1，2，4，6，8，10，12，24 h按上述條件注入液相色譜儀，結果對乙酰氨基酚峰面積平均值為6891285.65，RSD%=1.04，結果表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.8 重復性試驗

取同一批號樣品6份，按照上述供試品溶液制備方法制備6份供試品溶液，分別進行測定，平均標示含量為98.1%，RSD=1.78%，結果表明：對乙酰氨基酚重復性試驗良好。

2.9 耐用性試驗

2.9.1 不同色譜柱 精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，在三支不同色譜柱Venusil XBP-C18色譜柱（4.6×250 mm,5 μm，Agela V9520525ck0063）、Sinochrom ODS-BP C18(250×4.6 mm,5 μm，大連依利特)，Waters C18（02533032313634）的條件下，其它條件按上條件進行測定，其標示含量分別為97.2%、99.1%、98.3%。結果表明在其它條件不變的情況下，不同色譜柱對樣品含量測定結果和色譜峰的分離度均未有明顯影響。

2.9.2 不同流速 精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，流速分別設定為0.9，1.0，1.1 mLmin-1，其它條件按上述條件進行測定，其標示含量分別為97.2%、99.5%、98.1%。結果表明在其它條件不變的條件下，流速的微小變化對樣品含量測定結果和色譜峰的分離度均未有明顯影響。

2.9.3 不同波長 精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，檢測波長分別設定為238，240，242nm，其它條件按上述條件進行測定，其標示含量分別為97.8%，96.5%，97.1%，結果表明在其它條件不變的條件下，不同波長對樣品含量測定結果和色譜峰的分離度均未有明顯影響。

2.9.4 不同柱溫 精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，在不同柱溫28，30，32℃的條件下，其它條件按上述條件進行測定，其標示含量分別為96.1%， 97.6%，95.9%。結果表明在其它條件不變的條件下，柱溫的微小變化對樣品含量測定結果和色譜峰的分離度均未有明顯影響。

2.1 0 加樣回收率試驗

取本品10粒，傾出內容物，研細，精密稱取0.3 g，精密加入對乙酰氨基酚對照品適量，置100 mL量瓶中，按照供試品處理方法進行樣品處理及測定，計算回收率，平均回收率為101.4%，RSD=1.61%。

2.1 1 樣品含量測定

取膠囊樣品，按上述條件進行測定，結果三批樣品對乙酰氨基酚平均標示含量為95.5%，98.4%，94.5%。

3 討論

本文研究表明，高效液相色譜法能將對乙酰氨基酚與輔料完全分離，方法穩定，從而真實地反映出對乙酰氨基酚溶液的含量，在以對乙酰氨基酚峰計，理論板數超過2000的色譜柱上, 能取得理想的結果[4～5]。由于分光光度法測定時，輔料對測定有干擾，所以高效液相法測定結果比分光光度法測定結果略低。本試驗采用HPLC法測定氨酚那敏三味浸膏膠囊中對乙酰氨基酚，方法操作簡便、結果準確、穩定性好、專屬性強，可用于氨酚那敏三味浸膏膠囊中對乙酰氨基酚的含量測定和質量控制方法。

[1] 中華人民共和國藥典委員會.《中華人民共和國藥典》二部[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010: 234.

[2] 王玉,張哲,陳西敬,等.高效液相色譜法測定對乙酰氨基酚的血藥濃度及其生物利用度[J].中國臨床藥學雜志,2002,11(2):97.

[3] 簡淑娟.對乙酰氨基酚及其復方制劑中含量測定方法研究概況[J].中國藥師,2002,5(5):298.

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