KAI1在宮頸鱗癌中的表達及臨床意義

田秀娟,宋晶淼,曹 璐,冷維春,劉俊寶

(吉林大學中日聯誼醫院婦產科,吉林長春130033)

KAI1基因是1995年Dong等[1]發現的一種新的腫瘤轉移抑制基因,KAI1基因是四次跨膜超家族TM4SF(Transmembrance 4 Superfamily)成員之一,參與細胞增殖、粘附和運動調節[2],KAI1基因表達缺失和人類許多上皮細胞惡化、侵襲、轉移潛能有關[3,4]。現已在多種惡性腫瘤如乳腺癌、胰腺、結直腸癌、肝癌、肺癌、食管癌等癌組織及其轉移灶中均證實了伴有KAI1基因表達的下降或缺失。本研究檢測KAI1在宮頸鱗癌中的表達及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取大慶龍南醫院2009年1月-2010年10月間婦科門診宮頸錐切術后10例正常宮頸組織、40例宮頸上皮內瘤變組織。36例宮頸鱗癌組織為住院患者且病例病理資料完整的手術切除標本,所有標本術前均未放療、化療和激素治療。CINI8例,CINII15例,CINIII17例,其中36例宮頸鱗癌中有淋巴結轉移者21例,占58.3%。無淋巴結轉移者15例,占41.7%。年齡分布25歲-65歲,平均年齡45歲。宮頸癌標本根據國際婦產科聯盟(FIGO,International Federation of Gynecology and Obstetrics)標準進行臨床分期,其中Ⅰ期28例,Ⅱa期8例,細胞分化程度高-中分化19例,低分化17例。所有標本均在新鮮取材后,用福爾馬林固定,石蠟包埋。所有切片均經兩位病理學專家盲法認定。

1.2 方法

KAI1兔抗人單克隆抗體(濃縮型)購于北京博奧森生物技術有限公司,KAI1抗體工作濃度為1:100。SP免疫組化檢測試劑盒、DAB顯色液均購福州邁新生物技術有限公司。按試劑盒說明書嚴格操作,以PBS代替一抗設立陰性空白對照。

1.3 結果判定

KAI1表達是在細胞膜和(或)漿內出現黃色或棕黃色顆粒為陽性標準,每例鏡下隨機觀察10個高倍視野(×200),進行雙盲半定量積分判斷結果[5]。根據陽性細胞所占百分比進行評分:陽性細胞百分率≤10%為1分;11%≤陽性細胞百分率≤50%為2分;51%≤陽性細胞百分率≤75%為3分;陽性細胞百分率≥75%為4分。細胞染色強度分4個等級,無色為0分;弱陽性(淡黃色)為 1分;中度陽性(棕黃色)為2分;強陽性(棕褐色)為3分。通過對細胞著色強度及陽性細胞百分率結果進行分析,兩者評分相加,結果≥3分為陽性,＜3分判為陰性。

1.4 統計方法

顯著性檢驗采用 χ2檢驗,當T＜1或 n＜40采用精確概率法,求 P值。所有數據統計都在SPSS17.0軟件上進行。

2 結果

2.1 KAI1在正常宮頸組織中、宮頸上皮內瘤變組織中、宮頸鱗癌組織中表達的比較

KAI1蛋白陽性顆粒呈棕黃色,主要在細胞漿或細胞膜中表達,(見圖1-圖3),在正常宮頸組織、CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ和宮頸癌鱗組織中,KAI1陽性表達率呈遞減趨勢。依次為100%、87.5%、73.3%、63.1%、19.4%。正常宮頸組與宮頸鱗癌組比較有統計學意義,P＜0.05(χ2=21.79,P=0.000)。CIN組與宮頸鱗癌比較有統計學意義,P＜0.05(CINI與宮頸鱗癌比較 χ2=13.97,P=0.001;CINⅡ與宮頸鱗癌比較 χ2=13.46,P=0.000;CINⅢ與宮頸鱗癌比較 χ2=13.13,P=0.000)。正常宮頸組與CIN組比較無統計學意義P＞0.05(正常宮頸組與CINI比較P=0.444;正常宮頸組與CINII比較P=0.108;正常宮頸組與CINⅢ比較P=0.77)。CIN組間比較無統計學意義P＞0.05(CINI與CINⅡ比較P=0.414;CINⅠ與CINⅢ比較P=0.349;CINⅡ與CINⅢ比較P=0.589),見表 1。

2.2 KAI1在不同臨床病理特征的宮頸鱗癌中的表達比較

表1 KAI1蛋白在不同卵巢組織中的表達

圖1 KAI1在正常宮頸組織中的陽性表達(SP×200)

圖2 KAI1宮頸 CINII中弱陽性表達(SP×200)

圖3 KAI1在宮頸鱗癌中陰性表達(SP×100)

KAI1在無淋巴結轉移的宮頸鱗癌組織中的陽性表達率為40%(6/15),在有淋巴結轉移的宮頸鱗癌組織中的陽性表達率則降低至4.8%(1/21),兩組表達之間比較有統計學意義(P＜0.05)。KAI1在細胞高-中分化組中的陽性表達率為36.8%(7/19),在細胞低分化組無陽性表達(0/17),兩組表達之間比較有統計學意義(P＜0.05)。KAI1在宮頸鱗癌中的表達與細胞分化程度和淋巴結轉移有關,而與組織浸潤深度、臨床分期、年齡、癌灶大小無關,(P＞0.05)見表2。

表2 KAI1在不同臨床病理特征宮頸癌中的表達

3 討論

宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤,占女性癌的第二位。嚴重威脅著婦女的健康和生命。我國每年新發病例13.15萬,約占世界宮頸癌新發病例的28.8%,宮頸癌我國發病年齡以40-50最多,60-70又一個高峰。20歲以下少見。隨著近些年宮頸癌早期篩查的開展。使宮頸癌的發病率及死亡率有所降低。但仍存在很多病例,早期診斷時繼已經出現侵襲和轉移。浸襲和轉移是惡性腫瘤的生物學特征,是影響腫瘤治療及復發的主要因素,也是導致病人死亡的主要原因,而侵襲和轉移又是一個多因素參與的極其復雜的病理過程。因此探尋宮頸癌侵襲轉移的機制,早期判斷宮頸癌轉移在指導治療及預后判斷中有重要意義。

自從KAI1作為一個新的腫瘤轉移抑制基因被發現以來,它抑制腫瘤侵襲和轉移的機制就成為人們研究的重點。Schindl等[16]研究了KAI1在宮頸癌中的表達情況,結果顯示CINI級KAI1高表達,CINII級CINIII級45%表達下調,而在浸潤性宮頸鱗癌組織中KAI1表達29.3%強陽性,56%表達下調,14.7%不表達。認為KAI1表達下調是宮頸癌早期發生事件。Zhang等[7]采用PT-PCR技術檢測宮頸癌織KAI1的表達,結果表明在宮頸鱗癌組織中KAI1表達減少,其表達與細胞分化及轉移有關,提示KAI1參與了宮頸癌的發生發展,可能在一定程度上具有預測宮頸癌侵襲轉移的潛能。Liu等[6]對宮頸癌KAI1表達與其分化的關系結果顯示,低分化的宮頸癌更易發生轉移。在王國慶[9]的研究中強調KAI1低表達與淋巴結轉移顯著相關。

本組研究結果顯示,在正常宮頸、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宮頸鱗癌中,KAI1陽性表達率呈遞減趨勢。統計學檢驗表明KAI1在宮頸鱗癌中的表達率明顯低于正常組織和CIN組,這一研究結果與Schindl等[6]、Zhang等[7]結果一致,提示宮頸癌發生的過程伴隨著KAI1表達的下降。本組研究結果還顯示,KAI1在正常宮頸組及CIN組的表達無統計學意義,并且與CIN分級無關。提示KAI1可能在細胞惡變早期的作用小于惡變晚期。這一結果與耿曉星等[10]研究結果一致。

關于KAI1表達和惡性腫瘤臨床病理特性之間的關系,多數研究表明KAI1表達與腫瘤淋巴結轉移狀況、組織浸潤深度、細胞分化程度、臨床分期、預后之間有顯著性相關,而與年齡、腫瘤大小、浸潤方式之間無統計學相關[11,12]。本組研究顯示,KAI1在宮頸鱗癌中的表達與細胞分化程度和淋巴結轉移明顯相關而與臨床分期、浸潤深度、癌灶大小、年齡等無關。為了研究KAI1在有無淋巴結轉移的宮頸鱗癌組織中表達的差異,我們應用免疫組織化學方法檢測了36例宮頸鱗癌組織中KAI1的表達。結果表明,有淋巴結轉移的宮頸鱗癌組織中KAI1的表達率顯著低于無淋巴結轉移的宮頸鱗癌,提示宮頸鱗癌在發生淋巴結轉移的過程中伴隨著KAI1蛋白表達水平的下降,與這一結果與王國慶[9]束曉明[13]在宮頸癌中研究的一致。說明宮頸鱗癌中KAI1表達下調與淋巴結轉移顯著相關,可用來預測淋巴結的轉移狀況。本組研究還顯示,KAI1在宮頸鱗癌的低分化組陽性表達明顯低于高-中分化組,提示KAI1與細胞分化有關,隨著分化程度降低,KAI1陽性表達減少或消失。這一結果與Zhang等[7]Liu等[8]研究一致。由此可見KAI1的低表達與宮頸鱗癌的發生發展有關,其低表達可能預示著該腫瘤更具有侵襲性,預后差,并可作為判斷宮頸鱗癌的惡變程度指標之一。

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