三種長白山野生食用菌多糖和微量元素含量測定

2011-09-25 08:30:38徐晶曹越通化師范學院制藥與食品科學系吉林通化134002

通化師范學院學報 2011年4期

徐晶，曹越(通化師范學院制藥與食品科學系，吉林通化134002)

徐晶，曹越
(通化師范學院制藥與食品科學系，吉林通化134002)

目的測定三種長白山野生食用菌—牛肝菌、密環菌、香菇的中多糖和微量元素的含量.方法采用水提醇沉法提取多糖，苯酚—硫酸法測定多糖含量，火焰原子吸收光譜法測定Ca、Fe、Zn、Mg四種微量元素的含量.結果牛肝菌、密環菌、香菇中多糖含量依次為7.67%、14.45%、6.92%.微量元素含量依次為(μg·g－1):Fe:910.9，769.4，473.0，Ca:176.1，68.8，141.7;Mg:34.3，25.3，30.1;Zn:128.7，83.9，124.9.結論三種長白山野生食用菌均含有豐富的多糖和微量元素，其中密環菌多糖含量最高，牛肚菌微量元素含量最高.

食用菌;多糖;微量元素;苯酚—硫酸法;原子吸收光譜法

食用菌是一大類有大型子實體的高等真菌，俗稱蘑菇或蕈，含有蛋白質、多糖、纖維素、維生素、礦物質等多種營養成分，是一種綠色保健食品.食用菌中含有的多糖具有增強人體免疫功能、抗腫瘤、抗衰老、抗疲勞、降低膽固醇等作用［1－2］，近年來得到國內外學者的廣泛研究［3］.食用菌多糖的提取方法主要有水提醇沉法、酸堿提取法、酶解法、超聲波法、微波法、超臨界流體萃取法等方法［4－5］，其中水提醇沉法是最經典方法，應用最為廣泛.關于食用菌中微量元素的研究報道較少，測定方法主要有吸光光度法、原子吸收光譜法和原子發射光譜法等.最近，于穎［6］報道了采用電感耦合等離子體質譜(ICP－MS)法測定牛肚菌中微量元素的方法.本文對三種長白山野生食用菌——牛肝菌、密環菌、香菇中多糖和微量元素(Fe、Ca、Mg、Zn)的含量進行了測定，以期為合理開發和利用長白山野生食用資源提供理論依據.

1 儀器與材料

1.1 儀器

80－2離心機(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司);HWS26型電熱恒溫水浴鍋(上海一恒科技有限公司);DHG—9101—3S型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海三發科學儀器有限公司);FZ102微型植物試樣粉碎機(北京中興偉業儀器有限公司);722型可見分光光度計(上海元析儀器有限公司); FA1604A電子天平(上海精天電子儀器有限公司); WFX－1F2B2原子吸收分光光度計(北京第二光學儀器廠);鐵空心陰極燈、鈣空心陰極燈、鎂空心陰極燈、鋅空心陰極燈(河北衡水空心陰極燈廠).

1.2 材料

牛肝菌和密環菌采自吉林省通化市佐安，香菇購自通化市新華市場(人工栽培的鮮品)，經通化師范學院制藥與食品科學系于俊林教授鑒定，分別為厚環粘蓋牛肝菌Suillus grevillei(Kl.)Sing.、蜜環菌Armillariellamellea(Vahl.:Fr.)Karst，香菇Lentinus edodes(Berk.)Sing..將三種食用菌用蒸餾水清洗干凈，放于鐵盤上自然風干7天，用植物微型粉碎機進行粉碎，過80目篩備用.

1.3 試劑及藥品

三氧化二鐵(光譜純);氧化鈣(高純);金屬鋅(99.99%);硫酸鎂(光譜純);葡萄糖(分析純)、苯酚(分析純);鹽酸、硝酸、高氯酸、硫酸均為優級純;蒸餾水.

1000mg·mL－1鐵儲備液:準確稱取經灼燒的光譜純三氧化二鐵0.1429 g，置于250 mL燒杯中，加入鹽酸(1+1)20 mL，加熱至完全溶解，蒸至小體積，冷卻后，加入鹽酸5 mL，加熱使鹽類溶解，用去離子水定容到100 mL容量瓶中，搖勻.

系列鐵標準溶液:取10 mL鐵儲備液用蒸餾水定容至100 mL容量瓶中，成為100mg·mL－1鐵標準溶液，從100 mg·mL－1鐵標準溶液中分別取1、2、3、4、5 mL定容至50 mL，配制成濃度為2、4、6、8、10mg·mL－1系列鐵標準溶液.

1000mg·mL－1鈣儲備液:準確稱取經灼燒的高純氧化鈣0.1400 g，置于250 mL燒杯中，加入鹽酸2mL，低溫加熱使其溶解，冷卻后移入100 mL容量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，搖勻.

系列鈣標準溶液:取10 mL鈣儲備液用蒸餾水定容至100 mL容量瓶中，成為100mg·mL－1鈣標準溶液，從100 mg·mL－1鈣標準溶液中分別取2、4、6、8、10mL定容至50mL，配制成濃度為4、8、12、16、20 mg·mL－1系列鈣標準溶液.

1000 mg·mL－1鋅儲備液:準確稱取高純金屬鋅0.1000 g，置于250 mL燒杯中，加鹽酸(1+1)20 mL，加熱至完全溶解，蒸至小體積冷卻，加入鹽酸5 mL，加熱煮沸溶解鹽類，冷卻后用去離子水移入100 mL容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻.

鋅系列標準溶液:取10 mL鋅儲備液用蒸餾水定容到100 mL容量瓶中，成為100mg·mL－1鈣標準溶液，從100 mg·mL－1鋅標準溶液中分別取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL定容至50 mL，配制成濃度為0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mg·mL－1系列鋅標準溶液.

1000 mg·mL－1鎂儲備液:準確稱取光譜純硫酸鎂0.5261 g，加入2 mL水，慢慢加入2 mL鹽酸(1+1)，待完全溶解后，加熱煮沸，冷卻后移入100 mL容量瓶中，用去離子水稀釋至刻度，搖勻.

鎂系列標準溶液:取10 mL鎂儲備液用蒸餾水定容到100 mL容量瓶中，成為100mg·mL－1鎂標準溶液，從100 mg·mL－1鎂標準溶液取10 mL用蒸餾水定容到100 mL容量瓶中，成為10 mg·mL－1鎂標準溶液，從10 mg·mL－1鎂標準溶液中分別取1、2、3、4、5 mL定容至50mL，配制成濃度為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg·mL－1系列鎂標準溶液.

0.1 %的葡萄糖標準溶液:精密稱取干燥恒重的葡萄糖0.5 g，加蒸餾水溶解，定容到500mL的容量瓶中，混勻備用.

2 實驗方法

2.1 多糖含量的測定

食用菌多糖測定采用苯酚—硫酸法.

(1)葡萄糖標準曲線的繪制.準確吸取葡萄糖標準使用溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，分別置于比色管中，各補水到2 mL，然后加入1 mL5%的苯酚溶液，振蕩混勻.再小心加入5 mL濃硫酸，搖勻，用分光光度計于490 nm處以試劑空白為參比，分別測定各溶液的吸光度，繪制標準曲線.

(2)食用菌多糖樣品待測液的制備.準確稱取已風干的牛肝菌、密環菌、香菇各約10 g，置于500mL燒瓶中，加水300 mL置沸水浴中加熱1 h，過濾，將濾液濃縮至25 mL.濾液加入質量分數為95%的乙醇145 mL，使溶液質量濃度達到85%，靜置過夜.將靜置過夜的溶液離心沉淀，用乙醇反復洗滌，60℃烘干成粉末，備用.

因為粗提取的多糖中含有單糖、雙糖、低聚糖等成分，必須進一步的精制、純化.取經粗提取的三種菌粉各0.2 g，分別置于500mL容量瓶中，加水100 mL左右，放置沸水浴上加熱1 h，冷卻至室溫后用85%乙醇150 mL，于60℃浸提30 min，重復2次，合并提取液，以3000 r·min－1的轉數離心分離5 min，用乙醇溶液洗滌沉淀，離心后棄去上清液，重復操作3～4次，然后將沉淀加入蒸餾水溶解并定容至100 mL，搖勻，即得多糖樣品待測液.

(3)食用菌多糖含量的測定.準確吸取三種樣品測定液各1mL，分別置于比色皿中，按照標準曲線制備方法進行測定，于490nm處測吸光度，以試劑空白為對照，分別測得牛肝菌多糖、香菇多糖和密環菌多糖的吸光度，按下式計算多糖含量.

多糖計算公式:

式中:C－根據線性方程計算出的樣品測定液中葡萄糖質量，mg;V1－樣品提取時定容體積，mL;V2－樣品比色管中取樣體積，mL;m－樣品稱量質量，g.

2.2 微量元素的測定

食用菌中微量元素的測定采用原子吸收光譜法.

(1)儀器工作條件.火焰原子吸收分光光度法測定各微量元素的儀器最佳工作條件如表1.

表1 儀器工作條件

(2)微量元素待測液的制備.準確稱取已風干的牛肝菌、密環菌、香菇各0.5g于三個100mL小燒杯中，加入5mL硝酸，蓋上表面皿，靜置24h，用電熱套在110°C條件下加熱，待溶液近干時取下，冷卻，加入3mL高氯酸，加熱(加熱后冒白煙)至近干，取下，冷卻后移入50mL容量瓶中，用3%的硝酸溶液定容，制得微量元素測定液，每樣平行制備三份.