一氧化碳中毒誘導遲發(fā)記憶障礙小鼠白細胞表面黏附分子CD11b/CD18表達的研究

彭道勇 王蘇平 李 迪 張志清 朱曉鈺

（大連市中心醫(yī)院，遼寧 大連 116021）

一氧化碳（carbon monoxide，CO）是造成中毒性死亡最常見的窒息性氣體，部分患者經(jīng)過數(shù)日或數(shù)周的假愈期后，還會發(fā)生遲發(fā)性腦病（delayed neuropsychologic sequelae，DNS），臨床表現(xiàn)為一組以急性癡呆為主的精神神經(jīng)功能紊亂，其發(fā)病機制不清。本研究檢測CO中毒遲發(fā)記憶障礙的小鼠血CD11b/CD18的表達。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選用健康昆明小鼠80只，體質(zhì)量18～20g，鼠齡2～3個月，每籠5只溫室飼養(yǎng)。99.9%CO氣體；熒光素（PE）標記的小鼠CD61抗體及同型對照；流式細胞儀。

1.2 實驗動物分組及模型制備

將小鼠飼養(yǎng)1周以適應環(huán)境后行光電刺激小鼠條件反射跳臺適應性訓練，讓小鼠學會跳上安全臺。

1.3 誘導實驗動物染毒

采用按體質(zhì)量（1.5mL/10g）每間隔6h連續(xù)8次注射99.9%的CO氣體致小鼠中毒進行染毒。

1.4 遲發(fā)記憶障礙小鼠的篩選

小鼠CO中毒后第1、3、5、7、11、15、20、25、30d，分別利用光電刺激小鼠條件反射跳臺儀記錄小鼠跳下安全臺的跳臺潛伏期，作為評價小鼠的記憶保持鞏固能力的指標。篩選出遲發(fā)記憶障礙小鼠。

1.5 標本制備

從小鼠眶動脈和眶靜脈采血0.5mL（3.8%枸櫞酸鈉1∶9抗凝），按步驟制備標本：100μL全血+10μL對照試劑，100μL全血+10μL實驗試劑避光孵育15min，自動定溶到1mL，上機待測。

1.6 中毒小鼠血小板CD11b/CD18水平測定

用流式細胞儀檢測標本，每管收集10000個CD11b/CD18陽性血小板，記錄CD11b/CD18的強度。

1.7 統(tǒng)計學分析

2 結(jié) 果

2.1 CO中毒小鼠記憶保持能力的改變

小鼠腹腔注射CO中毒后第1d記憶保持能力明顯受損，第3d基本恢復正常，在第5、7、11d的測試中各有2只、第15、20d各有1只小鼠再次出現(xiàn)記憶保持能力受損。將再次出現(xiàn)記憶保持能力受損的8只小鼠（標記為A組）；在未再次出現(xiàn)記憶保持能力受損的觀察組中隨機抽取8只小鼠（標記為B組）。與B組相比較，A組小鼠記憶保持能力明顯受損（P＜0.01）；碳氧血紅蛋白（COHb）無明顯變化。

2.2 流式細胞儀測定小鼠血白細胞表面黏附分子CD11b/CD18表達水平

與B組相比較，A組血CD11b/CD18表達增加，呈顯著性差異（P＜0.05 ），見表1。

表1 兩組小鼠記憶保持能力、COHb、血白細胞表面黏附分子CD11b/CD18表達（ ±s）

表1 兩組小鼠記憶保持能力、COHb、血白細胞表面黏附分子CD11b/CD18表達（ ±s）

注：與B組相比較*P＜0.05；#P＜0.01

n 記憶保持能力（s）COHb（%）CD11b/CD18（熒光指數(shù)）A組 8 73.75±55.23 4.53±0.65 43.28±2.56*B組 8 268.25±30.05# 4.39±0.68 29.02±2.08

3 討 論

對于急性CO中毒，缺血缺氧機制易被大家認同[1]。但單純的缺血缺氧無法解釋遲發(fā)性腦病的發(fā)病，因此提示另有其他機制參與了本病的發(fā)生、發(fā)展。近年來關(guān)于缺血性腦卒中后炎性反應在缺血性腦損傷中所起的重要作用已被證實[2,3]。但CO中毒后缺血缺氧狀態(tài)下炎性反應對腦組織的影響報告很少。本實驗通過建立急性CO中毒動物中毒模型，對中毒后遲發(fā)記憶礙小鼠多形核白細胞黏附分子CD11b/CD18的表達進行了研究。

CD11b/CD18屬于白細胞黏附分子整合素β2亞家族成員，其表達和活性受多種趨化因子調(diào)節(jié)，可與多種配體相互作用，在細胞間黏附和炎性反應中發(fā)揮生物學作用。正常情況下，CD11b/CD18僅在單核細胞和中性粒細胞膜上呈低水平表達。在炎性反應時，局部內(nèi)皮細胞被受損組織中產(chǎn)生的大量炎性介質(zhì)激活，使CD11b/CD18表達迅速增加，促使中性粒細胞與內(nèi)皮細胞的黏附，進而中性粒細胞浸潤到外周組織，釋放氧自由基和蛋白酶，最終造成組織損傷和壞死。有文獻報道，腦缺血后CD11b/CD18含量明顯升高，其表達量與腦組織損傷的嚴重程度有關(guān)[4]。

本實驗觀察到CO中毒后遲發(fā)記憶障礙小鼠外周血多形核白細胞CD11b/CD18表達顯著增高，說明CO中毒后，炎性反應對血管、組織的損傷持續(xù)存在，這可能是出現(xiàn)CO中毒遲發(fā)腦病的病理原因之一。文獻報道，地塞米松可以抑制因大鼠缺血性腦損傷引起的白細胞黏附、浸潤等功能[5]。腎上腺皮質(zhì)激素可能減輕和縮短細胞黏附分子的作用。在高壓氧治療及改善腦缺血基礎上，配合腎上腺皮質(zhì)激素及抗血小板聚集治療就會對CO中毒遲發(fā)腦病產(chǎn)生更好的療效。

[1]Kwon OY,Chung SP,Ha YR.Delayed postanoxic encephalopathy after carbon monoxide poisoning [J].Emerg Med J,2004,21(2)：250-251.

[2]張海英,劉郁,趙敏.一氧化碳中毒大鼠腦內(nèi)腫瘤壞死因子、白介素-10的時程變化[J].中華急診醫(yī)學雜志,2002,11(4)：227-228.

[3]Yang J, Zhao X, Zhou Q, et al.Effects of nimodipine and fructose-1,6-diphosphate on cerebral damage in carbon monoxide poisoning mice[J].Chin Med J (Engl).2003,116(12)：1911-1915.

[4]葛環(huán),高春錦,趙立明.高壓氧對一氧化碳中毒大鼠血小板CD61及多形核白細胞CD11b/CD18表達的影響[J].中華航海醫(yī)學與高氣壓醫(yī)學雜志,2002,9(2)：135-138.

[5]劉建東,唐汝愚.地塞米松抑制白細胞功能防治大鼠腦缺血性損傷研究[J].西南國防醫(yī)藥,1995,5(1)：6-9.