依托泊苷自乳化膠囊的體外溶出度評價

陳曉梅

（安徽環球藥業股份有限公司，安徽 蚌埠 233010）

依托泊苷（etoposide）為鬼臼毒素（podophyllotoxin）的糖代謝產物，屬細胞周期特異性抗腫瘤藥物，主要用于治療小細胞肺癌、淋巴癌等[1]。目前主要有片劑、膠囊、注射劑等劑型供臨床使用，這些劑型在胃腸道溶出度較差，生物利用度不高，制成自乳化微乳制劑可提高其溶出度，有助于藥物的吸收，且有望解決臨床口服制劑存在的因溶解吸收不同而導致的個體差異較大的問題[2]。本文研究測定依托泊苷自乳化膠囊的含量和體外溶出度，以便更好的研究其體內給藥情況。

1 儀器與試藥

島津高效液相色譜儀，色譜柱：VP-ODS色譜柱（150mm×4.6mm，5μm），CBM-102色譜工作站。依托泊苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號100388-200701）；依托泊苷（江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，批號：070502）；依托泊苷自乳化膠囊：浙江瑞達藥業有限公司杭州賽利藥物研究所制備（批號：081009，081025，081106，規格：25mg/粒）；進口依托泊苷膠囊（參比制劑，日本化藥株式會社，規格25mg/粒，批號：RH0312）。

2 實驗方法

2.1 依托泊苷自乳化膠囊的制備

經預試驗[3]，以自乳化時間和乳化粒徑為指標，以表面活性劑吐溫80、助表面活性劑丙二醇與油相硬脂酸作為研究的3 因素，每因素設計3水平，即3×3析因設計方案，按照L9（34）正交設計表試驗。最終確定處方為：1g/粒膠囊中依次加入25mg依托泊苷原料藥和10%苯甲醇、2%枸櫞酸、13%吐溫80、10%丙二醇、62.5%油相硬脂酸，混勻，經含量測定合格后裝入膠囊，制備成25mg/粒的托泊苷自乳化膠囊。

2.2 樣品測定

2.2.1 樣品的制備

對照品溶液的制備：精密稱取依托泊苷對照品2.51mg，置10mL容量瓶中加甲醇定容，制得251μg·mL-1的對照品貯備液。精密量取貯備液1mL置10mL容量瓶中，用流動相稀釋，定容，即得。

供試品溶液的制備：精密稱定依托泊苷膠囊內含物1.0g，置10mL容量瓶中，加甲醇8mL，超聲10min，放至室溫，加甲醇至刻度，精密量取上述溶液1mL置100mL容量瓶中，加流動相定容，制得供試品溶液。

2.2.2 色譜條件

日本島津高效液相色譜儀（LC-10ATVP、SPD-10AVP、CBM-102色譜工作站），VP-ODS色譜柱（150mm×4.6mm，5μm）；流動相甲醇-水（70∶30）；檢測波長：284nm；流速：1.0mL/min；柱溫：室溫；進樣量：20μL[4]。取對照品溶液、供試品溶液和空白溶液分別進樣，記錄色譜圖，見圖1。由圖1可見，依托泊苷與其他成分分離完全，專屬性好。

2.2.3 線性關系考察

分別精密量取對照品貯備液0.1、0.5、1、1.5、2mL各置25mL容量瓶中，加流動相至刻度，制成梯度濃度的依托泊苷對照品溶液，依次測定。以對照品溶液濃度（C）為橫坐標，峰面積（A）為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為A=19682C-6846 （R=0.9998）。表明依托泊苷在1～20 μg/mL范圍內具有良好的線性關系。

2.2.4 精密度、重現性和穩定性試驗

取對照品溶液，按2.2.2條件連續進樣測定10次，計算得依托泊苷峰面積的相對標準差（RSD）為0.7%（n＝10）。精密稱取依托泊苷膠囊內容物0.5、1.0、1.5g，各3份，各置50mL容量瓶中，按2.2.1配制方法制備，分別進樣測定，計算得依托泊苷的平均含量為98.6%，RSD為0.8%（n＝9）。取同一濃度供試品溶液，分別于0、1、2、4、6、8、10和12h進樣測定，計算得依托泊苷的平均含量為98.2%，RSD為0.56%（n＝8），結果表明供試品溶液在12h內穩定。

2.2.5 加樣回收率試驗

取依托泊苷對照品20、25、30mg，各3份，置50mL容量瓶中，加入適量空白微乳，超聲溶解10min，放冷至室溫，加空白溶液定容，得待測溶液。按2.2.1配制方法處理，進樣測定，計算得依托泊苷平均回收率為99.8%，RSD為0.9%（n＝9）。

2.2.6 樣品含量測定

取供試品內容物約1.0g，精密稱定，按“2.2.1”項下供試品溶液方法處理，精密量取續濾液20μL，進液相，計算含量。結果見表1。

表1 樣品含量測定結果

2.3 釋放度的測定

測定方法：照中國藥典2005 年版溶出度測定法第二法（槳法），以水900mL為溶出介質，轉速200r/min，37℃，依法操作。分別于5、10、20、30、40min 取溶出液10mL（補充同體積、同溫介質），0.45μm 濾膜濾過。取續濾液用高效液相色譜法（HPLC）測定，計算溶出度。分別測定供試制劑和參比制劑在各取樣點的溶出度，溶出曲線見圖2。

3 結 果

3.1 樣品含量測定

圖1 專屬性HPLC譜圖

圖2 依托泊苷膠囊釋藥曲線

三批樣品的含量測定結果，含量占標示量的百分比分別為97.8%、97.5%和99.9%。符合藥典有關膠囊劑的要求，見表 1。

3.2 體外溶出度結果

供試制劑在20min時釋藥完全，而參比制劑較供試制劑慢10min左右釋藥完全。可能是由于乳化劑的加入增加了依托泊苷的溶解性，使得依托泊苷更多更快的進入釋放溶液中，見圖 2。

4 討 論

藥物自乳化工藝是一種現代化的制藥技術，國外研究不多，國內也正起步，現在上市的藥品僅有環孢素軟膠囊等品種。自乳化釋藥系統作為一種非常有前景的新劑型，對那些水中不穩定，水溶性差，生物利用度又低的藥物意義重大，具有很大的經濟和社會效益。

依托泊苷自乳化膠囊在水溶液，使藥物自乳化形成乳劑，使得很好的分散在水溶液中。而且，乳劑的形成，較大程度增加了依托泊苷的溶出度，有利于提高藥物生物利用度。

[1]Aisner J,Lee EJ.Etoposide.Current and future status[J].Cancer,1991,67(1 Suppl)：215-219.

[2]袁開紅,曹德善,李萌等.依托泊苷軟膠囊的研制及人體生物利用度的研究[J].中國醫藥工業雜志,2004,35(5)：279-281.

[3]張桂俠,杜青.依托泊苷自微乳的處方研究 [J].河北醫科大學學報,2008,32(3)：401-403.

[4]尹東東,王杏林,趙廣榮等.依托泊苷微乳的HPLC測定[J].中國醫藥工業雜志,2007,38(2)：121-122.