高效液相色譜法測(cè)定藿補(bǔ)膠囊中淫羊藿苷含量

張 輝* 王鳳林*

（1 華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司，廣東 深圳 518029；2 武警總醫(yī)院，北京 100039）

藿補(bǔ)膠囊由淫羊藿、補(bǔ)骨脂、蛇床子、川芎、菟絲子、黃芪等藥組成，具有補(bǔ)益肝腎、活血養(yǎng)血的功效，用于肝腎不足，血瘀氣滯，眩暈耳鳴，腰膝酸軟。淫羊藿為該處方中的君藥，淫羊藿苷為淫羊藿的主要有效成分[1]，本文建立一種高效液相法測(cè)定藿補(bǔ)膠囊中淫羊藿苷的含量，此法操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，重現(xiàn)性好。

1 儀器與藥品

SSI 高效液相色譜儀（美國(guó)SSI公司；SSI P4000泵；SSI 500 UV/Vis 檢測(cè)器；HW-2000色譜工作站），淫羊藿苷對(duì)照品（含量測(cè)定用，批號(hào)：110737-200415，中國(guó)藥品生物制品檢定所），藿補(bǔ)膠囊（批號(hào)：100401、100402、100403），乙腈為色譜純，水為二次蒸餾水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱： Phenomenex ODS（5μm，250mm×4.6mm ID），流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸（27∶73），流速：1.0mL /min，檢測(cè)波長(zhǎng)：270nm，柱溫：室溫，進(jìn)樣量：10μL，理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。在此條件下對(duì)照品、供試品在約13 min處有淫羊藿苷色譜峰（圖1、2）。

圖1 對(duì)照品的HPLC色譜

圖2 樣品的HPLC色譜

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取適量淫羊藿苷對(duì)照品，加甲醇制成0.1mg/ml淫羊藿苷對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品20粒內(nèi)容物研細(xì)，取約0.3g，精密稱(chēng)定，置具塞三角瓶中，精密加入70%乙醇25mL，稱(chēng)定重量，超聲處理30min（功率200W，頻率：59kHz；），放冷，再稱(chēng)定重量，用70%乙醇補(bǔ)足重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性對(duì)照試驗(yàn)

按照供試品制備方法制備淫羊藿陰性樣品，同法制備不含淫羊藿的陰性對(duì)照溶液，按測(cè)定方法的色譜條件進(jìn)樣，實(shí)驗(yàn)結(jié)果在淫羊藿苷峰相應(yīng)的位置上，無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明陰性對(duì)照對(duì)淫羊藿的測(cè)定無(wú)干擾，結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 陰性對(duì)照的HPLC色譜

2.5 線性關(guān)系的考察

精密稱(chēng)取淫羊藿苷對(duì)照品8.10mg，加甲醇制成每1ml含淫羊藿苷0.162mg的溶液。取此對(duì)照品溶液分別稀釋成以下濃度：16.2、32.4、64.8、97.2、129.6、162μg/mL，按色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，進(jìn)行線性回歸處理，回歸方程為Y=7.52+18.79X，r=0.99999（n=6），淫羊藿苷對(duì)照品在0.162～1.62μg 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn)

吸取同一供試溶液（批號(hào)100401），連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定供試品溶液中淫羊藿苷峰面積值，結(jié)果RSD為1.62%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

吸取供試品溶液（批號(hào)100401），分別在0、1、2、4、8、12h時(shí)間內(nèi)注入液相色譜儀中，測(cè)定淫羊藿苷峰面積，結(jié)果表明，本品在12 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.82%。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品（批號(hào)100401）6份，分別按此含量測(cè)定方法，進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果測(cè)得淫羊藿苷平均含量為4.39mg/粒，RSD為1.94%。

2.9 回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)量已知含量的本品粉末約0.2g，6份，分別置具塞三角瓶中，各精密加入淫羊藿苷對(duì)照品溶液（0.1118mg/mL）10mL，按供試品處理方法和色譜條件，制備加樣回收供試品溶液并注入高效液相色譜儀測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果

2.10 樣品測(cè)定

取3批樣品，按上述方法測(cè)定淫羊藿苷的含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討 論

3.1 淫羊藿苷為苷類(lèi)化合物，極性較大，參考文獻(xiàn)[2]中的提取溶劑，選取30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇進(jìn)行含量測(cè)定提取溶劑考察，結(jié)果標(biāo)明這3種溶劑的提取效果相近，而70%乙醇提出其他物質(zhì)最少，因此確定70%乙醇；也對(duì)70%乙醇用量和提取時(shí)間進(jìn)行了考察，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定70%乙醇最佳溶劑用量和提取時(shí)間。

3.2 參照文獻(xiàn)[2]的色譜條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，由于本制劑中藥味較多，雜質(zhì)干擾較大，供試品溶液中淫羊藿苷峰分離較差，加入磷酸調(diào)酸后，分離效果較好，因此收入正文。

[1]鄭虎占.中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用(第五卷)[M].北京：學(xué)苑出版社,1998：225.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010：306-308.