大黃黃連瀉心湯、理中丸對水浸應激型、幽門結扎型胃潰瘍寒、熱證模型大鼠血清COR含量的影響

李冀，李勝志，柴劍波，畢珺輝，胡曉陽

(黑龍江中醫藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

中醫證候動物模型的研究，一直是中醫藥現代研究的焦點，也是難點，目前實驗性消化性潰瘍的動物模型造模方法比較豐富，但不能充分體現中醫辨治的特點，使得現代疾病與中醫證的緊密關系不能很好得到體現，本研究在“病證結合”理論基礎上，將消化性潰瘍病與中醫寒、熱證相結合，建立實驗性胃潰瘍寒、熱證型動物模型，實加經典寒、熱方劑干預，通過對血清皮質醇含量的測定，揭示胃潰瘍寒、熱證證候實質及方證相應規律。

1 實驗材料及藥物制備

1.1 實驗動物 清潔級Wistar大鼠，黑龍江中醫藥大學藥物安全性評價中心(GLP)，合格證號SCXK(京)2007－0001。

1.2 實驗用藥 熱因素:將辣椒粉過120目篩，溶入60%無水乙醇中，配制成8%干辣椒粉的乙醇混懸液。寒因素:氫氧化鈉(NaOH)，稱取6g NaOH，溶入500ml雙蒸水中，配成0.3mol/L濃度。冰水:冷凍保存，使用時提前取出溶化。大黃黃連瀉心湯、理中丸:按原方藥量及比例制備，其中，大黃黃連瀉心湯濃縮至每毫升含0.5g生藥量，理中丸濃縮至每毫升含1g生藥量的液體，冰箱存儲備用。

1.3 實驗試劑 鹽酸:上海化學試劑采購供應站。乙醚(分析純級):上海化學試劑采購供應站。NaOH:天津市博大化工有限公司。甲醛(分析純級):天津市博大化工有限公司。冰乙酸:上海化學試劑采購供應站生產。COR檢測試劑盒:美國RD公司。

2 實驗方法

2.1 分組 各取用Wistar大鼠，體質量180～220g，雌雄各半，給予標準的大鼠食物和水，實驗前大鼠在實驗室內習服7天。幽門結扎型取140只大鼠按體重隨機分為6組:即寒假組(寒因素+假手術)30只、熱假組(熱因素+假手術)30只、寒幽組(寒因素+幽門結扎)30只、熱幽組(熱因素+幽門結扎)30只、模幽Ⅰ組(幽門結扎)10只、空白對照組10只。水浸應激模型取140只大鼠按體重隨機分為6組:即單寒組(單純寒因素)30、只單熱組(單純熱因素)30只、寒水組(寒因素+水浸應激)30只、熱水組(熱因素+水浸應激)30只、單水組(水浸應激模型)10只、空白對照組10只。

2.2 造模方法

2.2.1 胃寒、熱模型［1］

2.2.2 束縛水浸應激型胃潰瘍模型［3－4］

2.2.3 幽門結扎型胃潰瘍模型［5］

2.2.4 假手術方法［4］

2.3 實驗步驟

2.3.1 水浸應激型胃潰瘍寒、熱證模型的建立及寒、熱方劑干預實驗

將各組動物分別按上述胃寒、熱證造模方法，進行寒、熱因素灌胃，給予相應造模劑;模型組及空白對照組則給予等體積生理鹽水，連續7d。寒、熱因素造模后，將受試大鼠(除空白對照組、模水組)在各自組別內按體重隨機分成3組:即熱水、熱水大、熱水理;寒水、寒水大、寒水理;單熱、單熱大、單熱理;單寒、單寒大、單寒理。按組別，各給藥組按組別分別給予相應受試方劑，大黃黃連瀉心湯劑量1.8g/Kg體重，理中丸劑量3.6g/Kg體重;日2次，連續4d。水應激法造模前30min再給藥1次。其它組給予等體積生理鹽水，連續4d;末次給藥后將受試大鼠禁食不禁水30h(注意勿使動物食入糞便和墊料等雜物，以免影響造模結果)。水浸應激型胃潰瘍造模開始前30分鐘，再給藥1次。

2.3.2 幽門結扎型胃潰瘍寒、熱證模型的建立及寒、熱方劑干預實驗

寒、熱因素造模方法同上。造模后將受試大鼠(除空白對照組、模幽組)在各自組別內按體重隨機分成3組:熱幽、熱幽大、熱幽理;寒幽組、寒幽大、寒幽理;熱假、熱假大、熱假理;寒假組、寒假大、寒假理。按組別，各給藥組按組別分別給予相應受試方劑，方法同上。末次給藥后將受試大鼠禁食不禁水30h，將相應組別分別行幽門結扎術及假手術，并于術前2h灌胃相應藥物1次，術中由十二指腸分別給予干預藥物。

2.4 實驗取材 分別于水浸應激7h后，幽門結扎術后18h，取血，分離血清待測。

3 統計方法

所有數據通過Spss13.0軟件包用單因素方差分析(one－way ANOVA)LSD或S－N－K法進行兩兩比較檢驗，用(±s)表示結果。

4 實驗結果

4.1 寒、熱方劑對水浸應激型胃潰瘍寒、熱證模型大鼠血清COR含量的影響

表1 水浸應激型胃潰瘍寒、熱證模型間大鼠血清COR的含量變化(±s)

表1 水浸應激型胃潰瘍寒、熱證模型間大鼠血清COR的含量變化(±s)

注:與空白組比較*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與熱水組比較△P＜0.05;與單熱組比較☆☆P＜0.01。

組別 n COR(ng/ml)10 31.33 ±10.46單水 10 44.28 ±13.79＊△寒水 8 41.39 ±8.99＊△單寒 10 34.29 ±8.77☆☆熱水 9 60.61 ±16.70＊＊單熱 10 47.93 ±8.68空白＊＊△

由表1可知:除單寒組外各模型組血清COR的含量均明顯高于空白對照組，具有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)，以熱水組含量升高顯著。熱水組與單水、單熱組比較有顯著性差異(P＜0.05);熱水與寒水比較升高明顯，有顯著性差異(P＜0.05);單熱與單寒組比較升高明顯，具有顯著性差異(P＜0.01)。

表2 寒、熱方劑對水浸應激型胃潰瘍寒證大鼠血清COR含量的影響(±s)

表2 寒、熱方劑對水浸應激型胃潰瘍寒證大鼠血清COR含量的影響(±s)

組別 n COR(ng/ml)41.39 ±8.99寒水大 7 40.28 ±11.55寒水理 9 33.75 ±8.97單寒 10 34.29 ±8.77單寒大 8 36.08 ±7.94單寒理寒水8 9 37.89 ±10.02

表3 寒、熱方劑對水浸應激型胃潰瘍熱證大鼠血清COR含量的影響(±s)

表3 寒、熱方劑對水浸應激型胃潰瘍熱證大鼠血清COR含量的影響(±s)

注:與單熱組比較，☆P ＜0.05;與熱水組比較，△△P ＜0.01。

組別 n COR(ng/ml)熱水9 51.15 ±16.68 60.61 ±16.70熱水大 8 35.97 ±10.33△△熱水理 8 50.27 ±12.26單熱 10 47.93 ±8.68單熱大 8 36.68 ±12.68☆單熱理8

從表2、3可知，熱水大、單熱大與熱水、單熱組比較血清COR的含量明顯降低，有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。

4.2 寒、熱方劑對幽門結扎型胃潰瘍寒、熱證模型大鼠血清COR含量的影響

表4 幽門結扎型胃潰瘍寒、熱證模型間大鼠血清COR的含量變化(±s)

表4 幽門結扎型胃潰瘍寒、熱證模型間大鼠血清COR的含量變化(±s)

注:與空白組比較*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01;與熱幽組比較△P ＜0.05，△△P ＜0.01。

組別 n COR(ng/ml)10 30.50 ±7.84 10 33.59 ±7.97模幽 10 42.81 ±8.39＊△△寒幽 10 42.93 ±10.25*熱幽 10 57.33 ±10.78＊＊單熱假 10 44.73 ±9.42＊△單寒假空白

由表4可知:除單寒假組外各模型組血清COR的含量均明顯高于空白對照組，具有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)，以熱幽組含量升高顯著。熱幽與模幽、熱假組比較血清COR的含量明顯升高，具有顯著性差異(P ＜0.05或P ＜0.01)。

表5 寒、熱方劑對幽門結扎型胃潰瘍寒證大鼠血清COR含量的影響(±s)

表5 寒、熱方劑對幽門結扎型胃潰瘍寒證大鼠血清COR含量的影響(±s)

組別 n COR(ng/ml)10 42.93 ±10.25寒幽理 10 44.22 ±12.23寒幽大 10 33.60 ±9.62單寒假 10 30.50 ±7.84寒假理 10 32.54 ±9.68寒假大寒幽10 34.84 ±9.05

表6 寒、熱方劑對幽門結扎型胃潰瘍熱證大鼠血清COR含量的影響(±s)

表6 寒、熱方劑對幽門結扎型胃潰瘍熱證大鼠血清COR含量的影響(±s)

注:與熱幽組比較，△△P＜0.01;與熱假組比較，★P ＜0.05。

組別 n COR(ng/ml)10 57.33 ±10.78熱幽理 10 59.11 ±8.85熱幽大 10 40.61 ±7.76△△單熱假 10 44.73 ±9.42熱假理 10 46.31 ±13.22熱假大 10 34.41 ±11.45熱幽★

從表5、6可知:熱幽大、熱假大與熱幽、熱假模型組比較血清COR的含量明顯降低，具有顯著性差異(P ＜0.05 或 P ＜0.01)。

5 討論

在應激反應中，腎上腺被認為是一個關鍵性的器官。機體受到刺激時，都會引起垂體的ACTH分泌增多，隨之腎上腺皮質功能增強，分泌出大量的皮質醇，從而提高機體的抵抗能力，即應激反應。然而，過強的刺激又會出現負面的并發癥，最常見的是潰瘍的發生。近年來，有研究發現皮質醇水平與潰瘍有一定的關系，應激狀態能產生潰瘍，潰瘍病變的程度與皮質醇水平明顯相關，預先給予抑制皮質醇產生的藥物可防止潰瘍的發生。在應激時血漿皮質醇分泌增多是最重要的一個反應，具有重要的生理意義，對機體抵抗有害刺激起著極為重要的作用。

實驗結果表明，本研究所建立的水浸應激型、幽門結扎型胃潰瘍寒、熱證病證結合動物模型具有可行性。束縛水浸及幽門結扎皆屬于一種應激反應，故單純證模型皆見COR含量增加，施加的熱因素對模型的COR含量體現出明顯的影響，故血清COR的含量在熱性潰瘍模型中升高最為顯著，發揮了損傷作用，可作為臨床潰瘍熱證的微觀指征。其作用機制可能為熱證造模后中樞神經系統通過激活垂體－腎上腺軸導致皮質激素分泌增加，破壞胃黏膜保護屏障，從而加速潰瘍的發生。經寒性方劑大黃黃連瀉心湯治療后，各熱性模型血清COR的含量均有明顯降低，但對寒性模型COR的含量無影響?？芍?，寒性方劑大黃黃連瀉心湯預防水浸應激型胃潰瘍熱證、幽門結扎型胃潰瘍熱證的作用機制可能與抑制皮質醇分泌，提高機體抗應激能力有關。說明在潰瘍病的病理狀態下，寒性方劑通過“方證相應”降低熱證模型大鼠血清COR的含量而達到預防潰瘍的目的。

［1］ 李冀，謝田，畢珺輝，等.大黃黃連瀉心湯、理中丸對幽門結扎型、醋酸涂抹型胃潰瘍寒熱證模型大鼠胃組織PGE2含量的影響［J］.中醫藥信息，2011，28(2):27 －31.

［2］ 畢珺輝，李冀，謝田，等.大黃黃連瀉心湯、理中丸對四種模型大鼠血清PAF含量的影響［J］.中醫藥學報，2011，39(2):51－55.

［3］ 李冀，謝田，柴劍波，等.大黃黃連瀉心湯、理中丸對幽門結扎型、醋酸涂抹型胃潰瘍寒熱證模型大鼠血清NT含量的影響［J］.中醫藥學報，2011，39(1):38 －41.

［4］ 李冀，謝田，柴劍波，等.大黃黃連瀉心湯、理中丸對幽門結扎型、醋酸涂抹型胃潰瘍寒、熱證模型大鼠血清TXB2含量的影響［J］.中醫藥學報，2011，39(4):14 －16.

［5］ 李冀，謝田，于海，等.大黃黃連瀉心湯、理中丸對消炎痛型及水浸應激型胃潰瘍寒熱證模型大鼠胃組織EGF、TGF－a含量的影響［J］.中醫藥信息，2011，28(5):52 －55.