壯骨靈膠囊中淫羊藿苷的含量測定

李健英，王連芝

(黑龍江中醫(yī)藥大學中醫(yī)藥研究院，黑龍江 哈爾濱 150040)

淫羊藿為小檗科淫羊藿屬植物，是使用最為悠久及藥用來源種類最多的中藥之一，最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》［1］。淫羊藿性辛、甘、溫，具有補腎陽、強筋骨、祛風濕的作用。目前研究證明，淫羊藿含有多種化學成分，有豐富的藥理作用。現(xiàn)代研究認為，淫羊藿苷是主要成分，作為藥材品質(zhì)評價的指標［2］，具有激素樣作用。淫羊藿在老年性骨質(zhì)疏松癥的臨床防治中，其療效已得到肯定，對破骨細胞有直接抑制作用［3］，能直接作用于人成骨細胞，促進成骨細胞的增殖和功能，影響骨的代謝［4］。

壯骨靈膠囊(由淫羊藿、白術(shù)、熟地黃等五味中藥組成)有補腎壯骨、健脾行氣、活血止痛功效，用于治療骨質(zhì)疏松癥。本研究采用高效液相色譜法，對壯骨靈膠囊中淫羊藿苷含量進行測定，控制藥品質(zhì)量。實驗表明，該方法操作簡便、穩(wěn)定、精密度高、結(jié)果準確重現(xiàn)性好，現(xiàn)報告如下。

1 實驗材料

高效液相色譜儀(美國Waters公司:Waters2695－2998型);超純水處理器(Millipore公司);KQ一250B超聲波清洗器;電子分析天平(瑞士 METTLER－TOLEPO公司);淫羊藿苷對照品(中國藥品生物研究所提供，批號110737－200414);壯骨靈膠囊(黑龍江中醫(yī)大學中醫(yī)藥研究院制備，批號201026);色譜純乙腈(天津康巢科技開發(fā)有限公司，批號20090609);水為超純水，甲醇、乙酸為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱 Diamonsil C18柱(5μm，250mm ×4.6mm);流動相:乙睛 － 水(30∶70);檢測波長:270nm;柱溫:40℃;流速:1.0mL/min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 待測樣品溶液 壯骨靈膠囊內(nèi)容物粉末0.5g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加低濃度乙醇20mL，稱定重量，超聲處理30min，再稱定重量，用低劑量乙醇補足減量，搖勻、過濾、取續(xù)濾液，即待測樣品溶液。

2.2.2 對照品溶液 精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含10μg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.3 陰性對照溶液 取除淫羊藿外的其他味藥材，按壯骨靈膠囊制備方法制備陰性制劑，取陰性制劑0.5g按(2.2.1)制備方法得陰性對照溶液。

2.3 系統(tǒng)適應性試驗 精密吸取淫羊藿苷溶液15μl，注入高效液相色譜儀，理論板數(shù)淫羊藿苷峰不低于2 500。淫羊藿苷對照品保留時間為=10.715min，色譜峰峰面積積分值為582 588，確定此色譜峰為淫羊藿苷對照品的色譜峰，色譜圖見圖1。

圖1 淫羊藿苷對照品的色譜圖

2.4 線性關系試驗 按色譜條件分別取對照品溶液，用0.45μm 的微孔濾膜過濾，精密吸取 2.0、4.0、6.0、8.0、10.0μl對照品溶液，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖。以進樣含量為橫坐標，色譜峰峰面積為縱坐標繪制標準曲線見圖2。各濃度相應的峰面積經(jīng)統(tǒng)計處理，求得回歸方程為Y=3 903 265X－2 442.1，相關系數(shù) r=0.999 9，結(jié)果表明，淫羊藿苷在 0.1～0.18μg的范圍內(nèi)線性關系良好，實驗數(shù)據(jù)見表1。

圖2 線性關系標準曲線圖

2.5 空白干擾實驗 精密吸取供試品(壯骨靈膠囊)溶液、陰性對照溶液，對照品溶液，在2.1色譜條件進樣，壯骨靈膠囊色譜圖在10.261min處出現(xiàn)色譜峰，見圖3，陰性溶液色譜圖見圖4，由圖可知陰性溶液、壯骨靈溶液含量測定無干擾。

表1 標準曲線測定結(jié)果

圖3 壯骨靈膠囊中淫羊藿苷色譜圖

圖4 空白溶液色譜圖

2.6 精密度實驗 精密吸取濃度為10μg/mL的淫羊藿苷對照品溶液15μL，連續(xù)5次注入同一臺液相色譜儀中，考察精密度，以峰面積計算 RSD，淫羊藿苷RSD=0.4%。說明精密度良好，測定結(jié)果可靠。

2.7 穩(wěn)定性實驗 精密稱取供試品，按2.2.1項下方法制備供試品溶液，于 0、2、4、6、8、10h 分別進樣按設定時間測定，計算淫羊藿苷含量，平均含量0.284 3(mg/g)，RSD=1.7%，表明樣品在制備后 10小時內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.8 重現(xiàn)性實驗 取同一批樣品5份，按2.2.1項下方法制備供試品溶液，測定。計算淫羊藿苷含量，平均含量0.292 5(mg/g)，RSD=1.6%，表明該方法重現(xiàn)性好。

2.9 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品6份，各約0.2g，精密稱定，分別加入濃度為10μg/mL的淫羊藿苷對照品溶液10mL，即0.1mg，混勻后，按2.2.1項下方法處理，進樣，測定，計算淫羊藿苷含量。實驗結(jié)果表明，該方法回收率較高，測定結(jié)果可靠，平均回收率102.48%，RSD=1.35%，實驗結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率實驗

2.10 樣品含量測定 取三批供試品(批號20101026、201028、20101108)，每批2 份，每份約0.5g，精密稱定，按2.2.1項下方法處理，進樣20μL，測定峰面積。取 10μg/mL的淫羊藿苷對照品溶液進樣15μL，峰面積積分值為586 896.5，采用外標一點法計算含量，結(jié)果表明，3批供試品中，淫羊藿苷含量平均值為0.287 8mg/g，按降幅10%為本品含量限定值，則其含量應不低于0.26mg/g，按此規(guī)定上述測得3批供試品溶液均合格，結(jié)果見表3。

表3 樣品含量測定

3 討論

參照《中國藥典》和文獻資料，選擇淫羊藿苷檢測波長為 270nm，流動相:乙睛 －水(30∶70)，柱溫:40℃，流速:1.0mL/min，此方法樣品處理簡單操作方便，重現(xiàn)性好，精度高，可用于壯骨靈膠囊質(zhì)量控制。

超聲技術(shù)在中藥有效成分提取、分離與制備工藝中的應用，大大提高了提取率，縮短了提取時間。

采用不同提取溶劑實驗，如甲醇、70%乙醇、50%乙醇等，結(jié)果以低濃度乙醇超聲提取 2次，每次30min，方法簡單，雜質(zhì)干擾少，提取比較完全。

［1］ 蔡德，佘白蓉，楊綺華，等.淫羊藿總黃酮提取及其含量測定［J］.廣東藥學院學報，2005，21(1):75 －76.

［2］ 謝娟平，孫文基.淫羊藿屬植物化學成分及藥理研究進展［J］.海峽藥學，2006，18(5):17 －19.

［3］ 傅得興，高素強，張紅梅.淫羊藿及其復方防治骨質(zhì)疏松的研究進展［J］.中國中藥雜志，1999，24(4):249 －251.

［4］ 于波，楊久山，劉巖，等.淫羊藿苷對人成骨細胞的作用［J］.中醫(yī)正骨，2006，18(6):17 －18.