玻璃苣醇提取物對實驗性哮喘豚鼠平喘作用機制的研究

剛宏林，何志一，李鴻鐘，劉相輝，孫志國

(1.哈爾濱市食品藥品檢驗檢測中心，黑龍江 哈爾濱 150500;2.黑龍江中醫(yī)藥大學，黑龍江 哈爾濱 150040)

玻璃苣(Borago officinalis L.)系紫草科，玻璃苣屬植物?，F(xiàn)今國內對玻璃苣研究較少，但是國外研究已證實，玻璃苣全株提取物具催乳，消炎利腎作用，并有解表發(fā)汗的作用，玻璃苣的花、莖、葉里含有生物堿和鉀，經(jīng)常被用作鎮(zhèn)痛劑、止血藥(收斂劑)、利尿劑和潤膚劑。為了探討玻璃苣醇提取物的抗炎平喘作用及其作用機制，我們采用豚鼠復制哮喘模型，對玻璃苣醇提取物的抗哮喘作用機制進行了實驗研究。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 藥物 本實驗采用玻璃苣全株作為原料藥，由哈爾濱市藥品食品檢驗檢測中心提供。

1.1.2 儀器與試劑

磷酸組織胺(上?；菔郎噭┯邢薰?，批號090308);NO試劑盒(酶法);IFN－γ和IL－4試劑盒(酶法);地塞米松;超聲霧化吸入器;低溫離心機。

1.1.3 動物

豚鼠48只，雌雄各半，體質量200g～250g，購自黑龍江中醫(yī)藥大學動物實驗中心，使用許可證號:SCXK(黑)2003007，保持室溫20℃左右，自由采食。

1.2 實驗方法

1.2.1 分組與給藥 將48只健康SPF級豚鼠隨機分為6組，每組8只?？瞻讓φ战M不給予藥物;陽對藥組給予地塞米松1mg/kg，模型組給于等容量生理鹽水，玻璃苣醇提取物高劑量組1.05g/kg，中劑量組0.52g/kg、低劑量組0.255g/kg。灌胃給藥，每日1次，連續(xù)7天。

1.2.2 模型制備 每天各組動物均于給藥后30min，采用霧化器進行激發(fā)誘喘［1］。實驗標本獲得與處理參照前期研究內容［2］。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行分析。兩組均數(shù)比較采用t檢驗分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 玻璃苣醇提取物對豚鼠肺灌洗液中EOS計數(shù)的影響

玻璃苣醇提取物經(jīng)灌胃給藥后檢測結果分析發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，玻璃苣醇提物組能夠明顯降低EOS的含量，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05或P＜0.01)，并且呈明顯的劑量依賴性，見表1。

表1 玻璃苣醇提取物對豚鼠肺灌洗液中嗜酸性粒細胞含量(±s)

表1 玻璃苣醇提取物對豚鼠肺灌洗液中嗜酸性粒細胞含量(±s)

注:與模型組比較，*P ＜0.05，＊＊P＜0.01。

組別 n 劑量(g/kg) EOS(40倍，5個視野)空白組 8 － 0.88±0.64＊＊模型組 8 等容量生理鹽水 3.25±2.87地塞米松組 8 1mg 3.00 ±2.73*高劑量組 8 1.050 1.38 ±0.92*中劑量組 8 0.525 1.50 ±1.19*低劑量組 8 0.255 1.75 ±1.28*

2.2 玻璃苣醇提取物對豚鼠肺灌洗液中NO含量的影響

經(jīng)灌胃給藥的玻璃苣醇提物的各劑量組明顯降低肺灌洗液上清中NO含量，與模型組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05或P＜0.01)，并且呈明顯的劑量依賴性，見表2。

表2 玻璃苣醇提取物對豚鼠肺灌洗液上清中NO含量(±s)

表2 玻璃苣醇提取物對豚鼠肺灌洗液上清中NO含量(±s)

注:與模型組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

組別 n 劑量(g/kg) NO(pg/mL)空白組 8 － 22.16±14.31＊＊模型組 8 等容量生理鹽水 37.74±22.35地塞米松組 8 1mg 21.17 ± －12.87*高劑量組 8 1.050 20.669 ±4.69*中劑量組 8 0.525 21.28 ±8.14*低劑量組 8 0.255 21.49 ±4.85*

2.3 玻璃苣醇提取物對豚鼠肺灌洗液中IFN－γ和IL－4含量的影響

模型組的IL－4含量明顯增加，而IFN－γ的含量顯著降低，地塞米松陽性對照組能夠顯著降低IL－4含量水平，同時提高IFN－γ含量水平。玻璃苣醇提物不同劑量組均能夠降低IL－4含量，亦能夠提高IFN－γ含量，且其作用療效優(yōu)于陽性對照組，見表3。

表3 玻璃苣醇提取物對豚鼠肺泡灌洗液中IFN－γ和IL－4含量(±s)

表3 玻璃苣醇提取物對豚鼠肺泡灌洗液中IFN－γ和IL－4含量(±s)

注:與模型組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

組別 n 劑量(g/kg)IFN－γ(pg/ml)IL－4(pg/ml)空白組 8 － 194.49±113.68*175.74±115.32*模型組 8 等容量生理鹽水 92.41±73.15 245.99±187.51地塞米松組 8 1mg 146.38 ±133.79*170.65 ±72.17＊＊高劑量組 8 1.050 160.96 ±94.97* 62.93 ±34.26＊＊中劑量組 8 0.525 143.50 ±40.62* 65.81 ±49.49＊＊低劑量組 8 0.255 134.98 ±44.53*110.53 ±62.05*

3 討論

哮喘是一種慢性氣道炎癥疾病，由多種炎癥介質、炎癥細胞和細胞因子參與的一種氣道慢性炎癥性疾病。在外界激發(fā)因子的反復作用下，引起氣道黏膜水腫，微血管通透性改變，氣道分泌物增加，支氣管平滑肌收縮，基底膜暴露等一系列病理改變。哮喘與多種炎癥細胞介導有關系，包括EOS為主要效應細胞中嗜酸性粒細胞(EOS)在支氣管哮喘發(fā)生發(fā)展中是處于核心地位的效應細胞，哮喘其炎癥特征為嗜酸性粒細胞(EOS)在支氣管組織內聚集和活化導致的可逆性氣道阻塞、氣道變應性炎癥等［3］。

大量研究表明，Th亞群中Th1和Th2之間存在著交互調節(jié)的關系，Th1型和Th2型細胞亞群失衡，(Th2型優(yōu)勢應答)，是哮喘病理過程形成的始動因素和維持因素，哮喘的發(fā)作主要表現(xiàn)為Th2細胞數(shù)量的增多和功能亢進，導致氣道局部嗜酸性粒細胞性慢性炎癥，氣道反應性增高而致哮喘。Thl主要合成釋放IFN－γ、IL－2等細胞因子;Th2則主要生成IL－4、IL－5等。IFN－γ和IL－4是Thl和Th2類細胞因子中具有代表性的一對，IFN－γ/IL－4值的失衡被認為是哮喘的發(fā)病機制之一［4］。一氧化氮是近年來所發(fā)現(xiàn)的一種具有多種生物活性的重要信息分子，參與多種生理病理及過程，其在哮喘發(fā)病中的作用引起人們極大的興趣，研究發(fā)現(xiàn)一定濃度的NO可以舒張支氣管平滑肌，緩解哮喘癥狀;但當NO過度增高時可誘發(fā)氣道黏膜水腫和阻塞。

本研究結果顯示，哮喘模型組與正常對照組相比，哮喘模型組BALF中IFN－γ水平降低，NO、EOS和IL－4水平升高。經(jīng)藥物干預后，玻璃苣醇提取物能有效升高哮喘豚鼠BALF中IFN－γ水平，降低IL－4水平，減少Th2型細胞因子的合成，進而抑制過度亢進的Th2型優(yōu)勢應答，揭示玻璃苣醇提取物治療哮喘可能與糾正IFN－γ與IL－4動態(tài)平衡有關。同時玻璃苣醇提取物能夠減少EOS在肺部的聚集和降低NO濃度，從而減輕了氣道EOS浸潤性，使引喘潛伏期延長，減輕哮喘支氣管粘膜的水中和阻塞，緩解支氣管哮喘的癥狀，這可能是玻璃苣治療哮喘及其作用機制之一。

［1］ 梁成結，陳江華.建立豚鼠哮喘模型的一種新方法［J］.熱帶醫(yī)學雜志，2005，5(3):291 －296.

［2］ 剛宏林，何志一，劉相輝，等.玻璃苣醇提取物對實驗性哮喘豚鼠平喘作用機制的實驗研究［C］.中國藥學大會暨第十屆中國藥師周論文集，2010.

［3］ 李寅超，趙宜紅.辛夷揮發(fā)油對哮喘豚鼠嗜酸性粒細胞影響的實驗研究［J］.現(xiàn)代預防醫(yī)學，2006，33(8):1338 －1341.

［4］ 原愛紅，薛漢榮 洪廣祥，等.益氣溫陽護衛(wèi)湯對哮喘豚鼠BALF Thl、Th2 細胞因子產生及調節(jié)的影響［J］.中國醫(yī)藥學報，2002，17(3):152－154.