清目膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

70600 蘭州軍區(qū)臨潼療養(yǎng)院第二療養(yǎng)區(qū) 李麗史曉月王樊

710600 蘭州軍區(qū)臨潼療養(yǎng)院醫(yī)務(wù)部 仝武軍2

清目膠囊主要成分為菊花、秦皮等多種中藥。該藥為復(fù)方制劑，具有散風(fēng)清熱、平肝明目等作用[1]。

1 儀器與試藥

美國戴安(DIONEX)P860高效液相色譜儀，Kromasil5-C18(250 mm×4.6 mm)色譜柱；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)裝置(RE502型，上海亞榮生化儀器廠)；綠原酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110753-200212)；乙腈為色譜純；其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 定性鑒別

2.1.1 菊花的薄層色譜法(TLC)鑒別 取清目膠囊內(nèi)容物約2.0 g，加甲醇50 mL，置具塞試管中，超聲處理40 min，靜置1 h，濾過，進(jìn)行減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，揮去乙醇味，殘?jiān)? mL沸水，靜置，放冷，用10 mL乙醚洗滌兩次，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，加入雙蒸水定容至刻度，作為供試品溶液。另取綠原酸對照品，加乙醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。照TLC(《中國藥典》2005年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各0.5～1 μL，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-醋酸乙酯-甲醇-冰醋酸-水(2∶30∶2∶2∶4)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)(圖1)。

圖1 菊花藥材的TLC圖譜

2.1.2 秦皮甲素、秦皮乙素的TLC鑒別[2]取清目膠囊內(nèi)容物約2.0 g，加甲醇50 mL，置具塞試管中，超聲處理40 min，靜置1 h，濾過，進(jìn)行減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，揮去乙醇味，殘?jiān)? mL沸水，靜置，放冷，用10 mL乙醚洗滌兩次，轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶中，加入雙蒸水定容至刻度，作為供試品溶液。另取秦皮甲素對照品，秦皮乙素對照品，加甲醇制成每1 mL各含2 mg的混合溶液，作為對照品溶液。照TLC(《中國藥典》2005年版一部附錄Ⅵ B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF 254薄層板上。以三氯甲烷-甲醇-甲酸(6∶1∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(254 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。噴以三氯化鐵-鐵氰化鉀試液(1∶1)的混合溶液，斑點(diǎn)變?yōu)樯钏{(lán)色(圖2)。

2.2 綠原酸的含量測定[3-4]

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱為Kromasi15-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相為乙腈∶0.01 mol/L磷酸溶液(用三乙胺調(diào)節(jié)pH=4.5)=8∶92，流速為0.8 mL/min，檢測波長為327 nm，進(jìn)樣量為20 μL。此條件下綠原酸峰的理論塔板數(shù)不低于5 000，綠原酸與其他組分的分離度大于1.5。色譜圖(圖3～4)。

圖3 綠原酸對照品的HPLC圖譜

圖4 清目膠囊中樣品中綠原酸的HPLC圖譜

2.2.2 供試品溶液的制備 取清目膠囊內(nèi)容物約2.5 g精密稱定，加甲醇50 mL，超聲提取40 min，過濾，取濾液濃縮至干，加沸水20 mL溶解，用乙醚洗滌2次，25 mL/次，取水層，加雙蒸水定容至25 mL量瓶。以0.45 μm微孔濾膜過濾，得供試品溶液。

2.2.3 對照品溶液制備 精密稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品12.5 mg，置25 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，制成0.500 mg/mL綠原酸對照品溶液。

2.2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取綠原酸對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL置10 mL容量瓶中，加50%甲醇定容，分別得到濃度為0.050、0.100、0.150、0.200、0.250、0.300 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用HPLC法測定。以峰面積積分值(Y)對綠原酸檢測濃度(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=1 205.8X-0.152 9(r=0.999 3)，結(jié)果表明，綠原酸檢測濃度在0.050～0.300 mg/mL的范圍內(nèi)與峰面積分值呈良好線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取綠原酸對照品溶液20 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，按上述色譜條件測定。結(jié)果，RSD%=0.399%(n=5)，表明儀器精密度良好。

2.2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批號的清目膠囊適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制得供試品溶液，按上述色譜條件測定。結(jié)果，RSD%=1.01%(n=5)，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.2.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的清目膠囊內(nèi)容物適量，置于100 mL具塞錐形瓶中，分別精密加入低、中、高不同濃度的綠原酸對照品溶液，按“2.2.2”中所用方法制得供試品溶液，按上述色譜條件分別測定峰面積。結(jié)果，平均回收率為103%，RSD%=1.02(n=5)。

2.2.8 樣品含量測定 精密稱取已知含量的清目膠囊內(nèi)容物適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制得供試品溶液，按上述色譜條件測定，計(jì)算含量。結(jié)果3批清目膠囊 (批號：060301、060906、061207)中綠原酸的含量分別為0.642 5、0.605 7、0.663 4 mg/粒。

3 討論

本文采用TLC法對方中綠原酸、秦皮甲素和秦皮乙素進(jìn)行定性鑒別，方法簡便，專屬性強(qiáng)。

綠原酸是一種對光敏感的物質(zhì)，見光容易分解。因此，在處理和檢測過程中，應(yīng)將其置于棕色量瓶中，盡量減少其暴露在光照下的時(shí)間。通過比較各種流動相比例，本試驗(yàn)采用乙腈∶0.01 mol/L磷酸溶液(用三乙胺調(diào)節(jié)pH=4.5)=8∶92效果更好。綜上所述，本文所建標(biāo)準(zhǔn)可以用于清目膠囊的質(zhì)量控制。

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[3]蘇祝成，葉立揚(yáng)，馮亞菲.杭白菊浸提液的不同萃取分離物對O2自由基清除作用研究[J].食品科學(xué)，1995，16(2)：7-9.

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