藥對黃連、吳茱萸對高血壓大鼠血壓和血漿ET、CGRP的影響

卜憲崢，吳華芹，胡元會，褚瑜光，宋慶橋，王師菡

高血壓病是一種以體循環(huán)動脈壓升高為主要臨床表現(xiàn)的全身慢性疾病，其發(fā)病率、致殘率及致死率均居高不下，嚴重危害人類健康和生活質量，積極探索高血壓的發(fā)病機制，尋求有效的治療方法是醫(yī)學界亟待解決的難題之一。本實驗觀察藥對黃連、吳茱萸對自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）血壓及血漿內皮素（endothelin，ET）、降鈣素基因相關肽（calcitonin gene－related peptide，CGRP）含量的影響，為中醫(yī)藥治療高血壓提供新思路。

1 材料與方法

1.1 動物 13周SHR，清潔Ⅱ級，24只，雌雄各半，正常 WKY大鼠8只，雌雄各半，體重280g±30g，由中國醫(yī)學科學院實驗動物研究所繁育場提供。

1.2 藥物及試劑 黃連，選用毛茛科多年生草本川黃連的根莖，吳茱萸，選自蕓香科植物吳茱萸的將近成熟果實。兩味生藥經鑒定均為正品，處方劑量為28g（大鼠用量為人的9倍），兩藥分按3∶1組成為連萸藥對組，硝苯地平片，每片10mg（北京益民藥業(yè)，批號：0501010）。ET、CGRP放免藥盒（北京華英生物技術研究所提供，批號：061202）。

1.3 儀器 BP－6動物無創(chuàng)血壓測試系統(tǒng)、BL－820通用8道生物機能實驗系統(tǒng)（均為成都泰盟科技有限公司）。SIGMA－3K15離心機（法國SIGMA）。GC－911－γ－放射免疫計數(shù)器（中國科技大學實業(yè)總公司）。

1.4 分組及給藥 24只SHR隨機分為模型組（Model組）、硝苯地平組（Nif組）、連萸藥對組（LY組），每組8只，以正常WKY大鼠8只為對照組（WKY），共4組，每組雌雄各4只。WKY組予生理鹽水以10mL／（kg·d）灌胃。Model組生理鹽水以10mL／（kg·d）灌胃。Nif組予硝苯地平溶液1mg·10 mL／（kg·d）灌胃。連萸藥對組予3∶1劑量配伍的連萸藥對濃縮液以10mL／（kg·d）灌胃。療程均為4周。

1.5 大鼠尾動脈壓測量 室溫恒定，保持在20℃±2℃，所有大鼠在BP－6動物無創(chuàng)血壓測試系統(tǒng)用尾部加壓法，正式測壓前，電熱加溫恒溫箱至37℃，然后選擇大小合適的大鼠固定套籠將大鼠固定于其中，并充分暴露大鼠尾部，將其固定在恒溫狀態(tài)下的測壓臺上，尾部套置紅外線測定裝置，待大鼠穩(wěn)定后測壓。在大鼠安靜狀態(tài)下，連續(xù)測收縮血壓3次，取平均值作為測壓結果。測壓過程中，動作要輕柔，避免引起大鼠躁動使血壓波動從而影響血壓測量結果。正式灌胃測量前每天尾部加壓測一次大鼠尾動脈血壓，讓大鼠適應每天將要進行的血壓測量的環(huán)境和刺激，然后在正式灌胃后每天同一時間測量大鼠血壓變化，比較大鼠灌胃前及灌胃4周末大鼠尾動脈收縮壓變化。

1.6 ET、CGRP含量測定 在第4周末每組的8只大鼠在麻醉狀態(tài)下進行實驗。以2%戊巴比妥鈉以40mg／kg體重的劑量麻醉處死，用5mL注射器取動脈血，迅速置于含10%EDTANa2100μL和100U抑肽酶試管中，混勻低溫離心，離心5min，分離出血漿，取上清液置于聚丙乙烯塑料試管中，所有樣本均于－70℃低溫冰箱中保存?zhèn)溆?。放免測定ET、CGRP的含量，在NSB管、標準管中分別注入緩沖液、測定物標準品、標本血漿，混勻，4℃放置15min，吸取上清液，測定各管沉淀的放射性計數(shù)（cpm），根據試劑盒公式計算血漿ET、CGRP濃度。

2 結 果

2.1 連萸藥對對SHR血壓水平的影響（見表1）與WKY組比較，SHR各分組灌胃前血壓水平明顯增高（P＜0.05）；與Model組比較，Nif組大鼠4周的血壓水平均明顯降低（P＜0.05）；連萸藥對組大鼠4周的血壓水平均明顯低與 Model組（P＜0.05）。

表1 連萸藥對對SHR血壓水平的影響（±s）mmHg

表1 連萸藥對對SHR血壓水平的影響（±s）mmHg

周后正常組組別 n 用藥前 用藥4 8 121.25±11.18 122.38±9.83模型組 8 203.88±13.391） 211.38±17.251）硝苯地平組 8 204.13±14.151） 168.13±11.862）連萸煎劑組 8 205.38±14.561） 170.63±12.472）與正常組比較，1）P＜0.05；與模型組比較，2）P＜0.05

2.2 連萸藥對對SHR血漿ET、CGRP含量的影響（見表2）與WKY組相比，Model組ET含量升高，CGRP含量降低（P＜0.05）；與Model組比較，Nif組和LY組大鼠血漿ET含量降低（P＜0.05），Nif組大鼠 CGRP含量升高（P＜0.05），而 LY組CGRP含量升高更明顯，與Model組比較，有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表2 連萸藥對對SHR血漿ET、CGRP含量的影響（±s）

表2 連萸藥對對SHR血漿ET、CGRP含量的影響（±s）

組別 n ET（pg／mL）CGRP（pg／mL）8 56.58±9.05 124.59±33.73模型組 8 85.52±12.881） 55.07±16.901）硝苯地平組 8 68.34±11.362） 80.45±21.902）連萸煎劑組 8 67.56±11.612） 91.65±28.272）3）與正常組比較，1）P＜0.05；與模型組比較，2）P＜0.05；與硝苯地平組比較，3）P＜0.05正常組

3 討 論

近年來，血管活性物質在高血壓的機制研究中越來越受到重視，已知ET是目前迄今為止最強的血管收縮劑［1］，而CGRP是目前已知體內最強的血管舒張神經肽［2］。高血壓患者血漿ET的水平高于健康成人，而CGRP的水平低于健康成人［3］。二者的濃度隨著高血壓病情的不同而相應變化，研究顯示高血壓I期患者ET和CGRP的濃度較正常人無明顯變化，而Ⅱ期、Ⅲ期變化顯著，隨高血壓病情發(fā)展ET升高，而CGRP隨之降低［4］。且二者存在此消彼長的關系，當作為具有血管舒張作用CGRP減少時，它抑制血管平滑肌增殖及抑制ET的釋放作用減弱，從而導致ET濃度升高［5］，而ET濃度升高導致平滑肌細胞Na＋內流引起Ca2＋內流的作用增強，對抗CGRP的作用增強［6］，導致血壓增高，增加了對靶器官的破壞作用。本實驗結果顯示，與WKY組比較，模型組中ET的含量明顯增加，而CGRP的含量顯著減少，在高血壓發(fā)病機制中，ET／CGRP的嚴重失衡是一個重要原因，與文獻報道相符［3－6］。

黃連、吳茱萸藥對是臨床治療高血壓的經驗組方，二者配伍具有良好的清心平肝，解郁化濕功效，既能清郁結之熱又無涼遏之弊，針對高血壓患者常見之肝火偏亢、心火旺盛、夾痰夾濕者具有很好的降壓療效。黃連、吳茱萸單味藥及其活性成分具有一定降壓作用［7，8］。本試驗證實黃連、吳茱萸3∶1劑量配伍的連萸藥對具有一定降壓作用，其降壓效果與西藥Nif相當。且研究發(fā)現(xiàn)該復方能明顯降低高血壓大鼠血漿ET含量，升高CGRP含量，調節(jié)兩者之間的失衡，這可能是其降壓的重要機制。

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［4］王勇，張亞光.高血壓病患者血漿內皮素與降鈣素基因相關肽變化的意義［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2005，15（8）：986.

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［6］Ashida T，Kawaao Y，Yoshimi H，et al.Effects of ouabaia and vera－pami1 on endothelia included contraction of meseateric artery is young spontaneously hyperteasive rats［J］.J Cardiovasc Pharmacol，1991，17（suppl7）：174－176.

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