幾種藥物制備糖尿病小鼠模型效果的比較

張雅琴 吳萍萍 向敏 肖洋

中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院糖尿病研究總院調(diào)查資料顯示，我國(guó)的糖尿病患者人數(shù)已達(dá)8000萬(wàn)左右，占世界糖尿患者群總數(shù)的五分之一，患病率居世界第二位［1］。胰島素抵抗和胰島功能受損是糖尿病發(fā)病機(jī)制中兩個(gè)重要環(huán)節(jié)［2］，為了深入對(duì)疾病的探討，我們必須依賴于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及模型，這需要我們繼續(xù)對(duì)該方面進(jìn)行進(jìn)一步的研究。本實(shí)驗(yàn)選用地塞米松、氫化可的松、四氧嘧啶和鏈脲佐菌素藥物配合高糖高脂飲食制備小鼠糖尿病模型，通過(guò)檢測(cè)血糖及胰島素水平變化，計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)評(píng)價(jià)這幾種藥物制備糖尿病模型的效果。目前糖尿病模型的制備研究較多，局限于綜述類，研究制備方法的多樣性和機(jī)制闡述，缺乏實(shí)際的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，該實(shí)驗(yàn)研究的意義在于為使用化學(xué)藥物誘導(dǎo)糖尿病動(dòng)物模型時(shí)選用何種藥物達(dá)到預(yù)期的理想造模效果提供精準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小白鼠30只(6～8周齡)，體質(zhì)量18～22 g雄性，購(gòu)自蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組及模型制備 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為五組，分別為空白對(duì)照組、地塞米松組、氫化可的松組、四氧嘧啶組和鏈脲佐菌素組，每組10只小鼠。空白對(duì)照組、四氧嘧啶組和鏈脲佐菌素組小鼠按36 mg/(kg·d)腹腔注射，地塞米松組和氫化可的松組小鼠按36 mg/(kg·d)肌內(nèi)注射，連續(xù)給藥30 d，分別于第10，20天和30天禁食8 h測(cè)定空腹血糖值，最后一次給藥前禁食，給藥后8 h內(nèi)眼眶采血收集血液標(biāo)本。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血糖、胰島素水平的檢測(cè)和胰島素抵抗指數(shù)的計(jì)算 實(shí)驗(yàn)小鼠分別于給藥的第10，20天和30天禁食8 h采取尾動(dòng)脈微量血，使用強(qiáng)生穩(wěn)豪倍易型血糖儀及血糖試紙測(cè)定空腹血糖值(FPG)。最后一次給藥模型制備結(jié)束后8 h內(nèi)眼眶采血收集血液標(biāo)本，4℃靜置半小時(shí)，吸取上層血清，使用小鼠胰島素水平檢測(cè)試劑盒ELISA測(cè)定空腹血清胰島素水平(FIN)，使用公式計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)HOMA-IR=［FPG(mmol/L)FIN(mIU/L)］/22.5。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS 10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)的形式表示。組間差異采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 小鼠第10，20天和30天空腹血糖值(FPG)，見表1。

2.2 小鼠空腹胰島素水平(FIN)及胰島素抵抗指數(shù)(HOMAIR)計(jì)算，見表2。

表1 五組小鼠第10、20、30天空腹血糖值(FPG)的比較

表2 五組小鼠空腹胰島素水平(FIN)及胰島素抵抗指數(shù)、胰島素敏感指數(shù)的比較

3 討論

糖尿病動(dòng)物模型的制備方法多種多樣，需根據(jù)研究目的和實(shí)驗(yàn)條件，合理地制備實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型［3］。目前常用的是藥物誘導(dǎo)的方法建立糖尿病動(dòng)物模型［4］。糖尿病成模效果的評(píng)價(jià)方法是造模研究的重要內(nèi)容，正常血糖-高胰島素鉗夾技術(shù)是目前評(píng)價(jià)體內(nèi)IR的金標(biāo)準(zhǔn)，然而該試驗(yàn)費(fèi)時(shí)費(fèi)力，胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)法評(píng)價(jià)胰島素抵抗與金標(biāo)準(zhǔn)明顯相關(guān)性，該法評(píng)價(jià)胰島素抵抗更優(yōu)于其他簡(jiǎn)單的測(cè)試方法，尤其適合于動(dòng)物模型評(píng)價(jià)基礎(chǔ)研究［5］。本實(shí)驗(yàn)中各種方法制備的小鼠均出現(xiàn)出現(xiàn)了明顯的多飲、多食、多尿和體重減輕(即“三多一少”)癥狀，與空白對(duì)照組相比，地塞米松組、氫化可的松組、四氧嘧啶組和鏈脲佐菌素組血糖水平有顯著升高，胰島素分泌、胰島素抵抗指數(shù)顯著升高，胰島素敏感指標(biāo)顯著降低，說(shuō)明各組均存在胰島素的大量分泌和對(duì)胰島素的敏感性下降。胰島素敏感指標(biāo)數(shù)據(jù)顯示，各組制備糖尿病模型的有效效果依次分別為鏈脲佐菌素、地塞米松、四氧嘧啶和氫化可的松。

［1］秦玉祥．丹參滴丸聯(lián)合腸溶阿司匹林治療160例糖尿病血脂紊亂患者的臨床觀察.中國(guó)醫(yī)藥指南，2010，8(3)：89-90．

［2］Whitcroft S，Herriot A.Insulin resistance and management of the menopause：a clinical hypothesis in practice.Menopause Int，2011，17(1)：24-28．

［3］劉微，李冀，盛波．胰島素抵抗動(dòng)物模型的研究進(jìn)展.中醫(yī)藥信息，2008，25(6)：9-11．

［4］覃雯，唐愛華．糖尿病實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物模型研究概況．時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2007，18(6)：1511-1512．

［5］王玉中，張志國(guó)，孫朝輝．2型糖尿病大鼠模型的建立與評(píng)價(jià).毒理學(xué)雜志，2009，23(6)：476-478．