“CK-MB”測定的干擾現象及實驗對策

彭 蘭,張 娥,萬 芳,鄒志寶

(興山縣人民醫院,湖北 興山 443711）

用免疫抑制法檢測血清CK-MB活性,觀察其活力單位及與CK的比值關系作為診斷急性心肌梗死的相對特異性指標、預測冠狀動脈再通的治療效果和觀察病情變化等,已被臨床廣泛應用。一般情況下正常人CK-MB主要存在于人體心肌細胞內,血清中CK的存在形式主要是CK-MM,只有少量CK-MB,不超過總活性的5%,心肌梗死發生時最高值也不超過38%。但在日常檢測工作中經常發現臨床血清標本中CK-MB檢測值與理論值不符合,最多見的就是CK-MB檢測值大于總CK檢測值的現象。現就肌酸激酶及其同工酶的組成、臨床意義和檢測的方法學等方面簡要分析其原因并就解決方法提出建議。

CK-MB存在于心肌細胞胞漿中,CK-MB作為診斷急性心肌梗塞或心肌壞死的特異時指標,在心肌壞死癥狀發作4-5 h達正常上限,12-24 h達高峰,72 h逐步恢復。基層實驗室多采用免疫抑制法測定CK-MB,對不同病程的心肌病提供較特異診斷,本室通過3組不同人群的CK-MB測驗結果發現,采用免疫抑制法測定CK-MB指標有假性增高現象,與臨床體征明顯不符,現先從實驗原理探討;免疫抑制法測定CK-MB是用抗體將M亞基抑制,測定

B亞基,結果乘以2即為CK-MB活性,當血清中出現文獻報道中的巨CK或CK-BB及其它成份時,由于它們不受抗M亞基抗體抑制,其活性已完全測出,再乘以系數2,就可能出現CK-MB升高或高于總CK的現象,造成CK-MB結果失真,本室從1999.9-2000.5共收集71份血清測定CK-MB及總CK活性,現將實驗中出現的異常結果提出探討。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標本來源 收集10份本院血庫健康獻血員血清,收集56份本院心內科病員血清,收集15份本院惡性腫瘤病員血清。

1.1.2 試劑及儀器 上海長征公司提供的凍干粉劑,CB-171半自動化分析儀。

1.2 方法

1.2.1 正確收集血清標本,防止溶血,從血清采集到測定完畢在30 min以內。

1.2.2 采用免疫抑制法測CK-MB及酶偶聯速率測總CK。

2 結果與討論

2.1 3組人群血清中CK-MB,總CK的測定結果見表1。

表1 3組人群血清CK-MB、總CK測定結果

2.2 本室對10名獻血員進行CK-MB檢測,發現一例CK-MB值異常升高,達總CK活性的61%,經體檢證實為健康人員,在56名心內乎病員血清中,有16例CK-MB結果升高,基中有兩份大于總CK活性,數值為 264U/L,272 U/L;其余平均值達總CK35%。經臨床追蹤調查,實驗診斷與臨床體征明顯不符,實驗結果存在干擾成份;在15名惡性腫瘤血清中有7份血清CK-MB結果升高,其中一份大于總CK,數值為269 U/L。其平均值達總CK活性的22.3%,臨床診斷排除心肌病,確定為乳腺癌2例,卵巢癌1例,肺癌2例,胃癌 1例,肝癌1例。在56名心內科病員血清中有28份標本CK-MB和總CK結果同時升高,經臨床證實,均系心肌病患者,具相應的臨床體征,在15份惡性腫瘤病員的血清中有一例CK-MB及總CK結果同時升高,臨床診斷為肺癌合并心肌病,本室測定的總CK單項活性增高數值范圍介于242-305 U/L,本文未做分析。

2.3 通過表1數據表明,采用免疫抑制法測定CKMB實驗中存在干擾成分,基于基層實驗條件有限,具體干擾成分的確認實驗無法進行,現將部分文獻資料提示的干擾產生分析原因如下,以共商榷:

血清中存在的巨CK1,巨CK1是一種CK同工酶抗原與自身抗體的復合物,最多的CK-BB與IgG或IgA的復合物,也有少數CK-MM與IgG或IgA的復合物,巨CK1可至CK-MB假性增高,對有心肌缺血的患者,易引起錯誤的判斷,故在對臨床解釋結果應高度注意。

巨CK2是一種低聚的線粒體CK,又稱CKMt,存在細胞線粒體膜上,當線粒體崩解時,線粒體膜的小碎片進入血液,故ckmt呈低聚狀態,CK-Mt的抗原性與CKM和CKB不同,故抗M抗體不能抑制CK-Mt,形成CK-MB的假陽性。較多文獻認為,巨CK2與惡性腫瘤密切相關,根據本室15例惡性腫瘤病員血清檢測CK-MB有7例結果升高的情況,進一步證實,在惡性腫瘤中血清存在特殊干擾成份,可致CK-MB假性升高。用免疫抑制法測定CK-MB時,如出現CK-MB高于總CK的現象時,就要懷疑有巨CK的存在。多見于一些自身免疫病患者血清。進一步進行鑒定方法有:

①瓊脂糖凝膠電泳分析。可疑血清進行瓊脂糖凝膠電泳結合熒光染色掃描分析,發現巨CK1位于CK-MM與CK-MB之間,巨CK2位于CK-MM的陰極側。

②熱失活法。將可疑血清置45℃20 min測定CK活性,發現CK-BB和CK-MB幾乎完全失活,而CK不受影響。

③免疫學結合電泳法。將可疑血清先與抗人IgG或IgA的抗血清進行混合,置4℃過夜,離心取上清液進行CK同工酶電泳。觀察與Ig反應前后電泳區帶的變化。巨CK2無任何變化,但巨CK1則不同。只要與相應的抗IgG或IgA抗血清發生反應后,原有的異常帶減弱或消失,則提示巨CK1的存在,其形成與該免疫球蛋白有關。

④免疫學測定。用FEIA或CLIA等技術直接測定CK-MB質量,觀察有無非CK-MB存在。目前建議在急性心肌梗死的診斷中建議用肌鈣蛋白如cTnI/cTnT,如用CK-MB則建議測定CK-MB質量(CK-MBmass）,不要用免疫抑制法進行測定。

CK-BB,正常血清中CK-BB極少,免疫抑制測定CK-MB方法設計的前提是將CK-BB忽略不計,但當血清CK-BB增高,而用免疫抑制法測定CK-MB時,由于BB不受限制,其活性100%測出,且還乘上系數2,導致成倍的擴大誤差,出現CK-MB等于或高于總CK活性的反常現象。

腺苷酸激酶(AK）,AK在紅細胞和血小板中大量存在,當樣本溶血或血小板未能去除的情況,AK或CK參與NADP轉化成NADPH,造成假陽性。

在臨床實驗中,因免疫抑制法快捷,價格適中,較適宜廣大基層醫療實驗應用,又因是廣泛應用中出現眾多的“干擾”現象,使CK-MB結果部分失真,針對這種情況,本室認為,當CK-MB/總CK超過30%或50%以上,應考慮血清中有無巨CK或CK-BB存在,通常出現巨CK者往往是年齡較大的患者,女性較多,心血管疾病,惡性腫瘤,風濕病,對此合理準確地解釋CK-MB實驗指標及采用實驗特異性更高的檢測項目,在臨床心肌梗死的診斷至關重要。

[1]王明雁,許紹輝.血清CK-MB瓊脂糖電泳最適條件選擇[J].上海醫學檢驗雜志,1991,6(4）:269.

[2]張海晨,宋云霄,鐘 琦,等.血清CK-MB活力假性增高8例分析[J].診斷學理論與實踐,2005,3:236.

[3]陸奎英.免疫抑制法檢測血清肌酸激酶同工酶活性高于總肌酸激酶活性的原因探討[J].國際檢驗醫學雜志,2006,8:748.