Survivin、Ki-67核抗原在宮頸癌及宮頸上皮內瘤變中的表達意義

田 琦,呂勝軍

(1.吉林省腫瘤醫院 放療科,吉林 長春 130012;2.吉林省肝膽病醫院 電診科,吉林 長春 130062）

Survivin是目前發現的最強細胞凋亡抑制因子,其主要的生物學功能是抑制凋亡,參與細胞周期的調控以及參與血管的生成[1-3]。Ki-67是一種非組蛋白核抗原,參與細胞有絲分裂,檢測Ki-67表達,反映腫瘤細胞的增殖狀態。本研究采用免疫組化S-P法,在蛋白水平檢測Survivin、Ki-67的表達,旨在探討二者與宮頸癌發生、發展的相關性。

1 材料與方法

1.1 材料來源

選擇2009年5月-2010年8月吉林省腫瘤醫院病理科存檔的手術切除宮頸鱗癌26例,患者年齡28-71歲,平均年齡46歲,術前未接受過其它治療,另外收集活檢或手術切除的宮頸上皮內瘤變(CIN）標本78例,其中CINⅠ28例,CINⅡ23例,CINⅢ27例,患者年齡23-75歲,平均年齡41歲,因子宮急性病變行子宮切除手術的正常宮頸12例作為對照。

1.2 主要試劑

Survivin兔抗人多克隆抗體購自福州邁新生物技術有限公司,Ki-67為ZM-0166單抗,工作液,由北京中杉金橋生物技術有限公司提供。

1.3 方法

所有標本經10%福爾馬林固定,常規石蠟包埋后連續切片,每例標本行HE染色及S-P免疫組化染色,光鏡下觀察。免疫組化步驟按照S-P試劑盒說明書進行,一抗濃度為1∶100,由福州邁新技術有限公司及北京中杉金橋技術有限公司提供的陽性對照片作陽性對照,以PBS代替一抗作為陰性對照。

Survivin陽性表達判定標準:Survivin陽性表達定位于細胞漿,偶見于細胞核,細胞漿或細胞核呈現淡黃色、棕黃色或棕褐色顆粒為陽性,隨機觀察5個高倍鏡下視野,陽性細胞≤5%為0分,6-25%為1分,26-50%為2分,51-75%為3分,＞75%為4分,陽性強度黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分,兩項積分相乘,0分為陰性(-）,1-4分為弱陽性(+）,5-8分為中度陽性(++）,9-12分為強陽性(+++）。

Ki-67陽性表達判定標準:Ki-67陽性表達于細胞核,呈現棕黃色顆粒,或細胞核、細胞漿同時呈現棕黃色,于40倍光鏡下計數100個細胞,每例標本計數1 000個細胞,Ki-67指數=陽性細胞數總和/1 000×100%。

1.4 統計學方法

采用卡方檢驗、t檢驗及相關分析。

2 結果

2.1 宮頸癌、各期別CIN以及正常宮頸組織中Survivin的表達情況

Survivin在宮頸癌、宮頸上皮內瘤變組織中有著豐富的表達,陽性表達定位于細胞漿,偶見于細胞核,在正常宮頸組織中不表達。Survivin表達陽性程度:宮頸癌高于CIN(χ2=6.42,P＜0.05）,CIN高于正常宮頸組織(χ2=12.52,P＜0.05）,各期別CIN中Survivin的表達隨CIN級別的升高而提高,CINⅢ高于CINⅡ(χ2=4.52,P＜0.05）,CINⅡ高于CINⅠ(χ2=4.26,P＜0.05）,正常宮頸組織與CINⅠ間及CINⅢ與宮頸癌間差異無統計學意義(P＞0.05）。

表1 宮頸癌、各期別CIN以及正常宮頸組織中Survivin的表達情況

2.2 宮頸癌、各期別CIN以及正常宮頸組織中Ki-67指數

Ki-67陽性表達于細胞核,呈現棕黃色顆粒,在宮頸癌及CIN中有豐富的表達,在正常宮頸組織中呈弱陽性表達。Ki-67指數:宮頸癌高于CIN(t=6.13,P＜0.05）,CIN高于正常宮頸組織(t=5.82,P＜0.05）,CINⅢ高于CINⅡ(t=6.42,P＜0.05）,CINⅡ高于CINⅠ(t=2.35,P＜0.05）,宮頸癌、各期別CIN的Ki-67指數較正常宮頸明顯增加,差異有統計學意義(P＜0.05）。

表2 宮頸癌、各期別CIN以及正常

2.3 宮頸癌及各期別CIN中Survivin的表達強度與Ki-67指數間呈正相關(P1＜0.05,r1=0.92;P2＜0.05,r2=0.96）。

3 討論

宮頸癌的發生、發展是一個逐步演變、進展的復雜而連續的過程,與多種癌基因和抑癌基因的表達、調控及細胞凋亡密切相關,宮頸上皮內瘤變(cervical intraepithelial neoplasia CIN）是宮頸癌的癌前病變,發展為宮頸癌是一連續而漫長的過程,大約需要10年左右的時間,尋找并發現宮頸癌發生、發展過程中相關的敏感指標,對阻斷宮頸癌癌前病變的發展,減少宮頸癌的發生,幫助臨床工作中早期診斷、早期治療,判斷其轉歸,都有著重要的指導意義。

生存素(Survivin）是至今為止所發現的作用最強的凋亡抑制因子,Survivim基因定位于人體17號染色體及促進血管生成等方面的作用,具有抑制凋亡、調節細胞分裂的雙重功能,在胚胎時期、胎兒發育過程中以及未分化成熟的組織中表達,在正常成人組織中基本不表達,當細胞發生惡性轉變時呈現再次表達,Survivin在多數腫瘤組織中有著較高表達[4]。Survivin的生物學功能為抑制凋亡、參與細胞周期調控以及參與血管生成的作用。其表達有著細胞周期的依賴性,G1期基本不表達,S期弱表達,G2/M期呈強烈高表達,Survivin的過度表達,導致細胞加快向S期轉換,抑制G1期靜止,幫助腫瘤細胞逃離細胞周期的檢測點,實現異常增殖[5]。有助于細胞逃避細胞周期G2/M基因的檢測點,通過發生有絲分裂,實現的異常增殖和分化,加一方面,通過減少血管內皮的細胞凋亡,促進腫瘤血管的形成[5]。

本研究中發現,Survivin在正常宮頸組織中不表達,在宮頸癌的癌前病變CIN中,隨著CIN級別的增加,表達逐漸增強,在宮頸癌中高表達,說明Survivin在正常宮頸至癌前病變CIN,直至最終發展為宮頸癌的過程中,呈現一個漸進表達的過程,與腫瘤細胞的生長失控有著密切的關系,這在其它相關研究中也得到證實[6]。

Ki-67是一種反映細胞增殖的核抗原基因,是細胞增殖活性的指標,定位于人第10號染色體,維持細胞增殖活性起著重要的作用,Ki-67抗原在G1、S、G2/M期均有合成,反映細胞的增殖活性,對預測癌前病變向惡性病變轉化過程有著重要的參考價值,對惡性腫瘤的早期診斷、早期治療有著指導意義。

本研究Ki-67的表達,在結果顯示,正常宮頸組織、CIN和宮頸癌中的陽性表達有著顯著差異,表明宮頸癌的發生、發展與細胞增殖有著密切的關系。本研究結果還顯示,宮頸癌及CIN中Survivin的陽性表達強度與Ki-67指數間呈現正相關,提示Survivin一方面抑制細胞的凋亡,另一方面促進細胞的惡性增殖,通過抑制細胞凋亡及促進細胞增殖的雙重作用,促進宮頸癌的發生、發展。Fukada[7]等認為 celecoxib(環氧化物酶-2抑制劑）具有抑制Survivin活性的作用,從而抑制Survivin蛋白和mRNA的表達,使Survivin表達下調,可能成為宮頸癌靶向治療的新思路[8]。

[1]Siripong P,Hahnvajanawong C,Yahuafai J,et al.Induction of apoptosis by rhinacanthone isolated from Rhinacanthus nasutus roots in human cervical carcinoma cells[J].Bio Pharm Bull,2009,32(7）:1251.

[2]顧桂芳,張美云.宮頸癌組織中Survivin基因表達的臨床意義[J].南京醫科大學學報:自然科學版,2008,28(2）:232.

[3]Duffy MJ,Donovan N,Brennan DJ,et al.Survivin:a promising tumor biomarker[J].Cancer Lett,2007,249(1）:49.

[4]夏云金.凋亡抑制因子Survivin的生物學功能及其在腫瘤與正常組織中表達的意義[J].重慶醫學,2005,2(34）:289.

[5]Shinjyo T,Kurosawa H,Miyagi J,et al.Ras-mediated upregulation of Survivin expression in cytokine-dependent murine pro-Blym-phocytic cell[J].Tohoku Journal of Experimental Medicine,2008,216(1）:25.

[6]Ai Z,Yin L,Zhou X,et al.Inhibition of Survivin reduces cell proliferation and induces apoptosis inhuman endometrial cancer[J].Cancer,2006,107(4）:746.

[7]Fukada K,Takahashi-Yanaga F,Sakoguchi-Okada N,et al.Celecoxib induces apoptosis by inhibiting the expression of Survivin in HeLa cell[J].Biochem Biophys Res Commun,2007,15(1）:1166.

[8]Lu S,Zhang B,Wang Z.Expression of Survivin,cyclinD1,P21(WAF1）,caspase-3 in cervical cancer and its relation with prognosis[J].Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci,2005,25:78.