EGCG對腎間質纖維化的干預及機制分析

黎映靜,劉星海

(深圳市龍崗區橫崗人民醫院,廣東深圳 518115）

腎小管的間質纖維化為腎臟慢性疾病的發展終歸,也是終末期腎功能出現衰竭的原因,其纖維化的病變程度嚴重的影響了腎功能的情況,所以尋求改善和干預其纖維化的方法有著重要的臨床意義[1]。近年來轉化生長因子在纖維化的病變中作用已被肯定,被稱為纖維化的發展的重要決定因子[2],而綠茶中的兒茶素沒食子酸酯(EGCG）抗氧化的作用最為有效,是重要的非酶抗氧化劑。本文通過動物實驗的方法分析了EGCG對大鼠的神纖維化的保護作用和機制,現報道如下。

1 資料和方法

1.1 對象和材料選取30只雄性SD大鼠為研究對象,隨機分為3組,假手術組、梗阻組、ECGC組各10只,3組大鼠術前體重差異無統計學差異,均證實為健康大鼠。TGF-β免疫化試劑盒購自上海豐翔生物科技有限公司,EGCG試劑為本實驗室自行提供。

1.2 模型制作梗阻組及EGCG組行單側的輸尿管結扎術,乙醚對大鼠麻醉之后,75%的乙醇消毒,腹正中偏左切口,切開皮膚及腹腔,對腎臟及輸尿管游離,組織鉗托起左側輸尿管的中段,以止血鉗夾住后,4-0絲線自兩端行結扎,結扎部位在腎盂的近端及遠端。兩結扎點中點行剪斷,之后縫合皮膚。假手術組采用相同入路分離輸尿管,但不行結扎。假手術組及梗阻組在術前1 d生理鹽水灌胃,EGCG組給予EGCG灌胃,劑量均為20 mg/(kg?d）,連續 3 d。EGCG組術后第7 d同劑量EGCG注射液靜脈注射。

1.3 檢測方法術前,術后2 d、4 d、6 d、8 d測量大鼠體重、血肌酐值、24 h尿蛋白量、尿糖定性。術后8 d處死大鼠后左腎組織HE染色分析腎組織纖維化情況,免疫組化法測定隨即10高倍鏡的視野內免疫組化(+）的計數,半定量分析以(+）細胞數在視野中的平均百分比計算[3]。

1.4 統計學方法數據均用SPSS 17.0統計分析軟件包進行處理。計量數據以x-±s表示,采用t檢驗,計數數據采用 χ2檢驗。且P＜0.05為對比差異有統計學意義。

2 結果

2.1 體重改變3組大鼠術前及術后8 d內體重變化情況見表1,組內比較,術前及術后8 d各組間體重變化均用統計學差異(P＜0.05）,組間比較,3組大鼠術前體重無明顯差異(P＞0.05）,術后8 d,假手術組體重＞ECGC組＞梗阻組,但差異無統計學差異。

表1 3組大鼠術前及術后8 d內體重變化情況(x-±s,g）

2.2 TGF-β 比較3 組大鼠腎間質 TGF-β(+）細胞計數比較見表2,由此可見3組大鼠中EGCG組TGF-β表達明顯低于梗阻組,而EGCG組低于假手術組,差異均用統計學差異(P＜0.05）。

2.3 病理學差異術后第8天HE染色顯示可見假手術組的結構維持正常,其腎間質未見明顯改變,腎小管的上皮細胞整齊排列,保持完整的細胞結構,小管間的間隙緊密,其小管的間質未見炎性細胞的浸潤,基底膜顯示光滑連續;梗阻組的間質存在大量的炎性細胞的浸潤,纖維組織明顯增生,腎小管部分萎縮,管腔出現閉塞或者擴張及壞死,小管的基底膜出現不同程度的斷裂及增厚,且小管壁明顯變薄,小管的上皮細胞的結構嚴重破壞;EGCG組的間質有少量炎性細胞的浸潤,纖維組織輕微增生,其腎小管的擴張較輕,腎小球萎縮輕,且腎小囊有所擴張,保留了部分正常小管及小球結構。

表2 3組大鼠腎間質TGF-β(+）細胞計數比較(x-±s,%）

3 討論

慢性的腎病的在進展中的病理變化主要表現在腎小球的硬化、腎小管的萎縮以及腎間質的纖維化,其中腎功能損害的程度和腎臟的纖維化的病變程度有著重要的關系[4]。在慢性腎病所引發的腎小管的上皮細胞凋亡及腎間質的炎性細胞浸潤、纖維細胞聚集的過程中,均有著較多的促纖維化因子參與,細胞外的基質生成逐步增多、而降解度則明顯減少,從而產生了腎間質的纖維化,腎功能也就出現了嚴重的受損。TGF-β各器官的組織纖維化過程之中發揮著重要作用,目前大多數的學者認為其是纖維化的形成和發展啟動樞紐[5],為關鍵性的細胞因子,特別是腎間質的纖維化的程之中TGF-β起著重要的作用,其可以促進腎小球的系膜細胞出現大量增殖,系膜的基質出現沉積,并誘導了腎小管的上皮細胞-間質細胞出現轉分,從而在參與到腎間質的纖維化的進程之中。

茶多酚是從為茶葉內提取的天然的多酚類的復合物,主要的生理活性包括抗腫瘤、抗氧化、清除自由基、調節心血管的作用,有著較強的抗菌、抗病毒、抗輻射的作用。茶多酚內的主要成分是兒茶素類,其中EGCG是含量最高的有效成分,也是最強的抗氧化作用成分,在體內外均能夠有效的清除一氧化氮、自由基等,以此提高了大鼠體內的超氧化物歧化酶以及谷胱甘肽類過氧化物酶的活性,從而降低了脂質過氧化及脂褐質的含量,并通過和金屬離子的絡合發揮了其較強的抗氧化的活性。有動物實驗表明[6],EGCG能夠通過對腎損害的大鼠體內的氧自由基的清除作用來起到對脂質的過氧化作用的抑制,同時也起到了促纖溶、抗凝的作用,改善了腎局部的血流動力,從而使尿素氮降低,延緩了腎臟的病理進行性的損害。

綜上所述,本文通過動物實驗的方法分析了EGCG對大鼠的神纖維化的保護作用和機制可以看出,EGCG在大鼠動物試驗中可見EGCG對大鼠腎臟纖維化形成抑制作用明顯,能夠有效的降低TGF-β的表達。

[1]徐志泉,易著文,何小解.沒食子兒茶素沒食子酸酯對大鼠腎衰的治療研究進展[J].現代醫藥衛生,2006,22(16）:247l.

[2]Forino M,Toregrossa R,CeolM,et al.TGF-betal induces epithelia-mesenchymal transition,but not myofibr oblast transdifftrntiation of human kidney tubularep ithelial cells in primary culture[J].Int J Exp Pathol,2006,87(3）:197.

[3]何小解,易著文,盧向陽,等.兒茶素對腎病綜合征大鼠療效研究[J].腎臟病與透析腎移植雜志,2002,11(4）:342.

[4]馮江超,邵志成,龔雨順,等,沒食子兒茶素沒食子酸酯對大鼠腎間質纖維化的影響及機制探討[J].川北醫學院學報,2009,24(6）:523.

[5]廖 明,李 彥,舒 偉,等.雞尾酒療法對大鼠肝星狀細胞的增殖及Ⅰ型膠原、TI MP-1mRNA表達的影響[J].世界華人消化雜志,2010,18(9）:932.

[6]Inagaki Y,Higashi K,Kushida M,et al.Hepatocyte growth factor suppresses profibrogenicsignal transduction via nuclearexport of Smad3with galectin-7[J].Gastroenterology,2008,134:1180.